陳愛(ài)娟 蔣斌 朱慧 王玳珠

半夏厚樸湯的機(jī)器煎煮工藝研究

陳愛(ài)娟 蔣斌 朱慧 王玳珠

目的 通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)YJD十功能自動(dòng)煎藥機(jī)煎煮半夏厚樸湯的機(jī)器加壓煎煮工藝進(jìn)行優(yōu)化，以期為建立一般方劑的機(jī)器煎煮工藝的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程提供參考。方法 以和厚樸酚的含量及浸出物的含量為指標(biāo)，通過(guò)單因素考察進(jìn)行浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、煎煮溫度三個(gè)因素水平的初選，再采用正交試驗(yàn)優(yōu)選半夏厚樸湯的機(jī)器加壓煎煮的最佳工藝。結(jié)果 最終確定半夏厚樸湯的機(jī)器煎煮最佳工藝為浸泡30min、煎煮溫度115℃、煎煮時(shí)間20min。結(jié)論 優(yōu)化的機(jī)器煎煮工藝結(jié)果可靠，評(píng)價(jià)指標(biāo)可控，對(duì)于規(guī)范機(jī)器煎煮工藝具有一定的意義。

煎藥機(jī)；半夏厚樸湯；煎煮工藝研究

中藥湯劑(又稱湯液)是中醫(yī)臨床治療疾病所用的主要?jiǎng)┬椭?。傳統(tǒng)湯劑存在一些不足之處，如煎煮麻煩，服用、攜帶不便，易霉變、不能久貯等，因此在一定程度上制約了中藥湯劑的應(yīng)用。中藥煎藥機(jī)的研制成功和推廣應(yīng)用，給中藥湯劑專業(yè)煎煮的研究提供了一種新的思路。但中藥湯劑煎煮領(lǐng)域的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)缺失，評(píng)價(jià)中藥湯劑煎煮質(zhì)量水平主要依據(jù)其口味、氣味、顏色等結(jié)合個(gè)人經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)判，導(dǎo)致湯劑煎煮工藝不規(guī)范，煎煮質(zhì)量的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)無(wú)法制定與實(shí)施[1-3]。半夏厚樸湯[4-6]出自張仲景《金匱要略》，由半夏、厚樸、茯苓、生姜、蘇葉組方，該方劑煎煮時(shí)不需要特殊處理，煎法簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)選擇厚樸中的有效成份和厚樸酚（新木脂素類）作為主要指標(biāo)，再結(jié)合干浸膏的含量進(jìn)行考察，篩選出半夏厚樸湯的機(jī)器煎煮的最佳工藝[7]，以期為中藥的機(jī)器煎煮工藝研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

表1 飲片來(lái)源及批次

1 實(shí)驗(yàn)器材

1．1 主要儀器設(shè)備 YJD-20GL型十功能自動(dòng)煎藥機(jī)（北京東華原），Shimadzu LC-20AB高效液相色譜系統(tǒng)(日本島津公司，BS2242S電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士BUCHI公司），砂鍋，煤氣灶等。

1．2 藥材與試劑 和厚樸酚（730-8803，中國(guó)藥品生物制品檢定所），乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司），磷酸(汕頭市西隴化工廠有限公司），甲醇(分析級(jí)，南京化學(xué)試劑有限公司），甲醇（色譜級(jí)，美國(guó)天地公司）。

處方所用的中藥飲片，均由蘇州天靈中藥飲片有限公司提供，飲片符合2010年版《中國(guó)藥典》各藥項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)。飲片來(lái)源及批次見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果[8-10]

2．1 半夏厚樸湯中和厚樸酚含量及浸出物測(cè)定方法的建立

2．1．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：YMC-Pack c4 (250mm×4．6mm，5μm)(YMC Co．Ltd，Japan)；流動(dòng)相：甲醇-0．1%磷酸水溶液(70∶30)；流速：1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL。

2．1．2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱量干燥至恒定質(zhì)量的和厚樸酚對(duì)照品0．6304mg，加甲醇適量溶解，分別定容至10mL容量瓶中，配置成濃度為0．06304mg/mL和厚樸酚對(duì)照品溶液，4℃存放備用。

2．1．3 機(jī)器煎煮樣品溶液的制備 稱量半夏180g，厚樸135g，茯苓180g，蘇葉90g，生姜135g，加水3500mL，于高壓煎煮機(jī)器中，按實(shí)驗(yàn)所需的各浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、煎煮溫度進(jìn)行煎煮，趁熱濾出藥液，待藥液冷卻后加水定容至2000mL容量瓶中，搖勻，即得湯劑溶液。精密移取湯劑溶液100mL，加入乙醇60mL，混合均勻，于4℃冰箱靜置24h，濾過(guò)，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，殘?jiān)眉状汲暼芙?，定容?00mL容量瓶中，作為供試品溶液，4℃存放備用。

