李玉芳，沈文香，楊 蘊，陳長廣，付愛林

（昆山市第一人民醫(yī)院腫瘤二科，江蘇215300）

組織芯片檢測胃癌組織中TOB1蛋白的表達及臨床意義

李玉芳，沈文香，楊 蘊，陳長廣，付愛林

（昆山市第一人民醫(yī)院腫瘤二科，江蘇215300）

目的 利用胃癌組織芯片研究胃腺癌及癌旁組織中ErbB2轉錄因子1（TOB1）的表達及臨床意義。方法 通過免疫組織化學法檢測含有90對胃腺癌及其癌旁組織的組織芯片中TOB1表達情況。結果 TOB1在胃癌組織中呈低表達為75.6%（68/90）、高表達為24.4%（22/90）；癌旁組織中TOB1呈低表達為14.4%（13/90）、高表達為85.6%（77/90）；TOB1在胃癌組織中表達較癌旁組織明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。TOB1表達于胃癌組織及癌旁組織的細胞質和細胞核中。TOB1在胃癌組織及癌旁組織細胞核中的表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；就細胞質而言，TOB1在胃癌組織中呈低表達為 82.2%（74/90）、高表達為17.8%（16/90）；癌旁組織中 TOB1呈低表達，為 22.2%（20/90）、高表達為77.8%（70/90）；TOB1在胃癌組織細胞質中表達較癌旁組織明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），并與腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、腫瘤分期明顯相關（P＜0.05）。結論 TOB1在胃癌組織細胞質中的低表達，并且與腫瘤分化、分期有關。TOB1作為一種抑癌基因可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，對判斷胃癌生物學行為和預后有一定的價值。

胃腫瘤； 轉錄因子； 染色與標記； 細胞分化

胃癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤[1]，研究發(fā)現(xiàn)胃癌發(fā)生發(fā)展多基因共同作用，這其中癌基因的活化是促使腫瘤發(fā)生的關鍵因素，但抑癌基因的失活在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中往往發(fā)揮著更為重要的作用[2]。ErbB2轉錄因子1（TOB1）基因是B細胞異位基因/ErbB2轉錄因子（BTG/TOB1）抗增殖蛋白家族中研究最多的一個成員，TOB1基因定位于染色體17q21，編碼含345個氨基酸的蛋白質分子，可以通過多種途徑影響腫瘤細胞惡性增殖、轉移和侵襲[3-5]。本實驗利用組織芯片研究胃癌及癌旁正常組織中TOB1的表達情況，并探討其與胃癌臨床病理學參數(shù)之間的關系及其意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 90對胃腺癌及癌旁組織標本取自上海芯超生物科技有限公司組織庫2010年2月至2015年1月新鮮手術切除標本，全部病例術前均未作化療或放療。90例患者中男 65例，女25例；年齡38～87歲，平均62歲；臨床分期：胃癌Ⅰ期15例，Ⅱ期27例，Ⅲ期38例，Ⅳ期10例；其中低分化腺癌37例，中分化腺癌50例，高分化腺癌3例；有淋巴結轉移59例，無淋巴結轉移31例。每例胃腺癌患者均取癌旁組織作為對照。所有患者均知情同意，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過。所有組織標本取出后迅速用10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋備用。

1.2 方法

1.2.1 試劑與組織芯片制備 抗TOB1單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，二抗由上海芯超生物科技有限公司提供。組織芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。首先，對每一個標本蠟塊進行切片、蘇木精-伊紅（HE）染色；然后，在顯微鏡下對需穿取的組織進行定位，每一個標本選取癌組織及癌旁正常組織各1個點，共計180個位點。用組織陣列儀（基泰公司）設計抽提的組織陣列塊在52℃恒溫烤箱中加熱融合，用全自動組織切片機（萊卡公司）依次從標本蠟塊上穿取直徑為1.0 mm的組織芯，按5mm的厚度連續(xù)切片，切片裱附在防脫片處理的載玻片上，陣列切片置于60℃恒溫烤箱中烤片16h，置于5℃冰箱保存。所得組織芯片的每個點均需經(jīng)過病理診斷。采用二步法進行免疫組織化學（免疫組化）染色。用檸檬酸高溫高壓法進行抗原修復。

