劉 勇，柏 合，徐世文

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030；2.牡丹江醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，黑龍江牡丹江157011；3.牡丹江醫(yī)學(xué)院黑龍江省組織損傷與修復(fù)重點(diǎn)實驗室，黑龍江牡丹江157011)

復(fù)方中藥軟膏是根據(jù)我院的驗方研制而成，主要由乳香、沒藥、當(dāng)歸、伸筋草等12味中藥所組成，具有活血祛瘀、舒筋活絡(luò)、消腫止痛等功效。臨床治療軟組織損傷效果良好。為探討其活血祛瘀、抗炎消腫的作用機(jī)理，從組織中炎性因子含量方面對其進(jìn)行了實驗研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗藥品 復(fù)方中藥軟膏（由乳香、當(dāng)歸、紅花、伸筋草等12味中藥組成，生藥含量為0.32g·g-1）由本院制備；按摩乳（濟(jì)南全力制藥有限公司，批號：Z37020377）；硫化鈉；TNF-α、NOELISA檢測試劑盒（博慧斯生物醫(yī)藥科技有限公司）。

1.1.2 實驗動物 昆明種小鼠，體質(zhì)量18～22g，雌雄各半，合格證件編號：SCXK（蒙）2002-0001號。

1.1.3 主要儀器研缽；離心機(jī)（SC-04型，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）；超凈工作臺（ZHjH-C1112B，南京依貝儀器設(shè)備有限公司）；酶標(biāo)儀（BiTeK Synergy H4）；恒溫箱（DHP-420型）。

1.2 實驗方法

1.2.1動物造模及分組 隨機(jī)選取72只小鼠，為避免環(huán)境因素造成的個體差異，先適應(yīng)性飼喂7天。在造模前一天，用電動剃毛器和8%硫化鈉溶液脫去小鼠左側(cè)臂部及大腿部毛。造模時，選擇大腿中部外側(cè)軟組織做好標(biāo)記，將小鼠側(cè)臥式固定于自制軟組織打擊器上，用50g砝碼從15cm高度自由落下，連續(xù)擊打2下，打擊后肉眼即見打擊部位腫脹、瘀血、皮膚完整無破損且無骨折[1]，說明造模成功。造模成功后隨機(jī)分為6組，即空白對照組、模型組、陽性對照組（按摩乳組）、復(fù)方中藥軟膏高、中、低劑量組，每組12只。每組小鼠在軟組織損傷處涂以相應(yīng)藥物，空白組及模型組不給藥。每天涂藥3次。

1.2.2 損傷模型局部組織中兩種炎性因子的影響 嚴(yán)格按照試劑盒操作說明測定損傷局部組織中COX-2、HIS的含量。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SAS9.0處理所得實驗數(shù)據(jù)。實驗數(shù)據(jù)以x±s表示,P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著，均有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠損傷局部軟組織中COX-2的含量 外用中藥軟膏高、中劑量組的TNF-α 含量顯著低于模型組（P<0.01）。與陽性藥物組比較則無統(tǒng)計學(xué)差異。外用中藥軟膏降低模鼠肌組織中COX-2含量呈一定的劑量依賴性，結(jié)果如表1所示。

表1 各組小鼠局部組織勻漿COX-2 含量比較（x±s ，n=10）

表2 各組小鼠局部組織勻漿HIS 含量比較（x±s ，n=10）

2.2 各組小鼠損傷局部軟組織中HIS的含量 各組小鼠損傷局部軟組織中HIS的含量與空白組比較，差異都是極顯著的，并且在第三天的時候，含量達(dá)到高峰。外用中藥軟膏呈劑量依賴方式降低小鼠損傷組織內(nèi)的HIS含量。雖然外用中藥軟膏高、中、低劑量組損傷局部的HIS含量高于陽性藥物組，但是沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05)。結(jié)果如表2。

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，軟組織損傷時受損局部紅腫熱痛，是因為局部組織毛細(xì)血管擴(kuò)張、細(xì)胞壞死等引起致痛物質(zhì)和炎性因子釋放?？寡姿幬锏亩靖弊饔煤艽蟆Ｒ虼巳藗冊絹碓街匾曁烊豢寡姿幬锏拈_發(fā)。中藥的活性成分如苷類、生物堿類等具有很好的鎮(zhèn)痛抗炎、活血化淤的作用。所以現(xiàn)今開發(fā)新藥主要是探索中藥的抗炎機(jī)理[2]。本實驗選取COX-2、HIS兩種炎性介質(zhì)，來探討外用中藥軟膏可能的抗炎機(jī)制。

COX-2是機(jī)體催化花生四烯酸變成前列腺素過程的限速酶，是抗炎藥物主要的作用靶點(diǎn)[3-4]。在各種動物炎癥模型和炎癥疾病的炎性滲出液中，均有COX-2mRNA和蛋白表達(dá)的增強(qiáng)，應(yīng)用COX-2選擇性抑制劑(如賽來昔布），能改善患者的關(guān)節(jié)炎。許多中藥的有效成分發(fā)揮良好的抗炎效應(yīng)，主要是通過直接抑制COX-2的活性。本實驗結(jié)果顯示，外用中藥軟膏能抑制COX-2的含量，減輕模鼠的炎癥反應(yīng)，并且與藥物的劑量呈依賴關(guān)系。

HIS是一種活性介質(zhì)[5]，廣泛分布于機(jī)體，有三種受體，其中的H1受體能介導(dǎo)興奮平滑肌和增高毛細(xì)血管通透性，稱之為H1效應(yīng)[6]，是炎癥機(jī)制之一。本實驗外用中藥軟膏可以降低模鼠組織內(nèi)的HIS含量，這可能是外用中藥軟膏起到抗炎鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制。

[1]徐英泉.馬騾關(guān)節(jié)扭挫傷69例臨床分析[J].吉林畜牧獸醫(yī),1985,(02):25-28.

[2]劉延江.非甾體抗炎藥的不良反應(yīng)分析[J].中國醫(yī)療前沿,2011,6(12):7-8.

[3]PiplaniH,Vaish V,SanyalSN.Dolastatin 15,amollusk linearpeptide,and Celecoxib,a selective cyclooxygenase-2 inhibitor,preventpreneoplastic colonic lesionsand induceapoptosis through inhibition of the regulatory transcription factorNF-κB and an inflammatory protein,iNOS[J].Eur JCancer Prev.2012

[4]PaiottiAP,Ribeiro DA,Silva RM,etal.EffectofCOX-2 inhibitor lumiracoxib and the TNF-α antagonist etanercepton TNBS-induced colitis inWistar rats[J].J MolHistol.2012

[5]NagaiK,TanidaM,Niijima A,etal.Roleof L:-carnosine in the controlofblood glucose,blood pressure,thermogenesis,and lipolysisby autonomic nerves in rats:involvementof the circadian clock and histamine[J].Amino Acids,2012

[6]81HuWW,Yang Y,Wang Z,etal.H1-antihistamines induce vacuolation in astrocytes throughmacroautophagy[J].ToxicolApplPharmacol,2012,260(2):115-123