李 婕

（彭州市人民醫(yī)院病理科，四川611930）

胸腹水液基細胞學(xué)剩余標本制作細胞塊的不同方法探討

李 婕

（彭州市人民醫(yī)院病理科，四川611930）

目的探討胸腹水液基細胞學(xué)剩余標本制作細胞塊的不同方法，優(yōu)化其程序。方法選擇110例胸腹水薄層液基細胞學(xué)技術(shù)（TCT）檢測剩余標本，根據(jù)細胞學(xué)診斷結(jié)果將標本分為A組和B組，每組55例。A組采用直接離心法處理后制作石蠟細胞塊，B組采用細胞塊試劑盒法處理后制作石蠟細胞塊，統(tǒng)計2種不同方法細胞切片惡性細胞的檢出率。結(jié)果110例胸腹水TCT檢測出惡性細胞率為32.73%（36/110），剩余標本經(jīng)細胞塊法檢測出總惡性細胞檢出率為45.45%（50/110）；以直接離心法惡性細胞檢出率為38.18%（21/55），細胞塊試劑盒法惡性細胞檢出率為52.73%（29/55），兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；細胞聚集度及細胞分布細胞塊試劑盒法優(yōu)于直接離心法。結(jié)論細胞塊試劑盒法與直接離心法比較，前者明顯可以提高胸腹水液基細胞學(xué)剩余標本的惡性細胞檢出率，同時可用于免疫細胞化學(xué)的檢測。

胸腔積液； 腹水； 細胞學(xué)技術(shù)； 標本； 標本制備

胸腹水的細胞學(xué)檢查時病理科室日常檢查工作的其中之一，檢測時常常采用離心涂片后進行HE染色后進行鏡檢[1]。在常規(guī)涂片檢查中會存在著細胞的重疊，細胞的成分較少，因此會導(dǎo)致檢測結(jié)果的檢出率偏低，而常規(guī)涂片難以進行細胞免疫組織化學(xué)染色。傳統(tǒng)的細胞學(xué)制片存在一定的缺陷，給細胞學(xué)診斷的成功率造成影響，本院采用了液基細胞學(xué)制片及細胞塊試劑盒制片聯(lián)合應(yīng)用，取得了一定的效果?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 110例胸腹水薄層液基細胞學(xué)技術(shù)（thinprep cytologic test，TCT）的剩余標本收集于2014年7月至2015年1月本院病理科室；95%乙醇溶液（購于江蘇生物科技股份有限公司，生產(chǎn)批號：20140627）。臺式低速離心機（河北白洋淀安新縣離心機廠），Tissue-Tek VIP 6Jr 5784型脫水機器（Sakura Finetek Japan Co.Ltd），Tissue-TekTEC5石蠟包埋機器（Sakura Finetek Japan Co. Ltd），CBT（細胞塊包埋）機器（濟南器械醫(yī)療公司）。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組 110例胸腹水TCT剩余標本[其中CTC檢測出惡性細胞率為32.73%（36/110）]，根據(jù)細胞病理學(xué)的診斷結(jié)果，將剩余標本分為A組和B組，每組55例。各組中A組和B組中TCT法檢出的惡性細胞數(shù)量分別為19例、17例。

1.2.2 制作方法

1.2.2.1 A組（直接離心法） TCT剩余標本采用直接離心方法進行，將剩余標本采用微量加樣器移至離心管中，采用低速離心機離心3 min后，將上清液棄去后，將5倍體積的95%乙醇溶液沿著離心管壁緩緩加入，進行3～5 min的凝固[2]，再次放置于低速離心機中，2 500 r/min，離心5 min，離心半徑為8.0 cm。進行1～2 h的固定后采用擦鏡紙將離心管包好后放入包埋盒內(nèi)，處理方式同常規(guī)組織病理檢查標本。

