趙晉煒,程景民

18種單味中藥提取物抗驚厥作用的藥效學(xué)比較研究

趙晉煒1,程景民2

目的比較18種單味中藥提取物抗驚厥作用的效能、效價(jià)、量效和時(shí)效關(guān)系。方法采用最大電休克驚厥(MES)模型,分析灌胃(ig)小鼠18種單味中藥提取物的抗驚厥率、量效和時(shí)效關(guān)系,比較各藥抗驚厥效能。按Bliss法計(jì)算抗MES的ED50和ED95,比較其效價(jià)強(qiáng)度。結(jié)果18種單味中藥提取物均有不同程度抗MES作用。除白胡椒起效時(shí)間為45 min外,其余17種中藥醇提物起效時(shí)間均為30 min,均較妥泰(TPM)(1 h)起效快。而達(dá)峰時(shí)間以全蝎最慢(1.5 h),蜈蚣、酸棗仁45 min達(dá)峰,其余醇提物均為60 min,但均較TPM(2 h)快。天南星作用維持時(shí)間最長(8 h),其次為茯苓、半夏和全蝎,均為7 h。柴胡、石菖蒲、蜈蚣作用持續(xù)時(shí)間最短,僅為2 h,其余各藥作用可維持3 h～5 h,但均較TPM(12 h)短。結(jié)論18種受試中藥醇提物中全蝎、半夏和知母抗MES作用最強(qiáng),其次為茯苓和天南星,而蜈蚣和蟬衣的抗驚厥效能最低。

中藥提取物;抗驚厥作用;最大電休克驚厥;小鼠

癲癇是一種反復(fù)發(fā)作的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,WHO統(tǒng)計(jì),目前全球癲癇患者約有5 000萬人,且每年有將近40萬的新發(fā)病例[1-3]。中醫(yī)藥防治癲癇,如何發(fā)揮中藥治療癲癇的專長和優(yōu)點(diǎn)值得研究[4,5]。為此本實(shí)驗(yàn)選取13種常用抗癲癇植物中草藥和5種動物中藥進(jìn)行分離提取后作為研究對象,采用經(jīng)典的最大電休克驚厥(MES)模型,以抗癲癇西藥為陽性對照,對18種單味中藥的抗驚厥效能、效價(jià)、量效和時(shí)效進(jìn)行了比較研究。

1 材料與方法

1.1 動物 健康普通級昆明種小鼠,體重18 g～22 g,雌雄皆用,合格證號為:314第070101號,由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,符合國家健康一級動物標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)動物以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。

1.2 藥品及試劑 全蝎(Scorpion,SP)、蜈蚣(Centi pede,CP)、僵蠶(Stiff Silkorm,SS)、地龍(Lum bricus, LB)、蟬衣(Cicada Slough,CS)、草果(Fructus Tsaoko,FT)、茯苓(Poria,PO)、知母(Rhizom a Anem a rrhenae,RA)、酸棗仁(Sem en Ziziphi Sp inosne, SZS)、遠(yuǎn)志(Radix Po lyga lae,RP)、川芎(Rhizoma Chuanxiong,RC)、白胡椒(White Peppe r,WP),柴胡(Rad ix Bup leu ri,RB)、石菖蒲(Rhizom a aco ri tata rinow ii,RAT)、天南星(Rhizoma Pinelliae,RPI)、鉤藤(Uncaria,UN)、半夏(Pinellia Tuber,PT)、瑞香狼毒(Ste lle ra Cham ae jasm e,SC),以上18種中藥均購于山西省藥材公司,經(jīng)山西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)系植化教研組有關(guān)人員鑒定后,采用乙醇回流法提取妥泰(Topamax,TPM),瑞士Cilag公司生產(chǎn),批號02CS063,均用生理鹽水配制。