2．1．4 方法學(xué)考察

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密量取濃度為0．06304mg/mL和厚樸酚對(duì)照品溶液1．6mL、0．4mL、0．2mL、0．1mL、0．05mL分別置于25mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得。每次進(jìn)樣10μL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以和厚樸酚的含量(X)為橫坐標(biāo)，其峰面積吸收度積分值(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程，結(jié)果見(jiàn)圖1，和厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖見(jiàn)圖2。

(2)樣品含量測(cè)定。將樣品分別按供試品制備方法制備供試液，依法測(cè)定，每批樣品各進(jìn)三針，每次進(jìn)樣10μL，并隨行大黃素對(duì)照品進(jìn)樣10μL，計(jì)算各樣品中和厚樸酚的含量。樣品的HPLC色譜圖見(jiàn)圖3。

(3)精密度試驗(yàn)。精密吸取和厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算樣品中和厚樸酚含量的RSD為0．21%，表明儀器精密度良好。

圖1 和厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖2 和厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液的HPLC色譜圖

圖3 樣品中和厚樸酚的HPLC色譜圖

(4)穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取和厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μL，分別于0、3、6、9、16、24h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算樣品中和厚樸酚含量的RSD為0．97%，結(jié)果表明，樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

(5)重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批號(hào)樣品5份，精密稱定5g，照供試品溶液的制備方法制備5份供試液，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定并計(jì)算重復(fù)性。計(jì)算樣品中和厚樸酚含量的RSD為1．22%。

(6)加樣回收率試驗(yàn)。稱取和厚樸酚處方量一半的組方飲片煎煮，分別加入相當(dāng)于半夏厚樸湯處方一半的和厚樸酚對(duì)照品溶液，按照樣品制備方法制備和厚樸酚湯樣品溶液6份，精密吸取各樣品溶液10μL進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算和厚樸酚的平均回收率為96．31%，RSD為1．62%。

2．1．7 浸出物含量測(cè)定的方法 按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2010年版）一部附錄Χ項(xiàng)下浸出物測(cè)定法，精密量取煎液25mL至蒸發(fā)皿中，并將其置于水浴鍋上濃縮成稠浸膏，然后放入烘箱中于105℃干燥3h，取出后放入干燥器干燥10min，稱量，用減量法計(jì)算干浸膏得率。

2．2 機(jī)器煎煮工藝的單因素考察

2．2．1 對(duì)和厚樸酚及浸出物的影響 為考察優(yōu)選半夏厚樸湯最佳機(jī)器煎煮工藝，在查閱中藥煎煮相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行單因素考察，以水煎液中和厚樸酚含量為主要指標(biāo)；同時(shí)測(cè)定水煎液的浸出物含量。

2．2．2 浸泡時(shí)間的單因素考察 取半夏180g，厚樸135g，茯苓180g，蘇葉90g，生姜135g，加水3500mL，分別浸泡0、10、20、30、40min，溫度110℃，煎煮15min。測(cè)量各合煎液中和厚樸酚及干浸膏得率。結(jié)果見(jiàn)圖4、圖5。

圖4 不同浸泡時(shí)間對(duì)半夏厚樸湯水煎液中和厚樸酚含量的影響

圖5 不同浸泡時(shí)間對(duì)半夏厚樸湯水煎液浸出物含量的影響

從圖4、圖5不同浸泡時(shí)間對(duì)半夏厚樸湯水煎液指標(biāo)成分的影響來(lái)看，隨著浸泡時(shí)間的增加，指標(biāo)性成份及浸出物均呈先下降后上升再下降的趨勢(shì)，且在30min是達(dá)到最大，因此本試驗(yàn)選取浸泡20 min、30 min、40 min這三個(gè)水平進(jìn)行正交試驗(yàn)考察。

2．3．3 煎煮時(shí)間的單因素考察 在其他煎煮條件固定的情況下，分別考察煎煮10、15、20、25、30 min時(shí)水煎液中和厚樸酚及浸出物含量，結(jié)果如圖6、圖7所示。

圖6 不同煎煮時(shí)間對(duì)半夏厚樸湯水煎液中和厚樸酚含量的影響

圖7 不同煎煮時(shí)間對(duì)半夏厚樸湯水煎液浸出物含量的影響

圖6、圖7表明隨著煎煮時(shí)間的增加，水煎液中指標(biāo)成分含量與浸出物含量基本呈先上升后降低再上升的趨勢(shì)，且在煎煮15min時(shí)含量達(dá)到最高。因此本試驗(yàn)選取煎煮10min、15min、20min這三個(gè)水平進(jìn)行正交試驗(yàn)考察。

2．3．4 煎煮溫度的單因素考察 在其他煎煮條件固定的情況下，分別考察煎煮溫度為105、110、115、120℃時(shí)水煎液中和厚樸酚及浸出物含量，結(jié)果如圖8、圖9所示。

