林燕瓊,李彩霞,林惠武

(1.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院 藥學(xué)部， 福建 廈門 361003；2.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院思明分院 藥學(xué)部，福建 廈門 361000)

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維生素B4片溶出度方法學(xué)研究

林燕瓊1,李彩霞1,林惠武2Δ

(1.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院 藥學(xué)部， 福建 廈門 361003；2.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院思明分院 藥學(xué)部，福建 廈門 361000)

目的 建立維生素B4片溶出度檢測(cè)方法。方法 采用槳法，以900 mL pH6.8磷酸鹽緩沖溶液為溶出介質(zhì)，溫度37.0 ℃，轉(zhuǎn)速為50 r/min，選取時(shí)間為45 min，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，采用紫外分光光度法測(cè)定維生素B4片的溶出量，檢測(cè)波長(zhǎng)為262 nm，溶出限度為標(biāo)示量的80%。結(jié)果 維生素B4濃度在4～16 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，r=0.9999(n=5)，平均回收率為100.1%，RSD=1.0%(n=9)。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，對(duì)不同生產(chǎn)企業(yè)的處方、工藝有一定考察作用，可用于維生素B4片的溶出度測(cè)定。

維生素B4片；溶出度；紫外分光光度法

維生素B4片又名磷酸氨基嘌呤，可以作為RNA和DNA的組成物質(zhì)應(yīng)用于蛋白質(zhì)生物合成的過(guò)程中，主要用于預(yù)防治療各種原因引起的白細(xì)胞減少癥、急性粒細(xì)胞減少癥[1]。其為高溶解性、高滲透性藥物，分子結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 維生素B4片結(jié)構(gòu)式Fig.1 Vitamin B4 structural formula

其生物藥劑分類系統(tǒng)屬于BCSⅠ類藥物[3]。對(duì)于BCSⅠ類藥物制劑，以0.1 mol/L鹽酸溶液為介質(zhì)，在適當(dāng)?shù)娜艹龆仍囼?yàn)條件下，15 min的溶出量大于85%時(shí)，可認(rèn)為藥物的生物利用度不受溶出行為的控制，即制劑的行為與溶液相似。在這種情況下，胃排空速度是藥物吸收的限速步驟。如果藥物溶出比胃排空時(shí)間慢，需要在多種介質(zhì)中測(cè)定溶出曲線，在禁食狀態(tài)下，胃內(nèi)滯留(排空)T50%時(shí)間為15～20 min。該品種為2015年版《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)提高品種，原標(biāo)準(zhǔn)只采用崩解時(shí)限檢查[2]，無(wú)法考察不同生產(chǎn)企業(yè)的處方、工藝的優(yōu)劣，本文根據(jù)其生物學(xué)及藥劑學(xué)特性，通過(guò)對(duì)其溶出度特性的研究，建立了溶出度檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 維生素B4片原料藥(貨號(hào)3507，天津市天廠家)；維生素B4片購(gòu)自5家生產(chǎn)企業(yè)，各3批，貨號(hào)分別為：生產(chǎn)企業(yè)A(3501～3503)、B(3504～3506)、C(3508～3510)、D(3517～3519)、E(3541～3543)；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 RCZ-8M溶出試驗(yàn)儀(購(gòu)自大天發(fā)科技有限公司)，UV-2600紫外可見分光光度計(jì)(購(gòu)自日本島津公司)，METTLER TOLODO SG2型酸度計(jì)(購(gòu)自德國(guó)梅勒特公司)。

1.3 方法 分別選用0.1 mol/L鹽酸溶液(取9 mL濃鹽酸加蒸餾水稀釋至1000 mL)、pH 4.5的醋酸鹽緩沖溶液(取醋酸鈉(三水合物)2.99 g加水溶解，加入2 mol/L醋酸溶液14.0 mL，加水稀釋至1000 mL)、pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液(取0.2 mol/L磷酸二氫鉀溶液250 mL，加0.2 mol/L氫氧化鈉溶液118 mL，用水稀釋至1000 mL)和水(脫氣)4種溶出介質(zhì)[4]，轉(zhuǎn)速50 r/min，溫度37.0 ℃的條件下，取樣時(shí)間分別為5、15、30、45、60、75 min取樣，取樣5 mL，同時(shí)相應(yīng)地補(bǔ)充溶液5 mL，照紫外分光光度法在(262±2)nm下測(cè)定吸光度[5]，另取維生素B4原料藥適量，用相應(yīng)的溶出介質(zhì)溶解并稀釋為11 μg/mL的磷酸腺嘌呤溶液，作為對(duì)照溶液。

1.4 溶解度及穩(wěn)定性研究 取磷酸腺嘌呤(維生素B4)原料藥各約1 g，用4種溶出介質(zhì)溶解并稀釋至25 mL，并置37.0 ℃的水浴中1 h，并不斷振搖制成過(guò)飽和溶液。再取原料藥11 mg，用相應(yīng)的溶出介質(zhì)溶解并稀釋為每1 mL含11 μg的磷酸腺嘌呤溶液，作為對(duì)照溶液，測(cè)定并計(jì)算過(guò)飽和溶液的溶解量，即為該物質(zhì)的在溶出介質(zhì)中的溶解度。

