呂斌（浙江省江山市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督測試所，浙江江山324100）

蜂王漿中9種磺胺類藥物殘留測定方法研究

呂斌
（浙江省江山市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督測試所，浙江江山324100）

摘要：建立蜂王漿中9種磺胺類藥物殘留的固相萃取-高效液相色譜紫外分析方法。蜂王漿樣品中的磺胺類藥物殘留用乙腈渦旋提取，提取液旋轉(zhuǎn)濃縮近干后，用硫酸鈉水溶液溶解，再經(jīng)OasisHLB固相萃取柱凈化，洗脫液經(jīng)氮?dú)獯蹈珊螅靡译婧土姿崛芙?，用高效液相色譜分析，采用外標(biāo)法定量。該方法的檢測限為10μg/kg～15μg/kg，回收率在79.4%～84.3%之間，能滿足目前蜂王漿中磺胺類藥物殘留測定要求。

關(guān)鍵詞：蜂王漿；磺胺類藥物殘留；高效液相色譜紫外檢測器；固相萃取

磺胺類藥物（sulfonamides，SAs）是指具有對氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類藥物的總稱，是一類用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病的藥物?；前奉愃幬锞哂锌咕V較廣、性質(zhì)穩(wěn)定、使用簡便等特點(diǎn)，因此被廣泛添加到飼料中飼喂給蜂蜜?；前匪幬镌谑称坊蜣r(nóng)產(chǎn)品中的殘留，會致使其在人體中蓄積，導(dǎo)致人類對許多細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性，從而對人類的身體健康造成很大的危害。因此，很多國家對食品中磺胺的使用種類和用量有嚴(yán)格的規(guī)定。國際食品法典委員會（CAC）和歐美等大多數(shù)國家規(guī)定食品（包括蜂產(chǎn)品）和飼料中的SAs總量及磺胺二甲基嘧啶等單個SAs的含量不得超過0.1mg/kg。日本則規(guī)定食品中不得檢出SAs。

目前我國對磺胺類項(xiàng)目只有蜂蜜檢測標(biāo)準(zhǔn)，分別采用液相色譜-熒光檢測和LC/MS[1-2]，但鮮有相關(guān)蜂王漿中磺胺類藥物殘留檢測方法報(bào)道，這給我國蜂王漿產(chǎn)品的正常出口造成潛在風(fēng)險(xiǎn)。為了減少抗菌藥物的濫用，進(jìn)一步控制磺胺類藥物在蜂王漿中的殘留，并與國際檢測的先進(jìn)水平接軌，必須建立簡單易行的蜂王漿中磺胺類藥物的殘留檢測方法。通過調(diào)查，選擇9種磺胺（磺胺喹惡琳、磺胺氯噠嗪、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧噠嗪、磺胺噻唑、磺胺多辛、磺胺硝苯、磺胺吡啶）進(jìn)行方法研究，建立蜂王漿中9種磺胺類藥物殘留分析方法-高效液相色譜紫外測定法。

1　材料與方法

1.1材料

蜂王漿：由浙江江山健康蜂業(yè)有限公司提供。

SAs標(biāo)準(zhǔn)品（磺胺喹惡琳、磺胺氯噠嗪、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧噠嗪、磺胺噻唑、磺胺多辛、磺胺硝苯、磺胺吡啶）：Sigma公司；磷酸、硫酸鈉均為分析純；乙腈、甲醇均為色譜純；Oasis HLB萃取柱（200mg，6m L）。

高效液相色譜儀配紫外檢測器（日本島津LC-20AB）；無油真空泵（天津奧特賽恩斯儀器有限公司，AP-01D）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠，RE-52A）；高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠，TDL-50B）；超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司，KQ2200）；UP超純水器（成都超純科技有限公司，UPT-I-20T）。

1.2方法

1.2.1提取

準(zhǔn)確稱取蜂王漿樣品3.00g至50mL離心管中，加入5mL10%硫酸鈉水溶液振搖分散，然后加入30mL乙腈，渦旋提取8min，在6 000 r/min離心5min，吸取上清液，加入20mL乙腈溶液重復(fù)提取一次，離心，合并上清液到100mL雞心瓶中，在40℃下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至近干，加入5m L硫酸鈉水溶液溶解待凈化。

1.2.2凈化

將樣液過Oasis HLB萃取柱（200mg，6mL，使用前分別用5m L甲醇，5m L水活化），待洗脫液完全流出后，再用3mL水洗柱，在負(fù)壓下抽干30min，最后用10mL甲醇洗脫，洗脫液收集到15mL離心管中，在40℃下，氮吹濃縮至近干，用1mL流動相溶解，經(jīng)0.45μm濾膜后，供HPLC用。

