何珺，胡丹，楊佳年

（1．貴州省生化工程中心，貴州貴陽(yáng)550025；2．貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽(yáng)550025）

密封加熱法提取沙棘果渣中異鼠李素

何珺1，胡丹2，楊佳年1

（1．貴州省生化工程中心，貴州貴陽(yáng)550025；2．貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽(yáng)550025）

采取密封加熱的方法對(duì)從沙棘果渣中提取異鼠李素的工藝進(jìn)行研究。采用單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)提取時(shí)間、提取次數(shù)、提取溫度、料液比及提取溶劑進(jìn)行篩選，之后對(duì)提取條件進(jìn)行正交驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)確定了密封加熱法提取沙棘果渣中異鼠李素的最佳工藝為：55℃條件下用V乙酸乙酯∶V95%乙醇=4∶6的提取液水浴加熱2次，每次3 h，料液比為1∶20（g∶mL）。

沙棘果渣；密封加熱法；異鼠李素

沙棘又名醋柳、酸棘、黑刺，是胡頹子科沙棘屬落葉灌木或小喬木[1]。沙棘富含生物活性物質(zhì)，不僅是生態(tài)治理的優(yōu)選樹(shù)種，而且是藥用價(jià)值很高的藥用植物[2]。沙棘果實(shí)主要用來(lái)生產(chǎn)沙棘果汁或沙棘果油，其生產(chǎn)廢品沙棘果渣中富含沙棘黃酮，沙棘黃酮中又含有大量苷及苷元。

近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)于沙棘總黃酮提取已做了一些研究工作，但大部分是針對(duì)沙棘黃酮，袁本香等[3]采取正交實(shí)驗(yàn)確定從沙棘果實(shí)中提取總黃酮的最佳方法是：回流提取，60%乙醇，溫度75℃，料液比為1∶8（g∶mL），提取次數(shù)為2次（1 h/次）。在該工藝條件下，沙棘總黃酮的提取率為2.36%；張郁松，羅倉(cāng)學(xué)等[4]研究了從沙棘果渣中提取總黃酮的工藝，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定的最佳工藝條件為：80℃下采用60%的乙醇浸提，固液比1∶7（g∶mL），回流提取3次，每次1 h，得到的總黃酮含量為1.97%。對(duì)于沙棘黃酮中異鼠李素的提取研究甚少，異鼠李素具有促進(jìn)血流通暢、抗心肌缺氧、抗心律失常、緩解心絞痛等藥理作用[5]，具有極大藥用價(jià)值，故對(duì)于異鼠李素的提取研究很有必要。

密封加熱提取是工業(yè)化生產(chǎn)中常用的提取方式，它成本低，操作簡(jiǎn)單，本試驗(yàn)利用密封加熱提取方式提取沙棘果渣中異鼠李素，不僅有效利用沙棘果實(shí)生產(chǎn)所產(chǎn)生的廢品，而且可為工業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)參考。

1 材料與儀器

1.1 材料

沙棘果渣購(gòu)于南京康普公司。

1.2 儀器

RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；BSA124S電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；GZX-9140 MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海博迅事業(yè)有限公司；HH·Sy21-Ni6電熱恒溫水浴鍋：北京長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；Agilent 1100 Series高效液相色譜儀。

2 方法與結(jié)果

2.1 異鼠李素HPLC測(cè)定

2.1.1 色譜條件

Hypersil C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相甲醇-水（37∶100）；流速0.8 ml/min；進(jìn)樣體積10 μL；柱溫45℃。

2.1.2 異鼠李素含量計(jì)算公式：

C樣=（C標(biāo)×A樣×K×V樣）/（A標(biāo)×m樣）

式中：C標(biāo)為標(biāo)樣溶液濃度，（mg/mL）；A樣為樣品峰面積；A標(biāo)為標(biāo)樣峰面積；V樣為樣品溶液的體積，mL；G樣為樣品重量，mg；K為組分純度，K=0.98。

2.2 密封加熱法

密封回流法提取沙棘黃酮具有效率高、工藝較簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)對(duì)用此法提取沙棘黃酮已有初步報(bào)道。