1.3 最大電休克驚厥實(shí)驗(yàn) MES模型采用Sw inyard[6]法稍加改良。取健康昆明種小鼠1 960只,雌雄各半,分為20組,每組隨機(jī)分為4個～6個劑量組,每個劑量組20只,均采用灌胃給藥法,正常對照組灌胃等容積的生理鹽水。各劑量組的給藥劑量見表1、表2。量效、時(shí)效關(guān)系的測定,各劑量組小鼠灌胃給藥后,分別于15 min、30 min、1 h、2 h……12 h用上述同樣參數(shù)刺激,記錄抗MES數(shù),計(jì)算抗驚率,分析各藥作用高峰期的量效關(guān)系,用Bliss法計(jì)算各藥的ED50、 ED95,比較各藥的效價(jià)強(qiáng)度及效能。以各藥最大劑量組不同時(shí)間點(diǎn)的抗MES結(jié)果作時(shí)效關(guān)系分析,比較各藥的起效時(shí)間、達(dá)峰時(shí)間和作用持續(xù)時(shí)間。

表1 9種不同劑量的中藥提取物和NS作用于小鼠的MES實(shí)驗(yàn)g/kg

表2 9種不同劑量的中藥提取物和TPM作用于小鼠的MES實(shí)驗(yàn)g/kg

2 結(jié) 果

2.1 抗MES量效關(guān)系 18種單味中藥提取物均有不同程度的抗MES作用,且量效呈正相關(guān)性。其中全蝎、半夏和知母抗MES發(fā)作的作用最強(qiáng),抗驚率均達(dá)80%,其次為茯苓和天南星,抗驚率達(dá)70%。而蜈蚣和蟬衣的抗驚厥效能最低。效價(jià)強(qiáng)度由大到小依次為全蝎、狼毒、蟬衣、遠(yuǎn)志、川芎、天南星、菖蒲、茯苓、柴胡、棗仁、知母、胡椒、鉤藤、僵蠶、蜈蚣、半夏、地龍、草果。詳見表3。

2.2 抗MES時(shí)效關(guān)系比較 18種單味中藥提取物的起效時(shí)間、達(dá)峰時(shí)間以及作用持續(xù)時(shí)間見表4。除白胡椒的起效時(shí)間為45 min外,其余17種中藥醇提物的起效時(shí)間均為30 min,均較TPM(1 h)起效快。而達(dá)峰時(shí)間以全蝎最慢(1.5 h),蜈蚣、酸棗仁45 min達(dá)峰,其余醇提物均為60 min,但均較TPM(2 h)快。天南星的作用維持時(shí)間最長(8 h),其次為茯苓、半夏和全蝎,均為7 h。柴胡、石菖蒲、蜈蚣的作用持續(xù)時(shí)間最短,僅為2 h,其余各藥的作用可維持3 h～5 h,但均較TPM(12 h)短。

表3 18種中藥提取物和TPM對小鼠MES驚厥的影響

表4 小鼠MES實(shí)驗(yàn)的18種中藥和TPM相對時(shí)間值

3 討 論

中醫(yī)理論認(rèn)為癲癇的發(fā)生是由風(fēng)、火、痰、瘀為患,導(dǎo)致心、肝、脾、腎、臟氣失調(diào),肝腎陰虛、陰虛則陽亢、陽亢則肝風(fēng)內(nèi)動、亢而熱盛、熱盛化火、火極生風(fēng)、風(fēng)火相助為患,另脾虛失運(yùn)、清氣不升、濁氣下降則痰涎內(nèi)結(jié)、痰迷心竅、心血不遂而瘀、瘀則經(jīng)絡(luò)不通、痰阻血瘀上擾清竅,終致癲癇發(fā)作。根據(jù)發(fā)病機(jī)制,常采用定癇熄風(fēng)、平肝瀉火、祛痰開竅、活血化瘀的治療原則[7]。本課題結(jié)合中醫(yī)理論,選取全蝎等5種動物中藥和13種植物中藥的醇提物進(jìn)行現(xiàn)代藥效學(xué)比較研究,為中醫(yī)防治癲癇奠定理論基礎(chǔ)。

