李 均

(射洪縣畜牧食品局太乙畜牧獸醫(yī)站，629211)

雞傳染性喉氣管炎（AvianInfectiousLaryngotracheitis，AILT）是一種接觸性、急性上部呼吸道傳染性疾病，是由傳染性喉氣管炎病毒引發(fā)的。雞傳染性喉氣管炎會導(dǎo)致蛋雞的產(chǎn)蛋率下降，嚴(yán)重者則會應(yīng)窒息而出現(xiàn)死亡。

1 材料與方法

1.1 材料

隨機選取6例患有雞傳染性喉氣管炎癥狀的病雞作為研究對象，采取常規(guī)實驗室方法對病雞的癥狀進(jìn)行確診。并隨機選取6例健康雞作為對照。所使用的試驗器皿、實驗儀器主要包括：三角燒杯、模具、玻璃板、打孔器、微量加樣器、滴管、玻璃攪拌、石蠟切片機、恒溫箱、離心機、烘片機、攤片機等。所使用的試劑主要包括：巴比妥緩沖液、磷酸鹽緩沖液、酒精溶液、青霉素、鏈霉素、傳染性喉氣管炎病毒陽性血清、傳染性喉氣管炎陰性血清、蘇木素伊紅染液、石蠟二甲苯、瓊脂糖以及雞胚絨毛尿囊膜等。

1.2 方法

1.2.1 瓊脂免疫擴(kuò)散試驗

對病雞的氣管粘膜、喉結(jié)粘膜及分泌物進(jìn)行采樣，按1:5的比例將其放置到磷酸鹽緩沖液中（pH值為7.2），對其進(jìn)行研磨，最終成為勻漿，對其進(jìn)行3次以上的解溶。之后分別加入適當(dāng)?shù)那嗝顾?、鏈霉素。在溫度?攝氏度的冷藏室中放置4小時，之后取出放到離心機內(nèi)進(jìn)行20分鐘的離心處理，速度每分鐘為3700轉(zhuǎn)，取上清液作為病毒分離材料。遵循實驗室的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，制作病毒抗原。將分離材料通過使用雞胚絨毛尿囊膜制備成抗原，再將傳染性喉氣管炎病毒陽性血清、傳染性喉氣管炎陰性血清分別與抗原放到0.45摩爾每升pH值為7.2的巴比妥緩沖液所制備的百分之一的瓊脂板上。按常規(guī)方法依次進(jìn)行打孔與加樣，之后再將其放置到37攝氏度的恒溫箱中使其慢慢進(jìn)行擴(kuò)散反應(yīng)。24小時后觀察實驗結(jié)果。

1.2.2 制作病理組織石蠟切片

對病雞的喉結(jié)、氣管進(jìn)行采樣并按照相關(guān)操作標(biāo)準(zhǔn)制作成石蠟切片。具體步驟如下：第一，將采樣放置到濃度為百分之四的甲醛溶液中，對喉結(jié)、氣管組織進(jìn)行固定，采用梯度酒精脫水法對其進(jìn)行脫水處理，使用二甲苯進(jìn)行透明處理，再將其包埋到60攝氏度的石蠟中，將石蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片處理，采用H.E.染色方法對石蠟切片進(jìn)行染色。分別在100倍光學(xué)顯微鏡、400倍光學(xué)顯微鏡下觀察病理組織變化，并進(jìn)行詳細(xì)記錄。

2 結(jié)果

2.1 實驗結(jié)果

觀察結(jié)果顯示：陽性血清與抗原間出現(xiàn)了一條比較清晰的沉淀線。陰性血清與抗原間沒有發(fā)生反應(yīng)沉淀，由此可判定出該病毒為雞傳染性喉氣管炎病毒。在光學(xué)顯微鏡觀察下，正常粘膜層組織細(xì)胞上層纖毛排列整齊、管粘膜、粘膜下層以及外膜各層清晰。而病變氣管粘膜上皮組織脫落、壞死有的出現(xiàn)腫脹現(xiàn)象，還大量滲出纖維素性物質(zhì)及炎性細(xì)胞侵潤，粘膜上層纖毛萎縮、紊亂，粘膜下層血管出血導(dǎo)致黏膜層間界線比較模糊。

如圖所示，中間孔為抗原，1-6號孔分別為：陰性血清、陽性血清陽性血清、陽性血清、陽性血清、陽性血清。

2.2 觀察結(jié)果

在光學(xué)顯微鏡的觀察下，正常喉結(jié)粘膜完整，粘膜細(xì)胞、表面纖毛整齊排列，粘膜層腺體結(jié)構(gòu)也比較明顯。而喉結(jié)粘膜病變條件下上皮細(xì)胞脫落、壞死、崩解，粘膜層細(xì)胞比較疏松，對原有腺體結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了破壞，其喉結(jié)組織結(jié)構(gòu)、氣管組織結(jié)構(gòu)均會有比較明顯的膨脹、腫大及脫落現(xiàn)象出現(xiàn)，還會伴有炎性浸潤現(xiàn)象。

3 討論

喉結(jié)、氣管部位是雞傳染性喉氣管炎的主要病變位置，其主要的臨床癥狀有呼吸困難、用力咳嗽、帶有喘鳴聲、發(fā)出濕性啰音以及盡力張嘴呼吸等，嚴(yán)重者會咳出帶血粘液甚至血塊。隨著養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，雞養(yǎng)殖成為農(nóng)村人員的重要經(jīng)濟(jì)來源之一，雞傳染性喉氣管炎具有接觸性傳染性，導(dǎo)致蛋雞的產(chǎn)蛋率下降，嚴(yán)重者則會應(yīng)窒息而出現(xiàn)死亡，從而給養(yǎng)雞戶帶來了非常大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，加強對雞傳染性喉氣管炎的防治具有一定的必要性。

[1]張濤杰,王聰,阿依木古麗,扎西英派.雞傳染性喉氣管炎的病理組織學(xué)觀察[J].西北民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2015,01:43-47.

[2]石玉祥,張登榮,王雪敏,王哲,王艷梅.雞人工感染傳染性喉氣管炎病毒后氣管病理組織學(xué)觀察[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,29:12710-12711.