沙棘中的黃酮類物質(zhì)易溶于有機(jī)溶劑，常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙醇、乙醚、乙酸乙酯、丙酮等。其中甲醇、乙醚有毒，丙酮溶劑揮發(fā)損耗大，因此最常用的提取液是乙醇與乙酸乙酯，且高濃度的乙醇適于提取黃酮苷元類，低濃度的乙醇適于提取黃酮苷類，異鼠李素屬于黃酮苷元類物質(zhì)，宜采用高濃度乙醇提取。

2.2.1 提取液的選擇

精確秤取1.0 g左右的沙棘果渣分裝于12支試管，每平行2支加入V乙酸乙酯∶V95%乙醇=10∶0、8∶2、6∶4、4∶6、2∶8、0∶10的提取液10 mL，65℃水浴加熱2次，每次1 h，收集提取液，上機(jī)測(cè)定，結(jié)果如圖1。

圖1 提取液對(duì)異鼠李素含量的影響Fig.1 Effect of different extracting solution on the content of isorhamnetin

當(dāng)V乙酸乙酯∶V95%乙醇=4∶6時(shí)異鼠李素濃度最高，因此確定最佳提取液比例為V乙酸乙酯∶V95%乙醇=4∶6。

2.2.2 料液比的選擇

精確秤取1.0 g左右的沙棘果渣，分裝于10只試管，每平行2支分別加入V乙酸乙酯∶V95%乙醇=4∶6的提取液5、10、15、20、25 mL，65℃水浴加熱2次，每次1 h，收集提取液，定容至50 mL，上機(jī)測(cè)定，結(jié)果如圖2。

圖2 料液比對(duì)異鼠李素含量的影響Fig.2 Effect of different material-liquid ratio on the content of isorhamnetin

當(dāng)料液比達(dá)到1∶15之后，異鼠李素含量無(wú)明顯增長(zhǎng)，因此確定最佳料液比為沙棘果渣∶提取液=1∶15。

2.2.3 溫度的選擇

精確秤取1.0 g左右的沙棘果渣，分裝于8只試管，每平行2支分別加入V乙酸乙酯∶V95%乙醇=4∶6的提取液15 mL，分別于50、55、60、65℃水浴加熱2次，每次1 h，收集提取液，定容至50 mL，上機(jī)測(cè)定，結(jié)果如圖3。

圖3 提取溫度對(duì)異鼠李素含量的影響Fig.3 Effect of different temperature on the content of isorhamnetin

當(dāng)溫度為60℃時(shí)異鼠李素濃度達(dá)到最大值，因此選取60℃為最佳溫度。

2.2.4 提取時(shí)間的選擇

精確秤取1.0 g左右的沙棘果渣，分裝于6只試管，每平行兩支分別加入V乙酸乙酯∶V95%乙醇=4∶6的提取液15 mL，60℃水浴加熱2次，每次分別為1、1.5、2、2.5、3、3.5、4 h，收集提取液，定容至50 mL，上機(jī)測(cè)定，結(jié)果如圖4。

圖4 提取時(shí)間對(duì)異鼠李素含量的影響Fig.4 Effect of different time on the content of Isorhamnetin

提取時(shí)間在3.5 h達(dá)到峰值，但考慮到3 h與3.5 h的異鼠李素含量差異不大，且提取時(shí)間越長(zhǎng)經(jīng)濟(jì)成本越大，因此確定最佳提取時(shí)間為3 h。

2.2.5 提取次數(shù)的選擇

稱取1.01g沙棘果渣于試管，加入V乙酸乙酯∶V95%乙醇= 4∶6的提取液15 mL，60℃水浴加熱3次，每次為3 h，分別收集每次加熱后的濾液，定容至50 mL，進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定，結(jié)果如表1。

表1 提取次數(shù)對(duì)異鼠李素含量的影響Table 1Effect of different times on the content of Isorhamnetin

當(dāng)提取次數(shù)超過(guò)2次后，異鼠李素的濃度隨提取次數(shù)的增加而增加的幅度不大，而且增加提取次數(shù)會(huì)延長(zhǎng)生產(chǎn)周期，增加生產(chǎn)成本，因此確定的最佳提取次數(shù)為2次。

