李崴嵬，魏琦玲，楊金暉，佟靜，崔秋萍

(河北省唐山工人醫(yī)院 口腔科，河北 唐山 063000)

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OLK患者與OSCC癌患者的原癌基因蛋白差異及相關(guān)性研究

李崴嵬，魏琦玲，楊金暉，佟靜，崔秋萍

(河北省唐山工人醫(yī)院 口腔科，河北 唐山 063000)

目的 探討原癌基因蛋白在口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)及口腔白斑中(oral leukoplakia，OLK)的意義。方法 選取唐山工人醫(yī)院口腔科已確診為口腔白斑的患者40例作為OLK組，確診為口腔鱗狀細胞癌患者40例作為OSCC組，同時期體檢正常志愿者40例作為對照組，取病變組織、正常口腔粘膜作為樣本，研磨后取上清液，采用酶聯(lián)免疫法檢測3組研究對象樣本中MDM2蛋白，p53蛋白，Ki-67蛋白的含量情況，并分析3者的相關(guān)性。結(jié)果 3組間MDM2、p53表達水平比較均為OSCC組>OLK組>對照組；3組間Ki-67表達水平比較，OSCC組>OLK組>對照組(P<0.05)；MDM2，p53，Ki-67在口腔白斑及口腔鱗狀細胞癌中表達呈正相關(guān)(P<0.05)，在正常粘膜中表達無相關(guān)。結(jié)論 口腔白斑發(fā)展成為口腔鱗狀細胞癌與MDM2，p53，Ki-67的高表達有關(guān)，MDM2、p53、Ki-67 3者之間呈正相關(guān)。

口腔白斑；口腔鱗狀細胞癌；MDM2；p53；Ki-67

口腔白斑(oral leukoplakia，OLK)是指由于代謝紊亂引起口腔黏膜上皮過度角化形成的白色斑塊[1]，屬于癌前病變，有3%～5%可發(fā)展成為鱗狀細胞癌?？谇击[狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是口腔科常見的惡性腫瘤，目前，占我國口腔惡性腫瘤的90%以上，占全身腫瘤的3%～5%,而且其惡性程度高，患者預(yù)后差，5年生存率僅為30%～40%[2]，因此，早期診斷、治療，防止病情變化成為目前研究的熱點。研究發(fā)現(xiàn)[3]，口腔鱗狀細胞癌的發(fā)生與原癌基因和抑癌基因的表達失衡有關(guān)，兩者為相互制約關(guān)系，在外界或遺傳因素作用下，原癌基因過度表達或抑癌基因表達不足，均可導致細胞周期異常，細胞過度增殖發(fā)生癌變。資料顯示[4-5]，MDM2和p53為相關(guān)聯(lián)的抑癌基因，在頭部鱗狀細胞癌、結(jié)腸癌等惡性腫瘤進展過程中均有異常表達，Ki-67的表達與細胞增殖活性有關(guān)，在喉癌、乳腺癌等惡性腫瘤中起到主要作用[6]。目前，關(guān)于口腔鱗狀細胞癌中MDM2，p53，Ki-67表達的相關(guān)研究較少，本研究通過檢測觀察MDM2，p53，Ki-67在口腔鱗狀細胞癌及口腔白斑中的表達水平及變化，探討其相關(guān)性及意義，為口腔鱗狀細胞癌的早期診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集唐山工人醫(yī)院口腔科2013年1月～2015年4月的確診為口腔白斑的患者40例作為OLK組，其中男性26例，女性14例，年齡20～75歲，平均年齡(50.23±7.88)歲；確診為鱗狀細胞癌的患者40例作為OSCC組，其中男性23例，女性17例，年齡22～70歲，平均年齡(51.43±7.69)歲； 納入標準：手術(shù)后經(jīng)病理學檢查確診為口腔白斑、口腔鱗狀細胞癌；排除標準：①術(shù)前有化療、放療病史；②合并其他惡性腫瘤；③惡液質(zhì)；④存在嚴重的內(nèi)科疾病；⑤病歷資料不完整。另外選取同時期體檢正常的志愿者40例作為對照組，其中男性25例，女性15例，年齡22～74歲，平均年齡(52.12±7.75)歲。3組研究對象在性別組成、年齡等一般資料方面比較，差異無統(tǒng)計學意義。