1.3液相色譜操作條件

色譜柱：AgilentHC-C18（2）（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈+0.015mol/L磷酸梯度洗脫，見表1。

表1　乙腈-0.015mol/L磷酸為流動相梯度洗脫條件Table1　G radientelution condition ofacetonitrile-0.015m ol/L phosphoric acid

檢測波長：270 nm；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL。

1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取各磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)品于容量瓶中，以甲醇定容作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液，吸取各標(biāo)準(zhǔn)貯備液，以甲醇稀釋至質(zhì)量濃度為0～20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列，各取10μL進(jìn)樣分析，根據(jù)峰面積與相應(yīng)的質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2　結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)樣品及樣品添加分析色譜圖

實(shí)際標(biāo)樣和添加樣品分離色譜圖見圖1。

圖1　9種磺胺類藥物色譜圖Fig.1　Chrom atogram sofnine su lfonam idesstandardsand samp les

在設(shè)定的條件下對標(biāo)準(zhǔn)樣品和樣品進(jìn)行分析，從添加色譜圖上可以看出，9種磺胺藥物分離較好，沒有明顯的色譜雜質(zhì)峰干擾。

2.2線性關(guān)系和檢出限

分別配制不同濃度的9種磺胺類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在選定的色譜條件下進(jìn)行測定，用峰面積對混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中各組分的濃度作圖。線性方程和線性相關(guān)系數(shù)見表2。

2.3回收率和精密度

用不含9種磺胺類藥物的樣品進(jìn)行兩個添加水平回收率和精密度試驗(yàn)，結(jié)果列于表3。

從表3可以看出9種磺胺類藥物在兩個水平添加的回收率在79.4%～84.3%之間，變異系數(shù)小于5.4%，說明該方法能夠滿足對蜂王漿中9種磺胺類藥物的殘留測定。

表2　9種磺胺類藥物的線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限Table2　Regression equationsand detection lim itsofnine sulfonam ides

表3　9種磺胺類藥物的回收率（%）和精密度試驗(yàn)（n=5）Table3　Precisions and recoveries rateofnine su lfonam ides（n=5）

2.4實(shí)際樣品測定

應(yīng)用本方法對一些我市市場上的蜂王漿樣品進(jìn)行9種磺胺類藥物分析，未檢出上述9種磺胺類藥物殘留。

3　結(jié)論

本測定方法操作簡單快速、重現(xiàn)性良好。9種磺胺類藥物在蜂王漿中兩個水平的添加回收率在76.2%～84.3%之間，兩個不同水平的樣品測定（n=5）相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6%～6.2%，最低檢出限為10μg/kg。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB/T 18932.5—2002.蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基、嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲基異噁唑、磺胺二甲氧嘧啶殘留量的測定方法液相色譜法[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003

[2]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB/T 18932.17—2003.蜂蜜中16種磺胺殘留量的測定方法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2004

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.22.033

收稿日期：2014-05-04

基金項(xiàng)目：江山市事后補(bǔ)助科研項(xiàng)目（2011D09）

作者簡介：呂斌（1983—），男（漢），工程師，碩士研究生，主要從事檢驗(yàn)檢測工作。

Research of Determ ination of Nine Sulfonam ides Residue in Royal Jelly

LüBin
（Jiangshan Measurement&Test InstituteofQuality&Technical Supervision，Jiangshan 324100，Zhejiang，China）

Abstract：A method for determination of nine sulfonamides residue in royal jelly by using solid-phase extraction high performance liquid chromatography with ultraviolet detector was established.Sulfonamides residuewasextractedwith acetonitrile.The sampleextractwasevaporated under reduced pressure and dissolved with sodium sulfate aqueous solution，and then purified by usingan Oasis HLB column，while the sulfonamides residuewaseluted offvia solid-phase extraction（SPE）cartridgewithmethanol and evaporated to drynesson nitrogen dry evaporator，and the residues were dissolved in acetonitrile and phosphoric acid solution.The sulfonamides derivateswere detected by a liquid chromatography with ultraviolet detector.The recoveries are 79.4%～84.3%，and the limit of detection of themethod is 10μg/kg to 15μg/kg.The developedmethod is suitable tomonitor sulfonamides residue in royal jelly samples.

Keywords：royal jelly；sulfonamides residue；HPLC-SPD；solid-phaseextraction（SPE）