張大海，蔡忠芳，馬海鋒

(東陽市人民醫(yī)院 腫瘤科，浙江 東陽 322100)

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華蟾素對(duì)晚期肺癌患者血清P53、PTEN及HIF-1α影響研究

張大海，蔡忠芳，馬海鋒

(東陽市人民醫(yī)院 腫瘤科，浙江 東陽 322100)

目的 探討華蟾素對(duì)晚期肺癌患者血清P53抗體(serum P53 antibody，P53)、第十號(hào)染色體同源丟失性磷酸酶-張力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome ten，PTEN)蛋白及缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1，HIF-1α)的影響及其意義。方法 選取2012年6月～2014年12月于腫瘤科已確診為晚期肺癌的患者100例，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為2組：對(duì)照組50例，行臨床常規(guī)療法治療；實(shí)驗(yàn)組50例，在對(duì)照組基礎(chǔ)上加用華蟾素0.3 g，3次/天，口服，治療結(jié)束后比較2組患者的血清P53、PTEN、HIF-1α表達(dá)水平、腫瘤標(biāo)志物水平以及生存率和死亡率。結(jié)果 與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組血清P53、HIF-1α表達(dá)水平較低(P<0.05)，PTEN表達(dá)水平較高(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組腫瘤標(biāo)志物：癌胚抗原(carcionembryonic antigen，CEA)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)、細(xì)胞角蛋白19片段(cytokeratin-19-fragment，CYFRA21-1)、糖類抗原-125(cancer antigen 125，CA125)水平較低(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組生存率較高，死亡率較低(均P<0.05)。結(jié)論 華蟾素對(duì)晚期肺癌患者具有較好的臨床療效，能調(diào)節(jié)患者血清P53、PTEN及HIF-1α水平，降低腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)水平，提高生存率，對(duì)臨床治療晚期肺癌具有重要意義。

晚期肺癌；華蟾素；P53；PTEN；HIF-1α

肺癌是高發(fā)病率、高死亡率的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類健康和生命安全，其發(fā)病率和死亡率仍呈逐年升高的趨勢(shì)，引起人們高度關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)[1]，所有惡性腫瘤中肺癌發(fā)病率占居首位，男性發(fā)病率和死亡率明顯高于女性，與男性為主要吸煙人群有密切關(guān)系，調(diào)查指出長(zhǎng)期大量吸煙會(huì)導(dǎo)致肺癌發(fā)生率為不吸煙者的10～20倍，且年齡越小的吸煙者，其患肺癌的幾率越高。華蟾素是提取自蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍干燥皮的提取物制劑，具有調(diào)節(jié)免疫、抑制腫瘤細(xì)胞DNA合成以及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥理作用[2-3]，臨床已有將之應(yīng)用于治療惡性腫瘤、乙型肝炎等[4]。但將華蟾素應(yīng)用于晚期肺癌的治療以及對(duì)其血清P53抗體(serum P53 antibody，P53)、第十號(hào)染色體同源丟失性磷酸酶-張力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome ten，PTEN)蛋白及缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1，HIF-1α)的影響卻鮮見報(bào)道。因此，本研究通過對(duì)晚期肺癌患者應(yīng)用華蟾素治療后，檢測(cè)其血清P53、PTEN和HIF-1α表達(dá)水平的變化，為晚期肺癌患者的診斷和治療提供新的思路和方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例來源選擇2012年6月～2014年12月于東陽市人民醫(yī)院腫瘤科以肺癌晚期為診斷而收入院的患者100例，年齡在20～75歲，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。其中實(shí)驗(yàn)組50例，男性32例，女性18例，平均年齡(47.3±8.6)歲；對(duì)照組50例，男性29例，女性21例，平均年齡(46.1±8.9)歲。病理分型：實(shí)驗(yàn)組小細(xì)胞肺癌患者11例，非小細(xì)胞肺癌患者39例，其中腺癌23例、鱗癌16例；對(duì)照組小細(xì)胞肺癌患者13例，非小細(xì)胞肺癌患者37例，其中腺癌22例、鱗癌15例。臨床分期：實(shí)驗(yàn)組ⅢA期16例，ⅢB期24例，Ⅳ期10例；對(duì)照組ⅢA期14例，ⅢB期25例，Ⅳ期11例(按TNM分期標(biāo)準(zhǔn))。所有晚期肺癌患者其臨床及影像學(xué)診斷均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)，且均已喪失手術(shù)治療機(jī)會(huì)。2組研究對(duì)象性別、年齡、病理分型、臨床分期等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

