趙 海 喻懋國 李 平*

(1.貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550003; 2.貴州景誠制藥有限公司，貴州 修文 550200)

紫金蓮為藍(lán)雪科植物紫金蓮Ceratostigma willmottianum Stapf 的干燥根。主要分布于貴州貴陽、畢節(jié)、水城等地［1］，為貴州少數(shù)民族地方用藥。收載于《貴州省中藥、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2003年版)，原標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下僅有外觀性狀鑒別和顯色反應(yīng)鑒別項(xiàng)［2］。我們對不同產(chǎn)地(畢節(jié)、水城、六枝)紫金蓮的外觀性狀、顯微鑒別、薄層鑒別、浸出物、總黃酮及白花丹醌含量測定研究分析，報(bào)道如下。

1 藥材來源

藥材采自水城、六枝、畢節(jié)地區(qū)，經(jīng)貴州省藥檢所中藥室林開忠教授鑒定為藍(lán)雪科植物紫金蓮Ceratostigma willmottianum Stapf 的干燥根。

2 儀器與試藥

高效液相色譜儀(日本島津/LC -20AT);紫外分光光度計(jì)UV 1801(上海美析儀器有限公司);AL204 電子天平型(梅特勒-托利多);XSP -8CC 顯微鏡(上海蔡康);ZF-2 型三用紫外儀。

無水蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110731 -201004，供含量測定用);白花丹醌對照品(進(jìn)口，批號：20140132，經(jīng)歸一化法測定其純度達(dá)99.5%);紫金蓮對照藥材(中國藥品生物制品檢定所，批號：120965 -200703，供薄層鑒別用);槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號100081 -200406：，供含量測定用);甲醇為色譜純;其余試劑為分析純;水為超純水。

3 性狀

均符合《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2003年版)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目。根莖短，結(jié)節(jié)狀，具支根多條;粗根呈圓柱形，彎曲，偶見扭曲，長10 ～20cm，直徑0.4 ～0.8cm 或更粗。表面淡褐色至深褐色或棕紫色。上部具側(cè)枝莖痕，兩莖痕間有微曲細(xì)縱紋，并有小圓點(diǎn)狀細(xì)根痕散在。質(zhì)脆，易折斷，斷面纖維狀，淺紅色或淡藍(lán)色，中心髓部約占直徑的1/3，淺褐色。氣微香，味甘、淡。

4 鑒別

4.1 顯微鑒別：橫斷面：木栓層為數(shù)列細(xì)胞，呈淡黃色。韌皮部較寬，薄壁細(xì)胞內(nèi)側(cè)有多量的纖維細(xì)胞，能見形成層環(huán)。木質(zhì)部的射線明顯，射線之間有導(dǎo)管和空腔呈放射性排列。粉末：呈橙黃色，方晶散在或存于晶鞘纖維中，多見網(wǎng)紋導(dǎo)管。淀粉粒呈星狀，復(fù)粒較少，木栓細(xì)胞排列緊密。各產(chǎn)地紫金蓮顯微鑒別沒有明顯區(qū)別。

4.2 薄層鑒別

4.2.1 取本品粉末(過三號篩)1g，加乙醚15mL，浸漬1h，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液室溫?fù)]盡乙醚，殘?jiān)蛹状?.5mL 使溶解，作為供試品溶液。另取紫金蓮對照藥材1g，加乙醚10mL，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》一部ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述2 種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以氯仿-甲醇(9：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%氫氧化鉀乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。

表1

4.2.2 取本品粉末5g，加甲醇-水(1：1)60mL，加熱回流1h，趁熱濾過，濾液濃縮至約30mL 后，加5% 硫酸溶液2mL，回流1.5h 后，用醋酸乙酯振搖提取2 次，每次25mL，合并醋酸乙酯液，濃縮至約1mL，作為供試品。另取槲皮素對照品，加醋酸乙酯溶解，制成每1mL 含0.5mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 ～10μL，分別點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，以甲苯(水飽和)-甲酸乙酯-甲酸(5：4：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%的三氯化鋁的乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。

