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        經(jīng)典毒株P(guān)RRSV弱毒疫苗對高致病性PRRSV的臨床控制報告

        2015-07-08 06:39:12祖海濤蘇良科朱連德
        中國豬業(yè) 2015年4期
        關(guān)鍵詞:防控檢測

        祖海濤 蘇良科 朱連德

        (勃林格殷格翰國際貿(mào)易(上海)有限公司動物保健部,北京100010)

        經(jīng)典毒株P(guān)RRSV弱毒疫苗
        對高致病性PRRSV的臨床控制報告

        祖海濤蘇良科朱連德

        (勃林格殷格翰國際貿(mào)易(上海)有限公司動物保健部,北京100010)

        摘要:本文介紹了某確診為HP-PRRS的規(guī)模豬場豬只的臨床癥狀,鑒別診斷,實驗室血清、分子生物學(xué)和基因測序的檢測,發(fā)現(xiàn)發(fā)病的主要原因是HP-PRRS的感染并伴有PCV2感染。豬場通過更換疫苗和改變措施,防控效果有所改善。通過分析后發(fā)現(xiàn),針對中國目前的藍(lán)耳病毒株,“經(jīng)典株”PRRS疫苗對高致病性PRRSV變異藍(lán)耳病也具有良好的免疫保護(hù)效果。總之,在合理使用弱毒疫苗的同時,科學(xué)的豬場管理和嚴(yán)格的生物安全對于藍(lán)耳病的防控也是至關(guān)重要的。

        關(guān)鍵詞:藍(lán)耳??;發(fā)病情況;檢測;防控

        藍(lán)耳病即豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS),是目前危害全球養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一,在全球大部分地區(qū)流行[1]。該病在我國普遍存在,特別是2006—2007年高致病性藍(lán)耳?。℉P-PRRS)暴發(fā)后,給我國養(yǎng)豬生產(chǎn)造成巨大損失[2-4]。

        2007年至今,我國相繼問世NVDC-JXA1株高致病性藍(lán)耳病滅活疫苗,CH-1R株、R98株、JXA1-R株、HuN4F112株、TJMF92株等經(jīng)典和高致病性藍(lán)耳病弱毒活疫苗,以及較早的CH-1a株經(jīng)典藍(lán)耳病滅活疫苗和進(jìn)口的Ingelvac PRRS MLV VR2332株減毒活疫苗,這些疫苗的推廣和應(yīng)用對控制和減緩疫情蔓延起到了積極的作用[5,6]。但是近年來,由于養(yǎng)豬場對高致病性藍(lán)耳病病原認(rèn)識不清,加之獸醫(yī)人員對藍(lán)耳病弱毒活疫苗特性了解不足,濫用疫苗現(xiàn)象普遍,再加上各豬場豬群的疾病背景不同,免疫程序更是千差萬別,臨床上暴發(fā)高致病性藍(lán)耳病豬場病例有抬頭趨勢[7]。許多豬場出現(xiàn)過免疫HPPRRS疫苗但還是發(fā)生HP-PRRS的現(xiàn)象,導(dǎo)致很多豬場對是否要進(jìn)行藍(lán)耳病疫苗免疫處在觀望或迷茫狀態(tài)。

        1 豬場背景

        湖北某規(guī)?;唐坟i場,現(xiàn)存欄經(jīng)產(chǎn)母豬500頭。母豬品種為長大二元,公豬品種為杜洛克,生產(chǎn)杜長大三元雜交商品豬。單點式飼養(yǎng)管理模式,自繁自養(yǎng),全進(jìn)全出。仔豬在21日齡斷奶,斷奶當(dāng)天轉(zhuǎn)入保育舍,70日齡從保育舍轉(zhuǎn)入育肥舍。

        豬場主要疫苗的免疫程序如下。

        母豬:高致病性藍(lán)耳病疫苗(TJM-F92株)普免4次/年;豬瘟高效細(xì)胞疫苗普免3次/年;偽狂犬疫苗普免4次/年;