1.2 方法

1.2.1 樣本制作:OLK組及OSCC組均于術(shù)中取病變組織作為樣本，對照組取正常的口腔黏膜組織作為樣本。所有組織均取適量置入5 mL EP管中，加入裂解液、MDM2，p53，Ki-67蛋白酶抑制劑，采用液氮研磨，冰上孵育40 min后，離心機速度13000 r/min，離心40 min，取上清液。

1.2.2 指標檢測:選用人MDM2 p53結(jié)合蛋白同源物(MDM2)檢測試劑盒(上海滬震生物科技有限公司)、人 p53Elisa試劑盒、人Ki-67 ELISA試劑盒(上海常斤生物科技有限公司)，利用酶聯(lián)免疫檢測儀(JK-MR-5031)，通過酶聯(lián)免疫吸附法測定各組研究對象組織上清液中MDM2蛋白、p53蛋白、Ki-67蛋白含量。

2 結(jié)果

2.1 3組間MDM2、p53表達水平比較 研究顯示，3組間MDM2、p53表達水平比較差異有統(tǒng)計學意義(F=1018.93，F(xiàn)=984.87，P<0.05)，OSCC組>OLK組>對照組，見表1。

*P<0.05，與OLK組相比，compared with OLK group

2.2 3組間Ki-67表達水平比較 本研究顯示，3組間Ki-67表達水平比較，差異有統(tǒng)計學差異(F=1173.58，P<0.05)，OSCC組>OLK組>對照組，見表2。

表2 3組間Ki-67表達水平比較Tab.2 Comparison of Ki-67 among three ±s)

*P<0.05，與OLK組相比，compared with OLK group

2.3 MDM2、p53與Ki-67在OLK組中表達的相關(guān)性 本研究中，MDM2和p53、p53和Ki-67、MDM2和Ki-67在OLK組中的表達均呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。見表3。

表3 MDM2、p53與Ki-67在OLK組中表達的相關(guān)性Tab.3 Relevance of MDM2，p53 and Ki-67 in OLK group

2.4 MDM2、p53與Ki-67在OSCC組中表達的相關(guān)性 本研究中，MDM2和p53、p53和Ki-67、MDM2和Ki-67在OSCC組中的表達，均呈正相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 MDM2、p53與Ki-67在口腔鱗狀細胞癌中表達的相關(guān)性Tab.4 Relevance of MDM2，p53 and Ki-67 in OSCC group

2.5 MDM2、p53與Ki-67在對照組表達的相關(guān)性 本研究中，MDM2和p53、p53和Ki-67、MDM2和Ki-67在正常粘膜中的表達無相關(guān)性。見表5。

表5 MDM2、p53與Ki-67在對照組表達的相關(guān)性Tab.5 Relevance of MDM2，p53 and Ki-67 in control group

3 討論

口腔鱗狀細胞癌的發(fā)生率占面部惡性腫瘤的第1位，常常由口腔白斑發(fā)展而來，尤其好伐與男性吸煙者，給患者帶來較大的痛苦[7]?？谇击[狀細胞癌具有早期轉(zhuǎn)移、侵襲力強、預(yù)后差的特點，一旦發(fā)生，則沒有良好的控制手段，目前，學者多將研究的重點放在及早診斷，減緩其發(fā)展過程方面[8]。近年來，隨著分子生物學的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)從癌前病變進展為癌癥與基因調(diào)控有關(guān)，原癌基因被激活，抑癌基因變異是癌癥發(fā)生的主要原因[9]。資料顯示[10]，p53是一種位于17號染色體的抑癌基因，具有抑制細胞生長及促凋亡作用，調(diào)節(jié)細胞周期，其出現(xiàn)突變與癌癥的發(fā)生關(guān)系密切；MDM2[11]與p53基因具有關(guān)聯(lián)性，能夠調(diào)節(jié)p53基因表達，同時具有致癌作用與抑癌作用；Ki-67[12]則是半衰期較短的核抗原，出現(xiàn)在細胞周期中，可以反應(yīng)細胞增殖活性，近年來作為癌癥增殖活性的指標進行檢測。在本實驗中，通過檢測觀察MDM2，p53，Ki-67在口腔鱗狀細胞癌及口腔白斑中的表達水平及變化，探討其與口腔鱗狀細胞癌的相關(guān)性及意義，明確其對口腔鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展的影響，為口腔鱗狀細胞癌的早期診斷提供依據(jù)。

