熊國營 張凌云 李曉君

白果內(nèi)酯耐缺氧作用研究

熊國營 張凌云 李曉君

目的 研究白果內(nèi)酯對小鼠耐缺氧作用。方法 分別建立常壓耐缺氧和急性腦缺血小鼠模型，研究高、低劑量的白果內(nèi)酯對其存活時間的影響。結(jié)果 白果內(nèi)酯能顯著延長常壓耐缺氧小鼠和急性腦缺血小鼠的存活時間，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；高劑量白果內(nèi)酯組與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 白果內(nèi)酯對缺氧小鼠具有保護(hù)作用。

白果內(nèi)酯；小鼠；耐缺氧；作用研究

銀杏葉的提取物銀杏內(nèi)酯是一種具有較強(qiáng)的生物活性的萜類化合物，其中包括白果內(nèi)酯和銀杏內(nèi)酯A、B、C、M和J，白果內(nèi)酯是其中唯一的倍半萜物質(zhì)。早在2001年，張予陽等[1]報道稱銀杏內(nèi)酯能有效降低急性腦缺血小鼠的死亡率，延長小鼠的死亡時間；降低局灶性腦缺血大鼠梗死范圍，對腦缺血具有保護(hù)作用。唐遠(yuǎn)鵬等[2]報道白果內(nèi)酯可以有效降低血壓，減慢心率；具有良好的抗心肌缺血，保護(hù)心肌作用，以及對神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用等。而關(guān)于白果內(nèi)酯對耐缺氧的研究卻未見報道。本研究分別建立常壓耐缺氧和急性腦缺血小鼠模型，旨在探究白果內(nèi)酯的耐缺氧作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠80只，體質(zhì)量18～30 g，由鷹潭市人民醫(yī)院鐵路分院實驗動物中心提供。

1.1.2 實驗藥物 白果內(nèi)酯(合肥創(chuàng)新醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號：20100115)；復(fù)方丹參片(北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號：11021185)。

1.2 方法

1.2.1 白果內(nèi)酯對小鼠常壓耐缺氧的影響 取小鼠40只，隨機(jī)均分為4組（n=10），分別為空白組(A組)、陽性對照組(B組)、白果內(nèi)酯低劑量組(C組)和白果內(nèi)酯高劑量組(D組)。4組均采用灌胃給藥，給藥容積均為20 μL/g。A組給予生理鹽水；B組給予390 mg/kg的復(fù)方丹參片；C組給予2.5 mg/kg的白果內(nèi)酯；D組給予7 mg/kg的白果內(nèi)酯。1次/d，連續(xù)5 d。末次給藥60 min后，將各組小鼠分別放入盛有5 g鈉石灰的300 mL的磨口瓶中，瓶口涂抹凡士林并加蓋密封，觀察小鼠體征特點，記錄各組中每只小鼠的存活時間，以翻正反射消失和呼吸停止為死亡指征。

1.2.2 白果內(nèi)酯對小鼠急性腦缺血的影響 取小鼠40只，分組及給藥方法同1.2.1，以末次給藥30 min后，用剪刀沿小鼠耳后將其頭部迅速剪下，立即計時，觀察各組每只小鼠斷頭后張口次數(shù)以及距最后一次張口時間。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 18.0軟件對本研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 白果內(nèi)酯對常壓耐缺氧小鼠的影響 高、低劑量的白果內(nèi)酯和復(fù)方丹參片均顯著延長常壓耐缺氧小鼠的存活時間，與空白組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；高劑量白果內(nèi)酯組與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但均長于低劑量組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 白果內(nèi)酯對常壓耐缺氧小鼠的影響(x±s)

2.2 白果內(nèi)酯對急性腦缺血小鼠的影響 高劑量的白果內(nèi)酯和陽性對照組組顯著增加斷頭小鼠的張口次數(shù)，延長小鼠的存活時間，與空白組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；低劑量的白果內(nèi)酯較空白組指標(biāo)有增加，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

表2 白果內(nèi)酯對急性腦缺血小鼠的影響(x±s)

3 討論

本研究建立小鼠物理缺氧模型和機(jī)體損傷缺氧模型，即常壓耐缺氧和急性腦缺血模型。常壓耐缺氧主要反映的是小鼠腦和心缺氧[3]，本研究顯示，高低劑量的白果內(nèi)酯顯著延長常壓耐缺氧小鼠的存活時間，與空白組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；高劑量白果內(nèi)酯組與復(fù)方丹參片效果相當(dāng)，表明白果內(nèi)酯可顯著改善心和腦缺氧。在急性腦缺血小鼠模型中，高劑量白果內(nèi)酯顯著增加斷頭小鼠的張口次數(shù)，延長小鼠的存活時間，與復(fù)方丹參片效果相當(dāng)，與空白組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。表明白果內(nèi)酯可以顯著降低腦耗氧量，對斷頭腦缺氧具有保護(hù)作用。