1.2.2.2 B組（細胞塊試劑盒法） 采用細胞塊試劑盒法進行檢測，TCT剩余標本通過微量移液器將標本移入離心管中，放置于低速離心機中進行離心，離心時間為3 min，機器靜置后將離心管中的上清液棄去后，加入細胞塊試劑A試劑，混合均勻后常溫靜置15 min后，放入低速離心機，2 500 r/min，進行離心5 min，離心半徑為8.0 cm。離心機靜置后將離心管中的上清液再次棄去，將等量的B試劑液加入到離心管中，吹打均勻后，加入等量的C試劑液，用手指彈擊試管，直到離心管中析出細胞標本的絮狀物質(zhì)，再次放入低速離心機中，2 500 r/min，進行5 min離心（離心半徑為8.0 cm），再次將上清液棄去，采用擦鏡紙包好后放入包埋盒內(nèi)，其處理方式均同常規(guī)組織病理檢查標本。

1.2.3 HE染色和免疫組織化學(xué)法染色 免疫組織化學(xué)試劑盒購于上?；蚩萍加邢薰?。2種細胞塊進行常規(guī)的脫水、進行石蠟包埋后，進行連續(xù)切片，切片厚度為3.0～5.0 μm，進行常規(guī)HE染色，免疫組織化學(xué)法染色采用En Vision Plus法，常規(guī)采用AE1/3、TTF-1和P53抗體[3]。

1.2.4 觀察指標 2種方法制作細胞塊檢測結(jié)果比較由本院資深的病理醫(yī)師進行切片的觀察、檢測，與TCT細胞學(xué)檢測結(jié)果進行比較，對有細胞及組織病理學(xué)檢查的病例對其免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進行比較。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，惡性細胞的檢出率比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

110例胸腹水TCT檢測出惡性細胞率為32.73%（36/110），剩余標本經(jīng)細胞塊法檢測出總惡性細胞檢出率為45.45%（50/110）；以直接離心法惡性細胞檢出率為38.18%（21/55），細胞塊試劑盒法惡性細胞檢出率為52.73%（29/55），兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩種細胞塊制片惡性細胞數(shù)量的檢出率比較[n（%）]

3 討 論

胸腹水細胞學(xué)檢查對腫瘤的診斷、鑒別診斷和預(yù)后的觀察具有更加重要的臨床意義[4]。普通的直接離心涂片是常用的胸腹水細胞檢測方法，但近幾年來TCT及其他方式均普遍應(yīng)用于日常的病理診斷檢測中[5]。TCT主要采用液基薄層細胞檢測系統(tǒng)對細胞進行檢測同時進行細胞學(xué)分類的診斷，但是對疑似腫瘤標本，可疑和高分化的癌細胞、反應(yīng)性間皮細胞以及間皮瘤等鑒別準確率較低，只能采用免疫組織化學(xué)方法的進行深入的檢查。

TCT檢測后標本會保存一段時間后丟棄，剩余的標本中有大量的細胞，對剩余胸腹水標本進行進一步處理后可以對標本進行多次利用，收集的脫落細胞制成的石蠟包塊有組織學(xué)優(yōu)點。細胞塊石蠟切片同時可以用免疫組織化學(xué)染色法對腫瘤細胞進行標記，可以提高胸腹水細胞診斷的準確率，對預(yù)后的判斷具有一定的臨床意義[6-10]。細胞塊技術(shù)主要將樣品進行離心，細胞以及微小組織塊被高度濃縮后進行了凝聚和固定，進行脫水及石蠟包埋后制成切片，染色后進行測定，細胞塊均勻，區(qū)域密集度均良好，惡性細胞的檢出率較高。本研究結(jié)果也表明，采用細胞塊試劑盒方法對惡性細胞的檢出率高于直接離心后惡性細胞的檢出率（P＜0.05）。

綜合上述，合適的細胞塊制作方法，對惡性細胞檢出率較為重要，本院采用了細胞塊試劑盒方式職稱細胞塊用于檢測，其惡性細胞檢出率較高，方法操作簡單，檢測結(jié)果明顯，值得臨床病理檢測中應(yīng)用。

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1009-5519（2015）20-3142-03

2015-06-30）

李婕（1976-），女，四川彭州人，副主任醫(yī)師，主要從事肺、胸膜腫瘤診治工作；E-mail：liqunyingsuili@163.com。