劉寧寧,李鑫輝,李雅婧,葛 輝,姜友貴

栝蔞薤白保健酒抗動脈粥樣硬化的實驗研究

劉寧寧,李鑫輝,李雅婧,葛 輝,姜友貴

目的研究栝蔞薤白保健酒對動脈粥樣硬化大鼠血脂和炎癥因子的影響,探討對動脈粥樣硬化的保護作用機制。方法大鼠40只,隨機分為空白組、模型組、他汀組、保健酒組,每組10只。采用全自動生化分析儀檢測血脂水平,采用放射免疫法測定血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-2(IL-2)水平。結(jié)果與模型組比較,他汀組、保健酒組總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、TNF-α和IL-2水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01),與他汀組比較,保健酒組TC水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),TG、LDL-C、TNF-α和IL-2水平差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)論栝蔞薤白保健酒對動脈粥樣硬化鼠血脂和炎癥因子具有調(diào)節(jié)作用,提示栝蔞薤白保健酒對動脈粥樣硬化具有抑制作用。

動脈粥樣硬化;栝蔞薤白保健酒;血脂;炎癥因子

動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是一種多因素參與的疾病,發(fā)病機制錯綜復雜,是心腦血管病發(fā)生的最主要原因,針對以上人群,自主研制了栝蔞薤白保健酒,是根據(jù)傳統(tǒng)中藥組方,結(jié)合現(xiàn)代新工藝研究制作的一種藥酒。栝蔞薤白保健酒組方首見于《金匱要略》,主治“胸痹不得臥、心痛徹背”。方中栝蔞開結(jié)豁痰,薤白溫中散結(jié),復方栝蔞薤白白酒湯具有通陽散結(jié)、祛痰行氣之功效。近代藥理實驗結(jié)果已表明,栝蔞、薤白具有擴張冠脈、縮小梗死面積、抗脂質(zhì)過氧化、抗血小板聚集等作用[1,2]。本研究觀察栝蔞薤白保健酒對血脂和炎癥水平的影響,為栝蔞薤白保健酒抗動脈粥樣硬化,防治心血管疾病提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD系大鼠40只,雌雄各半,清潔級,日齡30d～45d,體重150g～200g,由湖南中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供。

1.2 儀器 全自動生化分析儀,CL-7200型,島津儀器廠生產(chǎn);電熱恒溫水槽,SSW型,上海博迅實業(yè)有限公司生產(chǎn);H- 600型透射電鏡(Hitachi,Japan), Olympus顯微鏡(Japan);放射免疫計數(shù)器,acl500r型,中國科技大學。

1.3 試劑及藥物 栝萎薤白保健酒,自發(fā)研制,含生藥0.45 g/mL。維生素D3,購自上海第九制藥廠;甲巰咪唑,購自上海中西藥業(yè)股份有限公司;膽酸鈉,購自溫州生物化學制藥廠;總膽固醇(TC),購自北京化學試劑公司;豬油為市售食用豬油;血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-2(IL-2)試劑,購自北京科美東雅生物技術(shù)有限公司;總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒,購自北京北化康泰臨床試劑有限公司;阿托伐他汀鈣片,輝瑞制藥有限公司生產(chǎn)。

1.4 分組及給藥 將大鼠按雌雄和體重分層,再用隨機數(shù)字表法隨機分為空白組、模型組、他汀組、保健酒組,每組10只大鼠,雌雄各半。給藥劑量根據(jù)成人(60 kg)臨床劑量,按動物體表面積換算,空白組和模型組在大鼠AS模型建立后灌胃蒸餾水10 mL/(kg·d);他汀組灌胃阿托伐他汀鈣片,蒸餾水融化10 mL/(kg·d),含生藥1.8 g/(kg·d);保健酒組灌胃栝蔞薤白保健酒2.7 mL/(kg·d),含生藥1.2 g/(kg·d),每日1次,連續(xù)灌胃14 d。