診斷及排除標(biāo)準(zhǔn)：參照《中西醫(yī)結(jié)合外科學(xué)》[5]教材中關(guān)于晚期肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)而擬定以下納入標(biāo)準(zhǔn)：①初次入院并診斷為肺癌者；②年齡在20～75歲之間者；③均為肺癌晚期失去手術(shù)機(jī)會(huì)并自愿同意接受本實(shí)驗(yàn)者；④實(shí)驗(yàn)前2周內(nèi)未用過任何相關(guān)藥物治療者；⑤患者或其家屬同意并自愿參與本實(shí)驗(yàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不愿參與本研究或不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；②同時(shí)患有其他系統(tǒng)腫瘤者；③患有艾滋病、乙肝等具有較重傳染性疾病患者；④合并有嚴(yán)重心、肝、腎功能不全疾病患者；⑤對(duì)華蟾素過敏者；⑥患有精神類疾病不能配合研究者。

1.2 方法 所有晚期肺癌患者嚴(yán)格按照2010年《中國(guó)肺癌臨床指南》[6]中關(guān)于晚期肝癌的治療標(biāo)準(zhǔn)予以治療。

對(duì)照組行NP方案化療，順鉑注射液(錦州九泰藥業(yè)有限責(zé)任公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20033936)70 mg/m2，分3d使用；長(zhǎng)春瑞濱注射液(江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20031377)25 mg/(m2· d)，與第1、8天使用。在治療過程中，如并發(fā)其他臨床癥狀，均予相應(yīng)的對(duì)癥處理。以4周為1個(gè)周期進(jìn)行治療，共化療2個(gè)周期。

實(shí)驗(yàn)組在與對(duì)照組相同的臨床常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用華蟾素片(安徽金蟾生化股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z34020272)，一次1.2g(3片)，3次/天。共治療2個(gè)周期。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 對(duì)比觀察對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組服用華蟾素片8周前后血清P53、PTEN蛋白和HIF-1α表達(dá)水平變化。

血清采集：所有患者治療前后均采集空腹肘靜脈血5 mL，3.8 %枸櫞酸鈉抗凝，于室溫下用水平離心機(jī)以3000 r/min離心20 min，待離心結(jié)束后將上層血清裝入EP管中，放入-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

血清指標(biāo)檢測(cè)：本研究采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)P53蛋白、PTEN蛋白和HIF-1α表達(dá)水平(試劑盒均由鄭州安塞生物科技有限公司提供，其操作方法按照說明書嚴(yán)格操作)。

腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)檢測(cè)：本研究采用ELISA法檢測(cè)所有研究對(duì)象血清中CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125等肺癌腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)的濃度水平(試劑盒由鄭州安塞生物科技有限公司提供，其操作方法按照說明書嚴(yán)格操作)。以上所有操作均由本院檢驗(yàn)科專業(yè)人員負(fù)責(zé)操作。

生存時(shí)間統(tǒng)計(jì)：治療結(jié)束后隨訪1年，記錄2組患者生存時(shí)間。

2 結(jié)果

2.1 化療前后實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組凝血系統(tǒng)指標(biāo)水平比較 治療前2組患者血清P53、PTEN和HIF-1α表達(dá)水平相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；經(jīng)8周治療后，2組患者血清P53、HIF-1α表達(dá)水平均降低，但實(shí)驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；2組患者血清PTEN表達(dá)水平均有升高，但實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見表 1。