        仔豬:仔豬出生后3日齡內(nèi)滴鼻偽狂犬疫苗、55日齡二免(肌肉注射);15日齡免疫高致病性藍(lán)耳病疫苗(TJM-F92株)活疫苗和全病毒滅活圓環(huán)病毒疫苗各1頭份;豬瘟高效細(xì)胞疫苗35日齡首免,65日齡二免。

        豬場遠(yuǎn)離養(yǎng)殖高密度區(qū),自然防疫條件較好。在藍(lán)耳病的防控方面,后備種豬一直是定點引種,引入時采取嚴(yán)格隔離,生產(chǎn)成績一直很好而且穩(wěn)定。

        2 豬場發(fā)病情況

        自2014年4月開始,產(chǎn)房存活率下降,仔豬轉(zhuǎn)入保育舍后10天左右(即在30日齡)陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)病癥狀,主要表現(xiàn)為慢性消瘦、厭食、精神沉郁、打噴嚏、流鼻涕,部分豬發(fā)高燒。急性死亡豬皮膚發(fā)紺,慢性經(jīng)過豬表現(xiàn)被毛粗亂,貧血、皮膚蒼白、衰竭無力,后腿關(guān)節(jié)腫大。到55日齡進(jìn)入發(fā)病高峰,豬呼吸道病癥狀較嚴(yán)重,進(jìn)入圈舍明顯聽到育成豬咳嗽、打噴嚏;20%左右育成豬被毛長,脊椎骨突出,消瘦,死淘率可達(dá)10%,經(jīng)濟(jì)損失巨大。發(fā)病豬只的臨床表現(xiàn)為體溫41℃以上,腹式呼吸,采食量下降,腹瀉。

        在發(fā)病豬群,豬場加強了欄舍消毒、病豬隔離等生物安全措施,并在飼料和飲水中加入阿莫西林、氟苯尼考等多種抗生素和中藥制劑進(jìn)行治療,但效果不佳。

        病死保育豬解剖后主要以肺臟病變?yōu)橹?,肺臟充血、出血、肺小葉間質(zhì)增寬,局灶性肺實變,肺臟肉變,肺門淋巴結(jié)水腫呈棕黃色;腹股溝淋巴結(jié)水腫,切面多汁。個別豬心包積液并有纖維滲出物,心肌表面呈“絨毛心”。

        母豬群的健康一直沒有受到影響,產(chǎn)后配種率、分娩率都維持在原來正常水平。

        2014年7月豬場采集了日齡都在60左右的發(fā)病豬及健康豬的血樣各10份,送正大集團(tuán)實驗室做抗體檢測,同時采集3份病料送到華中農(nóng)業(yè)大學(xué)進(jìn)行病原學(xué)檢查。

        3 實驗室檢測

        3.1血清抗體檢測

        將采集的血液樣品分別進(jìn)行藍(lán)耳病抗體和豬瘟抗體的檢測。

        PRRSV抗體監(jiān)測試劑盒使用美國愛德士(IDEXX)公司產(chǎn)品,生產(chǎn)批號為40959-V931。操作方法按照說明書進(jìn)行,PRRSV抗體檢測成立條件是陽性對照OD值-陰性對照OD值≥0.15;陰性對照OD值≤0.15。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)是S/P值≥0.40;陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)是S/P值<0.40。

        CSFV抗體檢測試劑盒也是美國愛德士(IDEXX)公司產(chǎn)品,生產(chǎn)批號A651。操作方法按照說明書進(jìn)行,CSFV抗體檢測成立條件是陰性對照OD值>0.500,陽性對照的阻斷率>50%。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)是阻斷率≥40%;陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)是阻斷率≤30%;阻斷率在30%~40%之間為可疑。

        3.2分子生物學(xué)檢測

        豬場同時采集3份病料送往華中農(nóng)業(yè)大學(xué)應(yīng)用RT-PCR、PCR等方法進(jìn)行高致病性和/或經(jīng)典的PRRSV抗原、圓環(huán)病毒2型(PCV2)、偽狂犬病病毒(PRV)、豬瘟(CSF)的抗原檢測。

