羅永成

摘 要：從患病草魚的病灶及肝、脾、腎分離、純化，得到菌株BTBZ-1410，該菌株革蘭氏染色為陰性。經生化試驗檢測菌株BTBZ-1410為一種黏細菌（Myxococcus）。將培養(yǎng)的菌株BTBZ-14制成10×109菌落形成單位/毫升的菌懸液，并以0.2毫升/尾進行背部肌肉感染，感染草魚8小時后開始發(fā)病，其癥狀與草魚白頭白嘴病的臨床癥狀相符，生化試驗與菌株BTBZ-14一致。試驗結果表明草魚白頭白嘴病的病原為黏細菌（Myxococcus）。

關鍵詞：草魚；白頭白嘴?。徊≡蛛x鑒定

草魚是我國四大家魚之一，一直是我國淡水養(yǎng)殖的重要品種。然而，在養(yǎng)殖過程中，疾病卻成為草魚養(yǎng)殖中主要障礙之一。白頭白嘴病是危害夏花草魚的嚴重病害，發(fā)病范圍廣，傳播速度快，死亡率高，給我國淡水養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經濟損失。白頭白嘴病的特征，在水中能明顯看到“白頭白嘴”的癥狀，撈出水面癥狀不明顯。病魚口唇部至眼部皮膚潰爛，呈白色絮狀，病變造成口部運動障礙，阻礙正常呼吸，體表癥狀嚴重的病魚從頭頂部至眼周充血，表現為“紅頭白嘴”。目前，對白頭白嘴病病原分離鑒定的研究很少，本研究從病魚病灶處采取病料，并進行病原菌的分離與鑒定，旨在確定細菌性白頭白嘴病的病原，為該病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

病魚采自丹東東港某養(yǎng)殖場。普通瓊脂平板及鮮血培養(yǎng)基自制。培養(yǎng)基配制及生化試驗所用藥品均為分析純，購自北京康潤生物有限公司。

1.2 病原分離

將具有典型癥狀的病魚，用滅菌生理鹽水沖洗體表后，對體表及病灶用75%酒精消毒，用接種環(huán)取其病灶及肝、脾、腎劃線接種于普通瓊脂培養(yǎng)基上，挑選優(yōu)勢菌落進行純化培養(yǎng)。

1.3 病原菌形態(tài)的觀察及細菌學檢查

將純化的細菌置于培養(yǎng)皿內25℃培養(yǎng)24小時，觀察其生長狀況、菌落形態(tài)及其溶血特性等，并采用革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察。

1.4 生化試驗

將培養(yǎng)的菌落分別接種到含有各種鑒定試劑的生化試驗微量鑒定管中，并進行相關生化試驗。試驗項目有明膠液化、葡萄糖、淀粉、酪氨酸脫羧酶、分解纖維素、還原硝酸鹽、吸收拘櫞酸鹽、吲哚試驗、硫化氫試驗、分解幾丁質、分解七葉靈、過氧化氫酶試驗、分解酪素、溶解死細菌。接種到上述各生化試驗微量鑒定管后，置于25℃培養(yǎng)2～3天觀察結果。

1.5 回感試驗

將分離到的草魚白頭白嘴病疑似菌株制成2×109菌落形成單位/毫升菌懸液；將制成的菌懸液及生理鹽水按0.2毫升/尾，注射到試驗組及對照組草魚背鰭下方的背部肌肉中。將試驗組草魚與對照組草魚隔離飼養(yǎng)，正常投喂飼料，連續(xù)觀察5天，對發(fā)病草魚情況進行記錄并對其進行解剖檢查、病原菌分離。

2 結果與分析

2.1 病原分離與純化

通過病原菌的分離與純化，得到菌株BZ-1410，在普通瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)發(fā)現菌落較小，呈圓形且表面光滑，呈半透明的露珠狀；在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)發(fā)現菌落生長茂盛，呈乳白色、半透明、圓形，表面突起較明顯，周圍形成1毫米左右的溶血環(huán)。

2.2 生化試驗鑒定

菌株BZ-1410，革蘭氏染色陰性。生化試驗結果見表1，結果表明菌株BTBZ-1410為一種黏細菌（Myxococcus）。

2.3 回感試驗結果

將菌株BTBZ-1410接種試驗草魚，試驗組草魚在8小時后開始發(fā)病，病魚自吻端至眼球的一段皮膚潰爛，口張閉失靈而造成呼吸困難，表現白頭白嘴癥狀。病魚表現精神沉郁，反應遲鈍，離群獨游。隨著病程發(fā)展，病變逐漸加重，病魚不僅是眼、鰓、口腔、體表等部的表皮組織出現白色絮狀物，個別病魚的顱頂和眼部周邊表現充血、腫脹的現象而呈現“紅頭白嘴”癥狀，與臨床癥狀相符。分離病魚病原菌并進行生化試驗檢測，其結果與表1相符。

結果表明，黏細菌（Myxococcus）為草魚白頭白嘴病的病原菌。

3 討論

草魚白頭白嘴病是我國比較常見的疾病，該病對于夏花草魚影響非常嚴重，這主要是因為夏花草魚個體處在發(fā)育期間，免疫系統發(fā)育不完全，由于白頭白嘴病是通過表皮侵染的途徑對草魚進行感染，而這個時期的魚苗體表容易受傷，因此幼魚較易感病。目前，由于水產養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，草魚飼養(yǎng)規(guī)模和養(yǎng)殖密度急劇擴大，一些養(yǎng)殖廠采取混養(yǎng)的飼養(yǎng)方法，養(yǎng)殖廠種魚的育苗相對集中且育種的規(guī)模較大，使現在的草魚白頭白嘴病常隨種魚和魚苗傳播，不易根除，且經常與其他病癥并發(fā)，導致病理特征不典型，對疾病的及時發(fā)現和鑒定造成了影響。

目前，對草魚白頭白嘴病的防治方法主要使用生石灰、漂白粉等消毒藥物對魚塘進行投放前消毒及飼養(yǎng)過程中的定期潑灑。中草藥雖然相對環(huán)保，減少藥殘，但其應用效果不及消毒藥顯著，實際養(yǎng)殖過程中就增加了草魚患病的風險。對疾病防治最理想的措施是通過疫苗預防，本文對草魚白頭白嘴病的病原進行了分離鑒定，在此基礎上如果能進一步研究，將白頭白嘴病的疫苗研究成功并應用于生產，該病將不再會是草魚養(yǎng)殖過程中的威脅。