表1 2組患者治療前后血清P53，PTEN和HIF-1α 表達(dá)水平比較， μmol/L)Tab.1 Comparison of P53，PTEN and HIF-1α before and after treatment between， μmol/L)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；#P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

2.2 2組患者治療前后血清肺癌腫瘤標(biāo)志物表達(dá)比較 2組患者治療前血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；經(jīng)8周治療后，.2組患者血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125水平較治療前均有所降低，但實(shí)驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者治療前后血清肺癌腫瘤標(biāo)志物水平比較±s， μg/L)Tab.2 Comparison of serum tumor markers of lung cancer between two ±s， μg/L)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；#P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

2.3 2組患者1年內(nèi)生存率和死亡率比較 經(jīng)隨訪1年，實(shí)驗(yàn)組患者生存率(82.00%)高于對(duì)照組(64.00%)，死亡率(18.00%)低于對(duì)照組(36.00%)(χ2=4.11，P<0.05)。見表3。

表3 2組患者生存率、死亡率比較[n(%)]Tab.3 Comparison of survival rate and mortality[n(%)]

#P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

3 討論

臨床對(duì)于早、中期發(fā)現(xiàn)的肺癌患者可以通過外科手術(shù)切除予以治療，但大多數(shù)肺癌患者在發(fā)現(xiàn)時(shí)就已處于晚期，喪失手術(shù)機(jī)會(huì)。對(duì)于晚期肺癌患者，90%以上需要接受化療治療，并能有效延長(zhǎng)患者生存時(shí)間和改善生活質(zhì)量。但化療除能殺死腫瘤細(xì)胞外，對(duì)人體白細(xì)胞和血小板等正常細(xì)胞也有損害，并會(huì)導(dǎo)致患者食欲不振、惡心、嘔吐等消化道癥狀以及靜脈血栓形成等副作用的發(fā)生。華蟾素是我國(guó)自行研制的二類新藥，具有調(diào)節(jié)免疫功能、抑制腫瘤細(xì)胞DNA合成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤血管生成和逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的作用[7]?，F(xiàn)代臨床已經(jīng)將華蟾素應(yīng)用于治療肺癌、肝癌、食道癌等惡性腫瘤的治療，并取得了較為滿意的臨床療效[8]。但是，華蟾素對(duì)晚期肺癌患者血清P53、PTEN和HIF-1α表達(dá)水平影響的研究卻鮮見報(bào)道。