        3.3PRRSV的ORF5基因測序

        對RT-PCR所檢測到的藍(lán)耳病毒株,擴(kuò)增ORF5基因片段、測序,并與當(dāng)前流行毒株和目前常用的疫苗毒株進(jìn)行比對分析。

        4 實驗室檢測結(jié)果

        4.1抗體檢測結(jié)果

        豬瘟抗體檢測結(jié)果顯示:健康豬抗體陽性率為10%,平均阻斷率為26%;發(fā)病豬抗體陽性率為40%,平均阻斷率為32%,每頭豬的阻斷率見圖1。

        藍(lán)耳病抗體的檢測結(jié)果顯示:健康豬抗體陽性率為20%,離散度為65%,S/P值為0.48;發(fā)病豬抗體陽性率為40%,離散度為72%,S/P值為1.5,其中S/P>2的30%,S/P>3的10%,見圖2。

        圖1 CFSV抗體阻斷率分析圖

        4.2病毒檢測結(jié)果

        PRRSV抗原檢測的引物是根據(jù)高致病性藍(lán)耳病病毒核酸NSP2基因進(jìn)行設(shè)計,擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)過凝膠電泳后如果僅有508 bp的片段,說明只有經(jīng)典毒株的PRRSV感染;如果僅有418 bp的片段,說明只有高致病性PRRSV毒株感染;如果同時能擴(kuò)增出這兩個片段,說明樣品同時存在經(jīng)典和高致病毒株。送檢的3份病料都是只有418 bp左右的片段,說明高致病性PRRSV核酸呈陽性,而沒有檢測出經(jīng)典的PRRSV(圖3);圓環(huán)病毒2型的各樣品的PCR產(chǎn)品電泳后出現(xiàn)496 bp的特異性條帶,因此判斷為陽性(圖4);豬瘟抗原(圖5)和偽狂犬野毒(圖6)都是陰性。詳細(xì)結(jié)果見表1。

        圖2 PRRSV抗體S/P值分析圖

        圖3 病料的RT-PCR結(jié)果

        圖4 病料的圓環(huán)ORF2基因PCR檢測

        圖5 病料的豬瘟E2基因的RT-PCR結(jié)果

        圖6 病料的偽狂犬gE基因的PCR結(jié)果

        表1 3份病料的抗原檢測結(jié)果

        樣品中RT-PCR擴(kuò)增出的PRRSV陽性條帶的陽性毒株,擴(kuò)增ORF5基因序列,并對其測序,將核酸序列在NCBI上經(jīng)Blast搜索,并與當(dāng)前流行毒株和目前常用的疫苗毒株進(jìn)行比對分析,表明該豬場的毒株與高致病性藍(lán)耳病疫苗毒株最為接近,與HuN4-F112株、TJM -F92株、JXA1-R株的同源性分別為98.83%、98.50%、98.17%。而與經(jīng)典的PRRS疫苗株VR2332、R98株的同源性分別是88.17%和88.00%。測序結(jié)果表明豬場感染的是高致病性藍(lán)耳病。詳細(xì)結(jié)果見表2。

        表2 藍(lán)耳病病毒主要抗原基因ORF5測序同源性比較結(jié)果((%%))

        5 豬場的防控措施和效果

        5.1防控措施

        根據(jù)豬場的臨床癥狀和實驗室的檢測結(jié)果,判定該豬場發(fā)病的主要原因是HP-PRRS的感染并伴有PCV2的感染,而沒有經(jīng)典PRRSV、豬瘟、偽狂犬野毒的感染。但該場一直使用高致病性藍(lán)耳(TJM-F92株)疫苗,經(jīng)與豬場詳細(xì)溝通后,決定從2014年8月1日開始全場使用進(jìn)口經(jīng)典毒株P(guān)RRSV疫苗,使用方法如下。

        ⑴母豬群在使用疫苗前1周,飼料中添加適當(dāng)藥物進(jìn)行保健,主要的藥物是20%替米考星1 kg/噸料+ 20%磺胺間甲氧嘧啶1 kg/噸料,在飼料中再添加適當(dāng)?shù)碾娊舛嗑S。