圖8 不同煎煮溫度對(duì)半夏厚樸湯水煎液中和厚樸酚含量的影響

圖9 不同煎煮溫度對(duì)半夏厚樸湯水煎液浸出物含量的影響

圖8 、圖9表明隨著煎煮溫度的增加，水煎液中指標(biāo)成分含量與浸出物含量先上升后下降的趨勢(shì)，且110℃時(shí)含量最高。因此選取煎煮溫度為105℃、110℃、115℃這三個(gè)水平進(jìn)行正交試驗(yàn)考察。

2．4 機(jī)器煎煮工藝正交試驗(yàn)

2．4．1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、煎煮溫度的單因素考察結(jié)果，以水煎液中和厚樸酚和浸出物的含量為指標(biāo)，進(jìn)行三因素三水平正交試驗(yàn)，因素與水平安排見(jiàn)表2。

表2 因素與水平

2．4．2 正交試驗(yàn)及其結(jié)果 根據(jù)2．1．3項(xiàng)下的樣品制備方法，分別按表3中的9組條件進(jìn)行正交試驗(yàn)，制備9組樣品，并在2．1．1項(xiàng)色譜條件下分別進(jìn)樣分析，測(cè)定供試品溶液中和厚樸酚的含量；同時(shí)測(cè)定浸出物含量。正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

本試驗(yàn)以和厚樸酚含量為指標(biāo)，結(jié)合浸出物測(cè)定結(jié)果考察，故選擇綜合加權(quán)評(píng)分法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析。設(shè)定滿分為100分，其中和厚樸酚和浸出物含量的權(quán)重系數(shù)各為50，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行總加權(quán)評(píng)分，將總分結(jié)果帶入正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，即得如表3所示結(jié)果。由直觀分析結(jié)果可見(jiàn)，在所選因素水平范圍內(nèi)，影響半夏厚樸湯機(jī)器煎煮工藝的因素依次為C＞B＞A，即煎煮溫度＞煎煮時(shí)間＞浸泡時(shí)間。且各因素各水平影響大小順序?yàn)锳2＞A3＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1。

根據(jù)以上結(jié)果用SPSS 15．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表4。表4方差分析表明，煎煮時(shí)間因素F值為23．76，P值為0．0404；煎煮溫度因素F值為28．93，P值為0．0334，即差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），因此煎煮時(shí)間及煎煮溫度均為半夏厚樸湯機(jī)器煎煮過(guò)程中的顯著性影響因素，而浸泡時(shí)間因素差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表3 半夏厚樸湯機(jī)器煎煮工藝正交試驗(yàn)表及結(jié)果

表4 半夏厚樸湯機(jī)器煎煮工藝試驗(yàn)方差分析表

根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，綜合極差分析和方差分析，并考慮臨床煎藥的可行性，確定半夏厚樸湯的最佳機(jī)器煎煮工藝為A2B3C3，即將半夏厚樸湯飲片浸泡30min后，在機(jī)器煎煮溫度為115℃的條件下煎煮20min。

3 討論

半夏厚樸湯中君藥半夏為有毒藥材，雖然經(jīng)炮制后毒性大大降低，但是毒性的影響仍在，而煎煮條件對(duì)有毒成分的影響又不可忽視，因此對(duì)此方的煎煮，既要注意有毒成分的影響，又要保證有效成分的煎出，在最大程度上發(fā)揮該方劑的藥效。

由于該方的君藥半夏的主成分研究比較復(fù)雜且不穩(wěn)定，研究尚未透徹，因此本實(shí)驗(yàn)選擇臣藥厚樸中的有效成份和厚樸酚（新木脂素類）作為主要指標(biāo)，再結(jié)合干浸膏的含量進(jìn)行考察。

本實(shí)驗(yàn)最終確定半夏厚樸湯機(jī)器煎煮的最佳工藝為：浸泡30min后，在機(jī)器煎煮溫度為115℃的條件下煎煮20min。結(jié)果可靠，評(píng)價(jià)指標(biāo)可控。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果不僅可以對(duì)本院的代煎藥的煎煮工藝及質(zhì)量有一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，而且對(duì)于規(guī)范以半夏厚樸湯以及這一類的方劑的機(jī)器煎煮工藝具有一定的指導(dǎo)意義。

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Objective To optimize YJD machine decoction process of Huanglian Jiedu decoction by orthogonal test, and make some references for the machine decoction process standard． Methods With composite score of honokiol as index，effects of soak time，decoction time and decoction temperature on machine decoction process were optimized by single factor tests and orthogonal test． Results Optimal machine decoction process was as following: Soaked 30 minutes，decoction time 20 minutes，decoction temperature 115℃． Conclusion Optimized machine decoction process was reasonable and feasible with controllable evaluation index，it could provide experimental basis for developing of machine decoction process of Chinese medicine decoctions．

Dug-decocting machine; Banxianhoupu decoction; Optimization of decoction process

10．3969/j．issn．1009-4393．2015．32．002

江蘇 215003 蘇州中醫(yī)醫(yī)院 （陳愛(ài)娟 蔣斌 朱慧 王玳珠）

王玳珠 E-mail：wangdz60@sina.com