本研究發(fā)現(xiàn)，華蟾素能有效降低晚期肺癌患者血清P53和HIF-1α表達(dá)水平，升高血清PTEN表達(dá)水平。研究發(fā)現(xiàn)[9]，P53基因是最常見的抑癌基因之一，分為野生型和突變型2種，野生型P53蛋白能通過其阻滯癌細(xì)胞周期和誘發(fā)癌細(xì)胞凋亡達(dá)到抑制癌細(xì)胞的作用；突變型P53蛋白并無阻滯癌細(xì)胞周期和誘發(fā)癌細(xì)胞凋亡的作用，反而具有促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化和過度增殖的作用，從而導(dǎo)致腫瘤患者病情加重。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[10]，野生型P53蛋白因其較短的半衰期則很難在血清中檢測(cè)到，而突變型P53基因則較易于檢測(cè)，因此本研究患者血清中大量表達(dá)的P53基因主要為突變型。研究證實(shí)[11]，缺氧是惡性腫瘤普遍存在的現(xiàn)象，也是腫瘤發(fā)展過程中的主要環(huán)境，HIF-1α是一種在細(xì)胞低氧環(huán)境下所產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄因子，在常氧環(huán)境下細(xì)胞核內(nèi)并不能穩(wěn)定存在，與腫瘤的惡性侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤患者對(duì)化療抵抗性具有重要意義。PTEN是最早發(fā)現(xiàn)具有磷酸酶活性的腫瘤抑制基因，具有夠維持機(jī)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和正常物質(zhì)代謝的作用。研究發(fā)現(xiàn)[12]，PTEN的低水平表達(dá)與惡性腫瘤的進(jìn)展及預(yù)后不良有密切聯(lián)系，它能夠直接使磷脂酰肌醇3激酶(PIP3)D3位去磷酸化，是PTEN促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡以及抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的重要機(jī)制之一。表1表明，經(jīng)2個(gè)周期治療后，實(shí)驗(yàn)組患者P53、HIF-1α表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，其原因可能是實(shí)驗(yàn)組患者應(yīng)用華蟾素后其體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的增殖分化以及腫瘤血管得到抑制，并誘導(dǎo)其腫瘤細(xì)胞的凋亡，從而病情得到緩解，其血清P53、HIF-1α表達(dá)水平亦隨之下降，而PTEN水平得到提高可能與華蟾素提高免疫功能有關(guān)，且PTEN能抑制HIF-1α表達(dá)，PTEN水平的升高可能也是HIF-1α表達(dá)水平降低的原因之一。

本研究發(fā)現(xiàn)，華蟾素對(duì)晚期肺癌患者血清肺癌腫瘤標(biāo)記物具有明顯降低作用，可見應(yīng)用華蟾素對(duì)晚期肺癌患者的治療具有一定的積極意義。研究發(fā)現(xiàn)[13]，CEA是一種細(xì)胞表面酸性糖蛋白，對(duì)肺癌的輔助診斷具有一定意義；NSE起源于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的腫瘤組織異常表達(dá)，是具有神經(jīng)分泌性質(zhì)的小細(xì)胞肺癌最敏感最特異的腫瘤標(biāo)記物；CYFRA21-1是近年來才被推廣的新型肺癌標(biāo)記物，存在于單層和復(fù)層上皮腫瘤細(xì)胞的胞漿內(nèi)，當(dāng)細(xì)胞死亡時(shí)溶解的片段釋放到血清中，使血清中CYFRA21-1含量升高。研究發(fā)現(xiàn)[14]，CA125僅在非小細(xì)胞肺癌患者中顯著升高，因此可作為非小細(xì)胞肺癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)，對(duì)預(yù)測(cè)患者預(yù)后具有重要意義。表2表明，經(jīng)華蟾素治療后，實(shí)驗(yàn)組患者腫瘤標(biāo)志物水平明顯較對(duì)照組低(P<0.05)，其原因可能與華蟾素的抗癌作用相關(guān)，且從以上的研究結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組患者生存率高于對(duì)照組(P<0.05)，也是實(shí)驗(yàn)組患者腫瘤標(biāo)志物水平降低、癥狀得到控制的側(cè)面反映。

本研究通過對(duì)100例晚期肺癌患者的血清P53、PTEN和HIF-1α表達(dá)水平、腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)以及生存率和死亡率比較分析，證實(shí)了華蟾素能夠提高晚期肺癌患者生存率、降低死亡率。因此，對(duì)于晚期肺癌患者及時(shí)正確的應(yīng)用華蟾素予以治療具有重要意義。在未來的研究中，將對(duì)華蟾素對(duì)晚期肺癌患者的血清P53、PTEN和HIF-1α表達(dá)水平以及腫瘤標(biāo)志物作用實(shí)質(zhì)進(jìn)行更深入的研究，為本實(shí)驗(yàn)所得出的結(jié)果做出進(jìn)一步的論證和分析。

[1] 錢桂生, 余時(shí)滄.肺癌流行病學(xué)最新資料與啟示[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2012，35(2)： 86-89.