機(jī)體缺氧表現(xiàn)出的是一種緊張刺激，可以引起機(jī)體產(chǎn)生各種應(yīng)激反應(yīng)，從而影響機(jī)體正常代謝以及使各種功能發(fā)生異常變化，導(dǎo)致機(jī)體心、腦等重要器官的損害和各種疾病的發(fā)生[4]。劉勇林等[5]發(fā)現(xiàn)白果內(nèi)酯顯著提高SD大鼠血清中的氧化指標(biāo)超氧化物歧化酶(SOD)活性，降低抗氧化物丙二醛(MDA)的活性，舒張血管，降低大鼠動脈壓。高偉敏等[6]觀察發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物(含白果內(nèi)酯、黃酮苷和銀杏酯)對兔心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，研究顯示銀杏葉提取物顯著抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減少心肌組織MDA活性和血清磷酸激酶活性，抑制心肌組織SOD的消耗，對心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用。茍懷宇等[7]研究銀杏葉提取物對異丙腎上腺誘導(dǎo)的大鼠心肌肥厚的影響，研究表明經(jīng)銀杏葉提取物治療后明顯降低MDA含量，升高SOD、GSP-Px以及cNOS的活性，與異丙腎上腺模型組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），對誘導(dǎo)的心肌肥厚發(fā)生有預(yù)防作用。綜合以上研究結(jié)果，推斷白果內(nèi)酯的可能機(jī)制為調(diào)節(jié)缺氧機(jī)體的氧化和抗氧化動態(tài)平衡，減少機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)。此外，鄒凱華等[8]研究發(fā)現(xiàn)白果內(nèi)酯能抵抗缺氧引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞中的三磷酸腺苷(ATP)含量的降低，這可能與增強(qiáng)細(xì)胞呼吸功能有關(guān)；且體外實驗表明，白果內(nèi)酯增加對肝分離出來的線粒體的呼吸控制率，推斷其可能的機(jī)理是在機(jī)體極低氧氣情況下，白果內(nèi)酯能保存線粒體，重新生成

ATP來為機(jī)體提供功能。

本研究建立了小鼠缺氧模型，探究了白果內(nèi)酯的耐缺氧作用，填補(bǔ)了國內(nèi)外對白果內(nèi)酯這一藥理研究的空白，進(jìn)一步拓展了白果內(nèi)酯的應(yīng)用范圍，為其開發(fā)和利用提供了一個新的方向，也使其產(chǎn)生更大的經(jīng)濟(jì)效益、社會效益以及生態(tài)效益。

[1] 張予陽，于慶海，游松，等.銀杏內(nèi)酯對小鼠和大鼠腦缺血的保護(hù)作用[J].中國藥理學(xué)通報，2001，17(6):667-669.

[2] 唐遠(yuǎn)鵬，曾靖，黃起壬.白果內(nèi)酯藥理作用的研究[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2015，35(1):153-155.

[3] 李芳，杜麗東，妥海燕，等.敦煌療風(fēng)虛瘦弱方對小鼠急性缺氧的保護(hù)及抗休克作用[J].中醫(yī)研究，2015，28(4):61-64.

[4] 王浩，李玉琴，高永峰，等.白花丹參不同炮制品水提物抗小鼠心肌缺血缺氧的作用[J].中國老年學(xué)雜志，2014，34(15):4276-4278.

[5] 劉勇林，張成標(biāo)，李保民，等.白果內(nèi)酯對大鼠動脈血壓影響的研究[J].陜西中醫(yī)，2011，32(4):491-492.

[6] 高偉敏，吳素?zé)ǎ雌G麗，等.銀杏葉提取物對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].河北職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，25(4):8-16.

[7] 茍懷宇，陳艷秋，黃晶，等.銀杏葉提取物對異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠心肌肥厚的影響[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，35(2):224-226.

[8] 鄒凱華.白果內(nèi)酯-銀杏葉制劑有效成分研究現(xiàn)狀[J].上海醫(yī)藥，2008，29(8):365-367.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.36.005

江西省為生計生委科技計劃（20157167）

江西 335000 鷹潭市人民醫(yī)院鐵路分院藥劑科 (熊國營 李曉君) 330000 南昌市第一醫(yī)院藥劑科 (張凌云)