1.5 大鼠AS模型建立 模型的復制參照溫進坤等[3]的方法略作修改?？瞻捉M大鼠喂食普通飼料;模型組、他汀組、栝蔞薤白保健酒組建立AS模型,首先腹腔注射維生素D3(7×105IU/kg,分4次,隔2 d注射1次),然后喂食高脂飼料,在大鼠標準飼料配方中添加1%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.1%甲巰咪唑、5%豬油,93.4%為普通飼料[4]。按清潔級動物飼養(yǎng),飲用潔凈水,整個試驗周期為8周。于造模8周后隨機抽取空白組1只,造模組5只,觀察主動脈的病理形態(tài)學變化,以觀察到主動脈AS病變?yōu)闃藴蚀_定造模成功。

1.6 檢測指標 分別于8周后禁食過夜,鼠頸動脈取血,分離血清,采用全自動生化分析儀檢測血清TC、TG、LDL-C。采用放射免疫法測定血清TNF-α和IL-2。處死動物,分離各組大鼠主動脈弓,截取主動脈弓放入4%多聚甲醛固定液中固定,石蠟包埋、切片、HE染色,光鏡觀察主動脈形態(tài)以確定造模成功。

1.7 統(tǒng)計學處理 采用SPSS11.50統(tǒng)計軟件分析,計量資料用均數(shù)±標準差(x±s)表示,多組間兩兩比較用單因素方差分析,方差齊時,兩兩比較用q檢驗,方差不齊時用非參數(shù)檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 栝蔞薤白保健酒對AS大鼠血脂水平的影響 與空白組比較,模型組TC、TG、LDL-C水平明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),說明大鼠AS模型建立后血脂水平明顯升高,符合動脈粥樣硬化特征。與模型組比較,他汀組、保健酒組TC、TG、LDL-C,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01);與他汀組比較,保健酒組TC,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),TG、LDL-C水平差異無統(tǒng)計學意義。說明栝蔞薤白保健酒對AS大鼠有明顯的降低血脂作用,且與他汀類藥物降血脂水平相當。詳見表1。

表1 各組血脂水平比較(±s)mmol/L

表1 各組血脂水平比較(±s)mmol/L

組別nTCTG LDLC空白組 101.31±0.12 0.52±0.12 1.15±0.05模型組 106.65±1.131)1.65±0.021)5.15±1.361)他汀組 103.15±1.561)3)0.82±0.121)3)2.63±1.331)3)保健酒組10 3.87±1.341)2)4)0.95±0.231)2)3.01±0.331)2)與空白組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.05,3) P<0.01;與他汀組比較,4)P<0.05。

2.2 栝蔞薤白保健酒對AS大鼠TNF-α和IL-2水平的影響 與空白組比較,模型組TNF-α和IL-2水平明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較,他汀組、保健酒組TNF-α和IL-2水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01);他汀組與保健酒組TNF-α和IL-2水平比較差異無統(tǒng)計學意義。說明栝蔞薤白保健酒對AS大鼠炎癥因子水平有明顯的抑制作用。詳見表2。

表2 各組TNF-α和IL-2水平比較(±s)ng/mL

表2 各組TNF-α和IL-2水平比較(±s)ng/mL

組別n TNFαIL2空白組101.35±0.23 2.43±0.05模型組105.53±1.331)6.15±1.421)他汀組103.23±0.771)2)4.13±1.671)2)保健酒組102.95±1.121)3)4.01±1.131)2)與空白組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.05,3) P<0.01。