[2] 吳旭, 高波, 楊健, 等.華蟾素注射液多肽成分體外抗腫瘤活性研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2012，47(6)： 822-826.

[3] 姜玉鳳.華蟾素注射液的藥理作用及臨床不良反應(yīng)[J].中醫(yī)學(xué)報(bào), 2011, 26(9)： 1082-1083.

[4] 羅川, 趙海譽(yù), 邊寶林, 等.華蟾素注射液治療慢性乙型肝炎的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014， 20(17)： 212-218.

[5] 陳志強(qiáng)， 蔡炳勤， 招偉賢.中西醫(yī)結(jié)合外科學(xué)[M].科學(xué)出版社， 2008.

[6] 吳一龍, 蔣國(guó)梁, 陸舜.中國(guó)肺癌臨床指南[J].北京：人民衛(wèi)生出版社, 2007：147-149.

[7] 王婷婷, 徐國(guó)興.華蟾素的藥理作用研究及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].國(guó)際眼科雜志，2009，9(7)： 1330-1333.

[8] 左小東, 崔永安, 秦叔逵.華蟾素抗腫瘤作用的臨床研究進(jìn)展[J].臨床腫瘤學(xué)雜志， 2003，8(3)： 232-235.

[9] 賈春平.抑癌基因 p53 與腫瘤研究的最新進(jìn)展[J].生命科學(xué)，2008，20(3)：450-453.

[10] 陳余清, 蔡映云, 劉黎明, 等.肺癌患者肺組織和痰標(biāo)本 p53 基因突變檢測(cè)及其臨床意義[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2002，25(11)： 667-669.

[11] 張秀琴, 呂喜英, 陳偉紅.HIF-1α 與惡性腫瘤關(guān)系研究進(jìn)展[J].臨床肺科雜志, 2010, 15(2)：219-220.

[12] 董曉群, 周鋼橋.PTEN 基因與惡性腫瘤[J].國(guó)際腫瘤學(xué)雜志，2008，34(1)：287-287.

[13] 張翊, 吳堅(jiān)敏, 盧建平.血清 CEA, CA125, NSE 和 CYFRA21-1 聯(lián)檢在肺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].放射免疫學(xué)雜志，2012， 24(6)： 652-653.

[14] 魏晟瀟, 廖長(zhǎng)征, 賴秀花.血清糖類抗原 125 和癌胚抗原在非小細(xì)胞肺癌中的診斷價(jià)值[J].醫(yī)學(xué)綜述， 2015， 21(6)： 52.

(編校：王冬梅)

Effect of cinobufacin on P53，PTEN and HIF-1α in patients with advanced lung cancer

ZHANG Da-hai, CAI Zhong-fang, MA Hai-feng

(Department of Oncology, Dongyang People’s Hospital, Dongyang 322100, China)

ObjectiveTo investigate the effect of cinobufacin on P53，PTEN and HIF-1α in patients with advanced lung cancer.Methods100 cases with advanced lung cancer were divided into two groups.control group(n=50) were treated with routine treatment, experiment group(n=50) on the base of the control group with 0.3 g cinobufacin,3 times per day oral.P53, PTEN, HIF-1α,tumor marker,survival rate and mortality were compared after the treatment.ResultsCompared with the control group,the serum levels of P53, HIF-1α expression level was lower(P<0.05),PTEN expression level was higher (P<0.05),CEA,NSE,CYFRA21-1,CA125 were lower(P<0.05);the survival rate was higher, the mortality was lower(P<0.05).ConclusionCinobufacin can regulate the advanced lung cancer patients serum P53, PTEN and HIF-1α levels and reduce the tumor markers levels, improve the survival rate.It is of great importance for clinical treatment of advanced lung cancer.

advanced lung cancer; cinobufacin; P53; PTEN; HIF-1α

張大海，男，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：腫瘤放療，E-mail：dyzdh67@126.com。

R734.2

A

1005-1678(2015)06-0068-03