1.5 溶出曲線測(cè)定 取A廠家3501批、B廠家3504批、C廠家3508批、D廠家3517批、E廠家3541批樣品各6片，分別于上述4種溶出介質(zhì)中按照1.3項(xiàng)下的方法測(cè)定。

1.6 建立的溶出方法 取本品，按照溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅩC 第二法)[5]，以磷酸鹽緩沖溶液(pH 6.8)900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min，依法操作，經(jīng)45 min時(shí)，取溶液適量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)定量稀釋制成約含11 μg/mL的溶液，照紫外-可見分光光度法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄Ⅳ A)[6]，在262 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度；另取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(相當(dāng)于平均片重)，用溶出介質(zhì)定量稀釋制成約含11 μg/mL的溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液，同法測(cè)定，計(jì)算每片的溶出量。限度為80.0%。

1.7 方法學(xué)驗(yàn)證[7]

1.7.1 輔料干擾：通過(guò)將淀粉、糊精、微晶纖維素、硬脂酸鎂、羧甲淀粉鈉、蔗糖按不同比例混合制備混合輔料，平均每片制劑所含的輔料量按0.09 g計(jì)算。

取1片輔料量按1.6項(xiàng)下溶出方法進(jìn)行操作，經(jīng)0.45 μm的濾膜過(guò)濾，并在220～300 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。

1.7.2 濾膜吸附試驗(yàn)：選用C廠家(編號(hào)3517)的溶出溶液，采用離心(經(jīng)4000 r/min，離心5 min)、過(guò)濾(經(jīng)0.45 μm的濾膜)方式，對(duì)離心溶液、初濾液及續(xù)濾液進(jìn)行檢測(cè)。

1.7.3 試驗(yàn)方法準(zhǔn)確度考察(以回收率表示)：精密稱定原料藥(編號(hào)3507)約5、8、10 mg，按濃度50%、80%、100%各平行稱取3份，分別置1000 mL量瓶中，再分別加入混合輔料(相當(dāng)于1片制劑的量)約0.09 g，用pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，取濾液在262 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。

1.7.4 線性與范圍：精密稱取原料藥0.01348 g至100 mL量瓶中，加入pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液溶解、定容、搖勻；用刻度吸管精密移取上述溶液3、2、3、5、3 mL分別至25、25、50、100、100 mL量瓶中，用pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液定容、搖勻，所得溶液濃度依次為16.176、10.784、8.088、6.740、4.044 μg/mL；照紫外光度測(cè)定法在262 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

1.7.5 溶出溶液穩(wěn)定性考察：選用C廠家(編號(hào)3517)的樣品按1.3項(xiàng)下方法操作，經(jīng)45、75、105、165 min取樣，并經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，取濾液在262 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。

1.7.6 精密度試驗(yàn)：精密稱定VB4原料藥約10 mg，平行稱取6份分別至100 mL量瓶中，用pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液溶解、定容、搖勻。再精密移取5 mL至50 mL量瓶中，用pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液定容、搖勻。在262 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。

2 結(jié)果

2.1 輔料干擾 輔料在261 nm波長(zhǎng)處幾乎無(wú)吸收，吸光值平均為0.0037(n=5)。故輔料對(duì)溶出度測(cè)定基本無(wú)干擾。

2.2 濾膜吸附試驗(yàn) 初濾液與離心溶液比較，吸光度下降了1.3%，續(xù)濾液與初濾液比較，吸光度未發(fā)生變化。說(shuō)明經(jīng)0.45 μm的濾膜過(guò)濾，濾膜對(duì)樣品有吸附作用，濾膜吸附約為1.2%，溶出量減少0.03%，在允許的限度范圍內(nèi)。

2.3 準(zhǔn)確度考察 維生素B4片溶出度的平均回收率100.1%(n=9)，RSD=1.05%，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery test

2.4 維生素B4片的溶解度及穩(wěn)定性研究 維生素B4片的溶解度及穩(wěn)定性研究結(jié)果見表2。維生素B4片在0.1 mol/L的鹽酸溶液中溶解度最高，為20.3 mg/mL，穩(wěn)定時(shí)間為20 h。

表2 維生素B4片在不同介質(zhì)中的溶解度及穩(wěn)定性Tab.2 Solubility and stability of Vitamin B4 tablets in different medium

2.5 5家生產(chǎn)企業(yè)分別在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線 5家生產(chǎn)企業(yè)分別在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線見圖2。

圖2 5家生產(chǎn)企業(yè)分別在4種溶出介質(zhì)中的溶出曲線圖比較Fig.2 Comparison of the dissolution curves of 5 production enterprises in four kinds of dissolution medium