        ⑵母豬群首次普免進(jìn)口經(jīng)典毒株P(guān)RRSV疫苗時,產(chǎn)前一個月的母豬暫時不免,待產(chǎn)完仔豬后,在產(chǎn)房和仔豬一同免疫。

        ⑶母豬群首次免疫后,一個月加強免疫一次,以后4次/年。

        ⑷將公豬分為2個群體,分開免疫(間隔3周),免疫后的公豬,3周內(nèi)不要使用其精液。

        ⑸現(xiàn)有產(chǎn)房中的所有14日齡及以上仔豬免疫進(jìn)口經(jīng)典毒株P(guān)RRSV疫苗1頭份。以后出生的仔豬在14日齡免疫。

        同時加強病豬的隔離淘汰、環(huán)境衛(wèi)生管理工作,嚴(yán)格做好全進(jìn)全出。

        5.2防控效果

        在豬場免疫經(jīng)典毒株P(guān)RRSV疫苗后3個月,豬場比較了更換疫苗前后各2個月的斷奶仔豬數(shù)和保育舍的存活率。更換疫苗前由于保育豬發(fā)病,6~7月的生產(chǎn)成績不高,在8月初更換藍(lán)耳病疫苗后,豬場的生產(chǎn)成績有很大提升(表3)。到目前為止,豬場生產(chǎn)成績一直穩(wěn)定,保育豬成活率達(dá)到97%左右。

        表3 豬場更換PRRSV疫苗前后生產(chǎn)成績的比較

        6 分析與討論

        對PRRS患病豬群進(jìn)行活疫苗免疫,是有效控制PRRS危害的重要措施之一,這在全世界范圍內(nèi)都有大量成功的報道[8,9]。從PRRS美洲株弱毒苗的臨床使用效果可以看出,免疫能夠減輕臨床癥狀,提高生產(chǎn)成績,對同基因型變異株和異源毒株有保護(hù)力[10-12]。

        在養(yǎng)豬的生產(chǎn)實際中,當(dāng)懷疑豬群受到藍(lán)耳病感染時,首先應(yīng)盡快檢測確診,然后使用疫苗進(jìn)行免疫。但養(yǎng)殖戶在選擇使用哪種疫苗或哪個廠家的藍(lán)耳病疫苗上,往往無所適從,因為市場上既有“高致病性”藍(lán)耳病疫苗又有“經(jīng)典”藍(lán)耳病疫苗。當(dāng)前流行一種觀點,即對豬場的PRRS毒株進(jìn)行測序,根據(jù)測序結(jié)果來確定選擇使用高致病性變異株疫苗還是使用經(jīng)典毒株疫苗[6]。在PRRSV的基因組中,非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp2和結(jié)構(gòu)蛋白ORF5基因由于變異大,是進(jìn)行PRRSV分子流行病學(xué)研究和病毒遺傳變異分析的重要的2個靶基因。當(dāng)前大部分實驗室對PRRSV進(jìn)行基因序列相似性比對并區(qū)分所謂的“高致病性”或“經(jīng)典”毒株,依靠的正是這兩個基因。如果檢測出的毒株在NSP2具有非連續(xù)性的30個氨基酸的缺失,便屬于是“高致病性”PRRSV毒株,若相對應(yīng)部位未出現(xiàn)缺失的就是“經(jīng)典”PRRSV毒株。豬場內(nèi)流行的PRRS毒株基因與PRRS疫苗毒株的基因序列相似性越高,并不一定意味著它們之間的交叉保護(hù)越好。Tanja等研究發(fā)現(xiàn)PRRS疫苗毒株和野毒株之間ORF5基因序列的相似性,與疫苗的交叉保護(hù)力沒有直接關(guān)系[13]。如果存在PRRS的基因相似性越高保護(hù)性越好,那么理論上講,用本豬場分離的PRRSV毒株來免疫本場豬群,效果應(yīng)當(dāng)是最好的。但是美國Daniel等試驗發(fā)現(xiàn),使用本場的PRRSV毒株(LVI)給本場的豬群進(jìn)行免疫馴化,雖然豬群PRRSV轉(zhuǎn)陰的時間要比使用商品化的PRRS MLV疫苗快,但是使用PRRS疫苗的經(jīng)濟(jì)效益要好于本場PRRSV(LVI)的免疫[14]。