3 討 論

動脈粥樣硬化的特點是受累動脈病變從內(nèi)膜開始。一般先有脂質(zhì)和復合糖類積聚、出血及血栓形成,纖維組織增生及鈣質(zhì)沉著,并有動脈中層的逐漸蛻變和鈣化,病變常累及彈性及大中等肌性動脈,一旦發(fā)展到阻塞動脈腔,則該動脈所供應的組織或器官將缺血或壞死。由于在動脈內(nèi)膜積聚的脂質(zhì)外觀呈黃色粥樣,因此稱為動脈粥樣硬化。本病的主要病理變化是動脈壁出現(xiàn)粥樣斑塊,而膽固醇和膽固醇酯則是構(gòu)成粥樣斑塊的主要成分。臨床資料表明,動脈粥樣硬化常見于高膽固醇血癥[5]。隨著醫(yī)學的發(fā)展,對動脈粥樣硬化發(fā)病機制的研究轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N多種因素導致的炎癥反應性疾病,炎癥貫穿于動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的全過程,對動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展發(fā)揮了至關(guān)重要的作用[6]。炎癥因子TNF-α和IL-2具有廣泛的生物學活性,在動脈粥樣硬化、代謝紊亂和炎癥中發(fā)揮作用:可以降低高密度脂蛋白(HDL)水平及誘導胰島素抵抗,誘導脂類和糖類代謝異常;也可導致內(nèi)皮細胞功能障礙,促使血栓形成;并且還可以刺激炎癥因子生成,直接發(fā)揮促炎作用,從而加速動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展。杜易平[7]探討瑞舒伐他汀對兔動脈粥樣硬化模型的斑塊以及炎癥因子的影響作用,結(jié)果顯示瑞舒伐他汀能夠較好地控制動脈粥樣硬化模型兔的血脂水平以及炎癥因子水平,減少動脈粥樣硬化模型兔斑塊的形成。陳曉等[8]研究顯示,C反應蛋白(CRP)、TNF-α、白細胞介素-6(IL-6)等炎性因子的增加及脂質(zhì)代謝紊亂與老年高血壓患者頸動脈粥樣硬化的發(fā)生關(guān)系密切。

AS屬中醫(yī)痰濁、血瘀的范疇。飲食不節(jié)、脾失健運而致痰濁,痰濁內(nèi)聚,注入血脈,滯塞脈絡,日久營血瘀滯,痰瘀互結(jié),沉積血府,脈道失柔,這種痰濁瘀血相凝之結(jié)塊即是AS斑塊。栝蔞薤白白酒湯是治療胸痹的名方,具有溫通心陽,化痰通絡的功效,從現(xiàn)代醫(yī)學角度分析,栝蔞和薤白都有清除氧自由基的作用,因為氧自由基可以攻擊蛋白質(zhì),使許多蛋白質(zhì)功能喪失,直接作用于細胞膜與膜結(jié)。開發(fā)栝蔞薤白保健酒,研究其對動脈粥樣硬化保護作用,采用喂食高脂飼料與一次性腹腔注射維生素D3相結(jié)合的方法,8周后成功建立了AS大鼠的模型,并在光鏡下觀察到了主動脈HE染色切片典型的AS斑塊病變,實驗結(jié)果顯示保健酒對AS大鼠血脂水平有明顯的降低作用,且與他汀類藥物降血脂水平相當。觀察栝蔞薤白保健酒對AS大鼠TNF-α和IL-2水平的影響,結(jié)果顯示保健酒對AS大鼠炎癥因子水平有明顯的抑制作用。由此提示栝蔞薤白保健酒對動脈粥樣硬化具有抑制作用。

隨著生活水平的提高,人們對健康的需求也越來越高,栝蔞薤白保健酒不僅擁有純糧酒的醇和,而且還可以調(diào)節(jié)生理機能。本研究提示栝蔞薤白保健酒對動脈粥樣硬化具有抑制作用,因此栝蔞薤白保健酒達到養(yǎng)生和治病的目的,市場開發(fā)前景潛力較大。

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R543.5R289.5

:Adoi:10.3969/j.issn.1672-1349.2015.02.023

:1672-1349(2015)02-0198-03

2014-04-19)

(本文編輯郭懷印)

湖南省自然基金資助項目(No.12JJ3114);中國博士后基金項目(No.20110491254);湖南省教育廳基金項目(No.11C0962);湖南省大學生創(chuàng)新課題(No.180)

湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)學院(長沙410208)

李鑫輝,E-mail:2208637467@qq.com