劉紅

哈藥集團生物工程有限公司

高效液相色譜法測定吉西他濱含量

劉紅

哈藥集團生物工程有限公司

目的建立吉西他濱含量測定方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為KromasilC8（250mm*4.6mm,5mm），以甲醇：0.075mol/L的醋酸銨溶液為流動相，檢測波長為275nm。結(jié)果耐用性試驗符合規(guī)定，溶液溶度在一定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，重復性及中間精密度符合規(guī)定，溶液穩(wěn)定性研究結(jié)果表明溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)論所建立的含量測定方法操作簡便、準確，重現(xiàn)性好，與滴定法測定無差別，所建立方法可用于本品含量測定。

鹽酸吉西他濱；方法學；高效液相色譜法；滴定法

鹽酸吉西他濱是一種破壞細胞復制的二氟核苷類抗代謝物抗癌藥，是去氧胞苷的水溶性類似物，對核糖核苷酸還原酶是一種抑制性的酶作用物的替代物，這種酶在DNA合成和修復過程中，對所需要的脫氧核苷酸的生成是至關(guān)重要的。我們采用高效液相色譜法測定鹽酸吉西他濱含量，建立本品含量測定方法。

1.儀器與試藥

Agilent 1260 Series高效液相色譜儀，甲醇為色譜純，色譜柱KromasilC8（250mm*4.6mm,5mm）鹽酸吉西他濱對照品（批號：100622-201202，50mg/支，含量：99.8%），鹽酸吉西他濱由哈藥集團生物工程公司提供，其它試劑均為分析純。

2.方法與結(jié)果

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇：0.075mol/L的醋酸銨溶液（用醋酸調(diào)pH至5.0）（80：20）為流動相，檢測波長為275nm。理論板數(shù)按鹽酸吉西他濱峰計算應不低于8000。

測定法取本品，精密稱定，用流動相溶解并制成每1m l含20μg的溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另精密稱取對照品，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

2.1 耐用性試驗

更換色譜柱（相同品牌不同批號的色譜柱）、流動相比例、柱溫及流速，考察樣品含量測定結(jié)果的差異，結(jié)果表明各項指標變化對含量測定結(jié)果無明顯影響，耐用性試驗符合規(guī)定。

2.2 線性范圍

精密稱取鹽酸吉西他濱對照品51.6mg，加流動相溶解并稀釋制成濃度約為5mg/m l的溶液，搖勻，作為對照品儲備液。分別精密量取對照品儲備液0.5ml、1ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，置10ml容量瓶中，分別加流動相稀釋至刻度，搖勻。制成系列溶度溶液，分別精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算線性回歸方程，結(jié)果當進樣量為20μl時鹽酸吉西他濱在0.25mg/m l～1.5mg/m l濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 準確度試驗

精密稱取鹽酸吉西他濱對照品2份，加流動相并稀釋制成1mg/ml的溶液，作為對照品溶液。另精密稱取鹽酸吉西他濱原料9份，制成濃度為0.8mg/m l的鹽酸吉西他濱溶液三份，制成濃度為1.0mg/m l的鹽酸吉西他濱溶液三份，制成濃度為1.2mg/m l的鹽酸吉西他濱溶液三份，作為供試品溶液的80%、100%、120%組。精密量取對照品溶液及各供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算鹽酸吉西他濱的含量，計算回收率。結(jié)果吉西他濱的平均回收率為99.1%，相對標準偏差為0.5%，準確度試驗符合要求。

2.4 重復性及中間精密度試驗

精密稱取鹽酸吉西他濱原料適量，分別加流動相使溶解并稀釋制成供試品溶液，共制備6份供試品溶液。按照擬定的含量測定方法進行試驗，結(jié)果表明本品平均含量為99.7%，RSD為0.6%，重復性較好。

取供試品鹽酸吉西他濱供試品，照含量測定方法進行試驗，變動因素為人員、時間及實驗儀器，考察含量測定結(jié)果變化情況。結(jié)果12次測定吉西他濱原料的平均含量為99.8%，RSD為0.7%，中間精密度符合規(guī)定。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

精密稱取鹽酸吉西他濱原料及鹽酸吉西他濱對照品各供適量，按照含量測定方法制備鹽酸吉西他濱供試品溶液及對照品溶液，在25℃及5℃條件下分別放置24小時，分別于0小時、1小時、2小時、4小時、6小時及8小時、12小時計24小時進樣?？疾旃┰嚻芳皩φ掌啡芤褐鞣宸迕娣e變化，結(jié)果供試品及對照品溶液主峰峰面積相對標準偏差分別為0.16%及0.24%，含量變化在±1%以內(nèi)，表明供試品溶液及對照品溶液在25℃及5℃條件下放置24小時穩(wěn)定。

2.6 定量限

取鹽酸吉西他濱對照品，加流動相使溶解，作為定量限測定的對照品溶液，根據(jù)吉西他濱主峰與基線的信噪比，不斷稀釋對照品溶液進樣，當信噪比約為10：1時溶液濃度為定量限溶液溶度，結(jié)果在溶度為0.1ug/m l時信噪比約為10：1。取此時對照品溶液，重復進樣6次，相對標準偏差為0.51%，符合規(guī)定。

2.7 樣品含量測定

取鹽酸吉西他濱原料，采用擬確定的含量測定方法進行測定，結(jié)果三批樣品含量分別為100.6%，99.8%，99.6%。為評價含量測定方法準確定，采用滴定法[5-6]對含量進行測定，結(jié)果三批樣品含量分別為99.9%，99.4%及99.6%，高效液相色譜法與滴定法測定結(jié)果一致。

3.討論

所建立含量測定方法可行，操作簡便，結(jié)果準確，重現(xiàn)性好，專屬性強，與滴定法相比含量測定結(jié)果一致?？捎名}酸吉西他濱原料的含量測定。

[1]李益振,李臣貴,胡育筑.HPLC法測定鹽酸吉西他濱含量及有關(guān)物質(zhì),海峽藥學，2010年第6期:67-70.

[2]王廣明,王清,秦麗麗.高效液相色譜法測定注射用鹽酸吉西他濱中主藥的含量.世界最新醫(yī)學信息文摘,2013年第23期:6-7.

劉紅（1978-），女，黑龍江哈爾濱市人，哈藥集團生物工程有限公司，質(zhì)量檢測中心，化驗員，工程師。