2.6 溶出介質(zhì)的選擇 維生素B4片是速溶制劑， 5家生產(chǎn)企業(yè)在0.1 mol/L鹽酸溶液中溶出比較快，5 min樣品溶出量已達(dá)到85%以上，無(wú)法對(duì)生產(chǎn)企業(yè)的不同處方、工藝的進(jìn)行區(qū)分；pH 4.5的醋酸鹽緩沖溶液、pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液及水，3種的溶出速率較緩慢，但水無(wú)酸堿緩沖能力，對(duì)于處方中所產(chǎn)生的酸堿度無(wú)法進(jìn)行控制，故選用pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液較好，能避免制劑對(duì)溶出介質(zhì)酸堿度的干擾。在pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液溶出介質(zhì)中，有4家生產(chǎn)企業(yè)的樣品在溶出時(shí)間30 min，樣品的溶出量均達(dá)到了80%，故溶出時(shí)間設(shè)定為45 min。同一溶出介質(zhì)不同生產(chǎn)企業(yè)的溶出曲線見圖3。

圖3 同一溶出介質(zhì)中不同生產(chǎn)企業(yè)的溶出曲線圖比較Fig.3 Comparison of dissolution curves of different production enterprises in the same dissolution medium

2.7 線性與范圍 磷酸腺嘌呤濃度在4～16 μg/mL的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為1，線性方程為y=0.0574C+0.0025(n=5，C為μg/mL)。

2.8 溶出溶液穩(wěn)定性考察和儀器精密度試驗(yàn) 樣品在45 min內(nèi)穩(wěn)定。溶液吸收系數(shù)RSD為0.29%，表明儀器的精密度良好。

2.9 驗(yàn)證試驗(yàn) 5家生產(chǎn)企業(yè)共15批樣品按照2.6方法測(cè)定，僅有1批測(cè)定結(jié)果低于限度80%，其余14批達(dá)到限度要求，測(cè)定結(jié)果見表3。

表3 溶出度測(cè)定結(jié)果Tab.3 Results of dissolution determination

3 討論

維生素B4屬于生物分類系統(tǒng)BCSⅠ類藥物，其體內(nèi)吸收性能與溶出度方法已無(wú)相關(guān)性[8]，建立體外溶出度方法的重要目的是能夠保證藥品批間質(zhì)量的一致性。

選擇釋放介質(zhì)的一個(gè)重要標(biāo)準(zhǔn)是漏槽條件[9]，漏槽條件是指藥物所處釋放介質(zhì)的濃度遠(yuǎn)小于其飽和濃度，生理學(xué)解釋為藥物在體內(nèi)被迅速吸收，制劑的體外包括釋放度等測(cè)定需要模仿體內(nèi)生理?xiàng)l件的、滿足藥物溶解、吸收的過(guò)程，漏槽條件起到了修正作用。因此測(cè)定藥物在不同介質(zhì)中的溶解度可以初步擬定其制劑的釋放介，故選擇pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液作為體外溶出介質(zhì)。在pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液中維生素B4片的溶出速率較緩慢，對(duì)處方工藝有一定區(qū)分度，并避免由于片劑本身處方工藝中輔料對(duì)溶出介質(zhì)的酸堿度干擾[10]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示D廠家的3517批樣品在45 min時(shí)未達(dá)到標(biāo)示量的80%，但該廠家其余2批(批號(hào)3518、3519)達(dá)到溶出限度，由此可猜測(cè)D廠家對(duì)其生產(chǎn)工藝進(jìn)行了調(diào)整，由此可看出選擇pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液作為溶出介質(zhì)對(duì)于維生素B4片的體外溶出度測(cè)定達(dá)到了有效的質(zhì)量一致性考察目的。

[1] 衛(wèi)生部藥典委員會(huì)編．中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)．化學(xué)藥品及制劑[S]．第一冊(cè)．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1989：137.

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(編校：王冬梅)

Study on dissolution method of Vitamin B4 tablets

LIN Yan-qiong1,LI Cai-xia1,LIN Hui-wu2Δ

(1.Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China; 2.Department of Pharmacy, Siming Branch of the First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361000, China)

ObjectiveTo establish a test method for determining the vitamin B4 tablets dissolution. MethodsPaddle method was used to 900 mL pH6.8 phosphate buffer solution as the dissolution medium, the temperature of 37 ℃, the speed of 50 r/min, take time for 45 min. Taking the filtrate through the 0.45 μm microporous membrane filtration, vitamin B4 tablets dissolution quantity determined by ultraviolet spectrophotometry, determined the wavelength of 262 nm, dissolution limit for 80% of the labeled amount. ResultsVitamin B4 concentration had a good linear relationship with the absorbance in 4～16 μg/mL,r=0.9999 (n=5), the average recovery was 100.1%, RSD=1.0% (n=9). ConclusionThe method is simple, sensitive and accurate, has certain effect on prescription and study of the process of different production enterprises, can be used for the dissolution determination of vitamin B4 tablets.

Vitamin B4 tablets;dissolution;UV spectrophotometry

林燕瓊，女，大專，副主任藥師，研究方向：醫(yī)院藥學(xué)，E-mail:doctorlinyq@163.com；林惠武，通訊作者，男，本科，副主任藥師，研究方向：臨床藥學(xué)，E-mail:fjxmlhw361@163.com。

R927.2

A

1005-1678(2015)06-0147-04