表2

5 浸出物

參考《中國藥典》2010年版一部附錄X A 浸出物測定法項(xiàng)下水溶性浸出物測定法中的熱浸法測定。實(shí)測樣品3批，結(jié)果見表1。

6 總黃酮含量測定

6.1 對照品溶液的制備：精密稱取無水蘆丁對照品50mg(49.86mg)，置50mL 量瓶中，加60%乙醇35mL，微熱使溶解，放冷，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取10mL，置50mL 量瓶中，加水至刻度，搖勻，既得(每1mL 中含無水蘆丁0.19976mg)。

6.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密量取對照品溶液1mL、2mL、3mL、4 mL、5 mL、6 mL，分別置25mL 量瓶中，加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6min，加10%硝酸鉛溶液1 mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 分鐘，以相應(yīng)的試劑作空白，找紫外-可見分光光度發(fā)附錄(V A)，在500nm 波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6.3 測定法：取供試品粉末(過三號篩)0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，加60%乙醇100mL，稱定重量，加熱回流2 小時(shí)，放冷，稱定重量，用60%乙醇補(bǔ)足重量，過濾，精密吸取續(xù)濾液5 mL，置25 mL 量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6 mL”起，依法操作，另精密吸取續(xù)濾液5mL，加水稀釋至25mL，搖勻，作空白，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中無水蘆丁的重量，計(jì)算，即得。

6.4 樣品測定 結(jié)果見表1。

7 白花丹醌含量測定［3］

7.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜柱：Diamonsil C18柱(200 ×4.6mm 5μm);流動(dòng)相：甲醇-水(75：25);檢測波長：265nm;流速：1.0mL·min-1，理論板數(shù)按白花丹醌(C11H8O3)峰計(jì)算，不低于5000。

7.2 對照品溶液制備：取白花丹醌對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL 含15μg 的對照品溶液(濃度：14.96μg/mL)。

7.3 供試品溶液制備：精密稱取本品0.1g，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50mL，稱定重量，超聲30 min，放置至室溫，過濾，取續(xù)濾液，即得。

7.4 測定法：按照上述色譜條件，取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

7.5 樣品測定：結(jié)果見表1。

表1 樣品水溶性浸出物、總黃酮、白花丹醌含量測定值(n=3)

8 結(jié)果與討論

紫金蓮為貴州少數(shù)民族習(xí)用藥材，苗藥名“紫金標(biāo)”“包家利幼”，苗族常用于治療跌打損傷，用時(shí)多以根或根莖煎水服用。貴州還開發(fā)出有以此為主藥的復(fù)方中藥制劑。本文對不同產(chǎn)地的紫金蓮進(jìn)行質(zhì)量分析和評價(jià)，結(jié)果表明：各產(chǎn)地紫金蓮性狀均與《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2003年版)標(biāo)準(zhǔn)描述相符;各產(chǎn)地顯微鑒別沒有明顯區(qū)別;薄層色譜結(jié)果顯色斑點(diǎn)清晰、分離效果好、專屬性強(qiáng)，各產(chǎn)地藥材斑點(diǎn)大小顏色略有不同;水溶性浸出物含量在15.1% ～17.4%之間;總黃酮含量以無水蘆丁(C27H30O16)計(jì)在2.36% ～2.95%之間。

王愛民等建立的HPLC 法測定紫金蓮中白花丹醌含量、，測定了貴州貴陽及周邊縣市(修文、清鎮(zhèn))的含量分別為0.342%，0.262%，0.204%［1］。此次我們選擇水城、六枝、畢節(jié)3 地3 批樣品的測定均值分別為0.627%，0.779%，0.340%，可見各產(chǎn)地各紫金蓮白花丹醌含量有一定差異，六枝、水城含量較貴陽、畢節(jié)高，質(zhì)量較優(yōu)。

［1］貴州省中藥資源普查辦公室，貴州省中藥研究所.貴州中藥資源［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1992：790.

［2］貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［S］.貴州：貴州科技出版社，2003：369.

［3］王愛民，王永林，李勇軍，等.紫金蓮藥材的質(zhì)量控制方法的研究［J］.中國中藥雜志，2008(9)：2130 -2132.