        本文所報道的豬場,病料中擴(kuò)增出的PRRSV ORF5基因核苷酸序列與我國分離的高致病性毒株HuN4-F112株、TJM-F92株和JX A1-R株的同源性都在98%以上。在發(fā)病之前一直使用的是高致病性的藍(lán)耳病疫苗TJM-F92株,但還是在保育豬群中發(fā)生高致病性藍(lán)耳病,可見即便使用同基因型的藍(lán)耳病疫苗,也不能做到對豬群的全部保護(hù),其原因在于PRRS的防控非常復(fù)雜,疫苗只是控制藍(lán)耳病的措施之一,需要的是綜合防控。該豬場雖然自然防疫條件較好,也非常注重藍(lán)耳病的控制,定點引種并在引入時進(jìn)行隔離,但還是發(fā)生了藍(lán)耳病,而且歷經(jīng)3、4個月都沒有得到理想的控制。分析發(fā)病的原因主要有兩方面:其一還是引種出了問題,因為在發(fā)病的前2個月(即2014年2月)豬場引進(jìn)了一批后備母豬,這批后備母豬引入時臨床表現(xiàn)很健康,因條件限制引種時并沒有對這些后備豬進(jìn)行檢測,它們可能帶毒或處于排毒期。其二是豬場雖然自繁自養(yǎng),全進(jìn)全出,但因為場地限制一直使用的是單點式飼養(yǎng)管理模式,所以發(fā)生藍(lán)耳病時無法切斷病毒在場內(nèi)的反復(fù)循環(huán)感染,導(dǎo)致豬場發(fā)病的持續(xù)時間較長。

        本文報告的豬場在受到高致病性藍(lán)耳病病毒感染后,應(yīng)用進(jìn)口經(jīng)典毒株P(guān)RRSV疫苗有效控制了豬場高致病性藍(lán)耳病的野毒攻擊,降低了保育階段的損失,顯著改善了生產(chǎn)成績。由此案例可看出,“經(jīng)典株”PRRS疫苗對高致病性PRRSV變異藍(lán)耳病,也具有良好的免疫保護(hù)效果?!案咧虏⌒浴盤RRSV毒株的特征是在PRRSV的NSP2基因存在30個氨基酸缺失,缺失的基因在整個PRRSV基因序列的占比不到0.6%,其本質(zhì)還是北美株P(guān)RRSV,可以使用所有的北美株P(guān)RRS疫苗。國內(nèi)外多個試驗也證明IngelvacPRRS MLV疫苗對多種常見異源PRRSV都是有效的[15-17]。因此當(dāng)豬場發(fā)生檢測測序為“高致病性”PRRSV時既可以使用“經(jīng)典株”PRRS疫苗,也可以使用安全穩(wěn)定的“高致病性”PRRS疫苗。另外,此案例說明管理在藍(lán)耳病的控制上也起到重要作用。因為豬場從2014 年4月發(fā)病開始一直到同年10月,都沒有再引進(jìn)后備豬,這在藍(lán)耳病的控制策略上相當(dāng)于是對該豬場進(jìn)行了封群。在8月開始對全場母豬

        中國目前流行的藍(lán)耳病毒株,無論是經(jīng)典的美洲型PRRSV,還是“高熱病”的變異PRRSV,都屬于PRRSV美洲型。進(jìn)口豬藍(lán)耳病活疫苗能夠?qū)Σ煌局旰屯N毒株的攻毒提供交叉保護(hù)。但藍(lán)耳病的防控非常復(fù)雜,合理的使用弱毒疫苗,科學(xué)的豬場管理和嚴(yán)格的生物安全依然很重要[9,18]。

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        中圖分類號:S852.65

        文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B

        文章編號:1673-4645(2015)04-0028-06

        收稿日期:2015-01-21

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