1.2.2 免疫組化染色結果判斷 結果采用半定量積分法，即對每個點的陽性細胞率及陽性細胞著色強度分別進行分級記分。按表達為陽性的細胞數(shù)量占這個組織芯中該類細胞總數(shù)的比率作為這個組織芯的陽性率。以5%為一個遞增值，染色的細胞數(shù)陽性率0為（0）；5%～30%為（1）；35%～70%為（2）；75%～95%為（3），結果由二者相乘而得，0～2分為低表達，≥3分為高表達。細胞核或細胞質含棕黃色顆粒者為陽性。TOB1陽性著色位于細胞核和細胞質中。按染色強度分為0、1、2、3這4個級別，即0表示陰性；1表示染色強度為淡黃或淺棕色；2表示染色強度為黃或棕色；3表示染色強度為棕黃或深棕色。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以率或構成比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

TOB1在胃癌組織中呈低表達為75.6%（68/90）、高表達為24.4%（22/90）；癌旁組織中TOB1呈低表達為14.4%（13/90）、高表達為85.6%（77/90）；TOB1在胃癌組織中表達較癌旁組織明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。TOB1在胃癌組織及癌旁組織的細胞質和細胞核中均有表達，主要位于細胞質。就細胞質而言，TOB1在胃癌組織中呈低表達為82.2%（74/90）、高表達為17.8%（16/90）；癌旁組織中TOB1呈低表達為22.2%（20/90）、高表達為77.8%（70/90），見圖1；TOB1在胃癌組織細胞質中表達較癌旁組織明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），并與分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移、腫瘤分期明顯相關（P＜0.05）。見表1。

圖1 TOB1在胃癌及癌旁正常組織中的表達情況

表1 胃癌患者臨床病理特征與TOB1表達的關系

續(xù)表1 胃癌患者臨床病理特征與TOB1表達的關系

3 討 論

TOB1蛋白是1996年日本學者Matsuda在篩選與ErbB2相互作用的蛋白時首次發(fā)現(xiàn)，因此被命名為TOB1。TOB1基因定位于染色體17q21，編碼含345個氨基酸的蛋白質分子[6]。TOB1是TOB/BTG抗增殖蛋白家族中研究最多的一個成員，有研究表明，TOB1基因在抑制腫瘤細胞增殖、轉移過程中發(fā)揮重要的作用[7]。

目前，組織芯片技術已廣泛用于人類腫瘤的研究，在腫瘤相關基因的生物學功能及篩選腫瘤相關標志物等方面發(fā)揮了重要作用。其與基因芯片技術聯(lián)合可用于新的腫瘤候選基因的篩選；與免疫組化聯(lián)合可用于蛋白水平的腫瘤標志物的篩選[8]。目前臨床上TOB1在胃癌組織中表達水平的研究甚少，本試驗采用組織芯片技術研究胃癌及癌旁組織中TOB1的表達及臨床意義。研究發(fā)現(xiàn)，TOB1在胃癌組織中的表達水平較癌旁組織明顯降低，并與分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移、腫瘤分期明顯相關。綜合既往的研究結果，作者認為TOB1在胃癌的發(fā)生發(fā)展、遠處轉移過程中發(fā)揮重要作用[9]，其作用機制有待進一步研究，這將為TOB1為靶點進行腫瘤靶向治療提供新的理論依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.22.024

B

1009-5519（2015）22-3431-03

2015-08-04）

李玉芳（1968-），女，湖北麻城人，主任醫(yī)師，主要從事腫瘤的臨床與基礎研究工作；E-mail：18952455458@126.com。