全蝎為鉗蝎科動物東亞鉗蝎的干燥蟲體,全蝎蝎毒和抗癲癇肽(AEP)是抗癲癇的主要有效部位,對咖啡因、美解眠、士的寧誘發(fā)的三種小鼠驚厥模型均有不同程度的對抗作用[8];全蝎醇提物可以明顯對抗MES,抗MES作用最強(qiáng),效價(jià)最大,作用持續(xù)7 h。

僵蠶為傳統(tǒng)中藥,系蠶蛾科昆蟲Bom byxm oriL家蠶幼蟲感染白僵菌Bcaureria bassiana(Bais)Vuill而僵死的干燥全蟲,可以降低士的寧誘發(fā)驚厥的死亡數(shù),所含大量的草酸銨是其抗驚厥作用的主要成分,臨床研究也證實(shí)草酸銨對癲癇大發(fā)作有效[9]。僵蠶醇提物能劑量依賴性對抗MES。地龍(蚯蚓)為環(huán)節(jié)動物門鉅蚓科兩種動物的干燥軀體,其熱浸液、醇浸液對戊四氮和咖啡因所致驚厥及電驚厥皆有拮抗作用,其抗驚厥成分可能與所含具有中樞抑制作用的琥珀酸有關(guān)[10]。本實(shí)驗(yàn)顯示,地龍醇提物能抗MES。總體看來其效果雖不及全蝎和僵蠶,但也顯示出了較好的抗癇效應(yīng)和抗癇譜廣的特點(diǎn)。

蟬蛻為蟬科昆蟲黑蚱Cryptotympana pustulata Fabr.羽化后的蛻殼。其水提取液和醇提物能降低硝酸士的寧引起的動物驚厥死亡率,顯示有一定的抗驚厥作用,但不能拮抗四氯化碳引起的驚厥[11]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,蟬蛻醇提物有一定的抗MES作用。

蜈蚣為節(jié)肢動物門唇足綱整形目蜈蚣科動物,其水提物對士的寧驚厥、小鼠的電驚厥發(fā)作,明顯抑制GBL誘發(fā)癲癇小發(fā)作大鼠的異常腦電發(fā)放,其抑制強(qiáng)度與常用抗小發(fā)作西藥氯硝西泮的療效相當(dāng),呈現(xiàn)良好的抗癲癇作用,而對超強(qiáng)電流和戊四唑所致的驚厥均無對抗作用[12]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,蜈蚣醇提物有弱的抗MES驚厥效應(yīng),最大抗驚率為20%,雖能延長戊四唑驚厥的潛伏期;但與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。蜈蚣醇溶部分富含多種氨基酸、小分子肽和甾醇等活性物質(zhì)[13],可能為其抗癇的物質(zhì)基礎(chǔ),但目前尚無定論。

川芎為傘形科植物川芎的干燥根莖,其活性成分有以川芎嗪為代表的生物堿類,以阿魏酸為代表的有機(jī)酸類,以藁本內(nèi)酯為代表的苯酞類。川芎嗪能明顯抑制青霉素和戊四唑(PTZ)誘發(fā)大鼠癲癇放電[14]。川芎醇提物以明顯對抗MES。

茯苓Poria cocos Wo lf為多孔菌科真菌的干燥菌核;主要成分菌核含β-茯苓聚糖(約占干重93%)、茯苓酸、麥角固醇、膽堿、組氨酸、卵磷脂及鉀鹽等。茯苓醇提物能對抗MES驚厥,其最大抗驚率為70%,作用持續(xù)7 h。草果為姜科豆蔻屬植物。主要成分為草果精油。知母為百合科植物知母的根莖,主要成分是知母皂苷。草果知母湯對戊四唑慢性誘導(dǎo)癲癇發(fā)作致大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)損傷有良好的抗損傷作用[15]。本實(shí)驗(yàn)對草果和知母的醇提物分別進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)知母能明顯對抗MES驚厥,最大抗驚率達(dá)80%。白胡椒是胡椒屬胡椒科常綠藤本植物胡椒的干燥成熟果實(shí)。含有揮發(fā)油、胡椒堿、粗脂肪、粗蛋白等。胡椒堿對MES、MET和小鼠腦室注射(icv)KA形成的顳葉性癲癇模型對抗作用較強(qiáng),但對士的寧引起的強(qiáng)直性驚厥、3-巰基丙酸、荷包牡丹堿和興奮性氨基酸引起的陣攣性驚厥均無明顯的對抗作用[16]。白胡椒醇提物能抗MES驚厥,最大抗驚率為50%。

遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志的干燥根。其主要成分是遠(yuǎn)志皂甙、遠(yuǎn)志醇,糖類、生物堿等。對五甲烯四氮唑所致驚厥有很強(qiáng)的對抗作用[17]。本研究結(jié)果顯示,遠(yuǎn)志醇提物有一定的抗MES驚厥效應(yīng),最大抗驚率為50%。

酸棗仁為鼠李科棗屬植物酸棗的干燥成熟種仁;含生物堿,皂苷和黃酮等;酸棗仁皂苷可顯著降低戊四氮引起的驚厥率[18]。酸棗仁醇提物有一定的抗MES驚厥效應(yīng),最大抗驚率為50%。

柴胡煎劑能拮抗咖啡因、毛果蕓香堿導(dǎo)致的小鼠驚厥,提高大鼠電刺激皮層運(yùn)動區(qū)驚厥閾值;柴胡注射液不僅能拮抗且對大鼠皮層放電及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的突觸傳遞過程有明顯的抑制效應(yīng)[19]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,柴胡醇提物可對抗MES驚厥。

石菖蒲水提液能延長回蘇靈、戊四唑所致小鼠驚厥潛伏期,降低回蘇靈致驚小鼠死亡率;石菖蒲醇提物能明顯對抗大鼠、小鼠的最大電休克發(fā)作和小鼠戊四唑及士的寧驚厥反應(yīng)[20]。

天南星浸出物對士的寧引起的小鼠驚厥有明顯抑制作用,且可明顯降低驚厥小鼠的死亡率,但對最大電休克模型無效[21]。本結(jié)果提示,天南星抗MES驚厥率最大可達(dá)70%,且抗MES作用呈量效正相關(guān)性。

鉤藤主要成分鉤藤堿,有阻滯外Ca2+內(nèi)流和內(nèi)Ca2+釋放[22],可顯著性抗MES,最大抗驚率達(dá)60%,且量效呈正相關(guān)性。藥后30 min起效,1 h達(dá)作用高峰,抗驚厥作用時(shí)間可持續(xù)6 h。

瑞香狼毒有逐水祛痰破積之功效。其丙酮提取物對最大電休克驚厥、戊四唑驚厥、聽源性驚厥及海藻酸驚厥模型都有較強(qiáng)的對抗作用,其抗癲癇機(jī)制與增強(qiáng)GABA抑制系統(tǒng)和限制G lu、Asp興奮擴(kuò)散有關(guān)[23]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,狼毒能對抗小鼠MES驚厥。

半夏主要成分半夏生物堿。用半夏粉治療癲癇12例,痊愈5例,顯效5例,無效2例[24]。到目前為止,尚未見半夏抗驚厥作用的動物實(shí)驗(yàn)研究資料。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,半夏有較強(qiáng)的抗MES驚厥作用,最大抗驚率可達(dá)80%,且量效呈正相關(guān)性,作用持續(xù)7 h。18種受試中藥醇提物中全蝎、半夏和知母抗MES作用最強(qiáng),其次為茯苓和天南星,而蜈蚣和蟬衣的抗驚厥效能最低。

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R743 R289

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2015.05.012

1672-1349(2015)05-0593-04

2014-06-30)

(本文編輯 王雅潔)

1山西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,山西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院(太原030001);2山西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院

程景民,E-m ail:13753166035@163.com