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上選擇提取溫度（A）、料液比（B）、提取時(shí)間（C）、提取液V乙酸乙酯∶V95%乙醇（D），設(shè)計(jì)三水平，采用L9（34）正交實(shí)驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表2。

表2 密封加熱法因素水平表Table 2Sealed heating method factor levels table

表3 密封加熱法正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表Table 3Sealed heating method of the orthogonal experiment result table

續(xù)表3 密封加熱法正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表Continue table 3Sealed heating method of the orthogonal experiment result table

由表3可見(jiàn)，密封加熱法提取異鼠李素實(shí)驗(yàn)中各因素的影響次序?yàn)椋毫弦罕龋˙）>提取溫度（A）>提取液V乙酸乙酯∶V95%乙醇（D）>提取時(shí)間（C）。結(jié)合K值可知最優(yōu)化條件為A1B3C2D2，即：料液比1∶20（g∶mL），提取溫度55℃，提取時(shí)間3 h，V乙酸乙酯∶V95%乙醇=4∶6。結(jié)合單因素實(shí)驗(yàn)可知密封加熱法提取異鼠李素的最佳提取工藝為：55℃，超聲頻率40 KHz，提取液V乙酸乙酯∶V95%乙醇=4∶6，料液比1∶20（g∶mL），提取次數(shù)2次，每次3 h。

3 結(jié)論與討論

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)確定密封加熱法提取異鼠李素提取最佳工藝為：55℃條件下用V乙酸乙酯∶V95%乙醇=4∶6的提取液水浴加熱2次，每次3h，料液比為1∶20（g∶mL）。

本研究充分利用沙棘果渣資源，所用的提取液為乙酸乙酯和95%乙醇等價(jià)格低廉的試劑，提取得異鼠李素含量達(dá)到5.1 mg/g，且該法操作簡(jiǎn)單、成本低廉，具有廣闊的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)前景。

[1]中國(guó)科學(xué)院植物研究所.中國(guó)高等植物圖鑒(補(bǔ)編)第二冊(cè)[M].北京:科學(xué)出版社,2002

[2]曹群華,翟偉菁,鄧云霞,等.沙棘籽渣和果渣中黃酮對(duì)小鼠糖代謝的影響[J].中藥材,2003,26(10):735-737

[3]袁本香,張東河.沙棘果實(shí)中總黃酮提取工藝研究[J].科協(xié)論壇, 2007(9):52-53

[4]張郁松,羅倉(cāng)學(xué).正價(jià)設(shè)計(jì)法優(yōu)化沙棘果渣中總黃酮的提取工藝[J].沙棘,2007,6(20):19-21

[5]李炯,王剛,杜士明,等.異鼠李素抗腫瘤的作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J].山西醫(yī)藥雜志,2011,12(40):1215-1217

Extraction Isorhamnetin from Marc of Hippophae rhamnoides L.with Seal Heating Method

HE Jun1，HU Dan2，YANG Jia-nian1
（1.Research Center of Biochemistry Engineering of GuiZhou Province，Guiyang 550025，Guizhou，China；2.College of Life Sciences of GuiZhou University，GuiZhou University，Guiyang 550025，Guizhou，China）

Extraction isorhamnetin from marc of Hippophae rhamnoides L.with seal heating method were studied.Single factor experiment was used to select extraction time，extraction times，extraction temperature，solid-liquid ratio and extraction solvent.Then the orthogonal verification experiment was used.The best processes of extraction isorhamnetin from marc of Hippophae rhamnoides L.with seal heating method were as follows：under temperature 55℃，Vethylacetate∶V95%ethylalcoholwere 4∶6 as extraction solvent，extraction time 3 h，material to liquid ratio 1∶20（g∶mL），and extraction times 2.

marc of Hippophae rhamnoides L.；seal heating method；isorhamnetin

2013-12-25

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.02.012

貴州省科技計(jì)劃項(xiàng)目（黔科合SY字[2013]3014]）

何珺（1974—），女（漢），副教授，碩士，研究方向：天然活性成分分離及檢測(cè)。