研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3組間MDM2、p53表達水平比較均為OSCC組>OLK組>對照組，差異有統(tǒng)計學意義，提示MDM2、p53的強表達在OSCC發(fā)展中起到重要作用。曾有研究報道[13]，p53基因位于17號染色體，其外顯子N端由aa殘基組成，能夠調(diào)控DNA轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)合成過程，而MDM2可以通過aa殘基與p53進行結(jié)合，抑制p53的抑癌作用，促進癌細胞繁殖生長，加速口腔白斑發(fā)展為口腔鱗狀細胞癌的進程。

本研究顯示，3組間Ki-67表達水平比較，OSCC組>OLK組>對照組(P<0.05)，提示OSCC具有更高的增殖活性。Ki-67是細胞增殖抗原，與細胞周期關(guān)系密切，調(diào)控著細胞的增殖活性，與病變惡性程度相關(guān)，有報道稱[14]，Ki-67與口腔白斑的浸潤和上皮角化增生關(guān)系密切，與本研究結(jié)果一致。

相關(guān)性研究表明，在口腔白斑與口腔鱗狀細胞癌中，MDM2，p53，Ki-67 表達呈正相關(guān)關(guān)系，在正常粘膜中表達無明顯相關(guān)。資料顯示[15-16]，DNA受損后，能夠使p53表達增強，進一步激活MDM2，2者結(jié)合形成MDM2-p53化合物，阻斷細胞周期；p53表達降低時，MDM2表達隨之減少，p53的抑癌作用可得到恢復(fù)。MDM2與p53作用的最終階段都是細胞，Ki-67主宰著細胞周期的變化，研究顯示[17]，MDM2和突變的p53能夠誘導Ki-67轉(zhuǎn)化，使得Ki-67水平上調(diào)，而p53能夠在Ki-67的幫助下抑制信號傳導通路，促進細胞凋亡，與本研究觀點相同。

本研究通過對口腔白斑與口腔鱗狀細胞癌患者MDM2，p53，Ki-67的表達情況及相關(guān)性進行分析，發(fā)現(xiàn)口腔白斑發(fā)展成為口腔鱗狀細胞癌與MDM2，p53，Ki-67的高表達有關(guān)，MDM2、p53、Ki-67 3者之間呈正相關(guān)關(guān)系，為口腔鱗狀細胞癌的早期診斷提供了方向。在下一步研究中，將對不同分期的口腔鱗狀細胞癌MDM2，p53，Ki-67表達情況進行研究，進一步探討3者與口腔鱗狀細胞癌發(fā)展的關(guān)系。

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(編校：譚玲)

Correlation and differences in proto oncogene protein of patients with OLK and OSCC

LI Wei-wei, WEI Qi-ling, YANG Jin-hui, TONG Jing, CUI Qiu-ping

(Department of Stomatology, Tangshan Worker Hospital, Tangshan 063000, China)

ObjectiveTo analyse the significance of proto oncogene protein in oral squamous cell carcinoma and oral leukoplakia.Methods40 patients who were diagnosed with oral leukoplakia (OLK)，40 patients who were diagnosed with oral squamous cell carcinoma(OSCC)，and at the same time, 40 healthy volunteers as control group were collected.the lesions and normal oral mucosa were taken as samples, left supernatant after grinding, MDM2 protein, p53 protein and Ki-67 protein were detected by ELISA in three groups,and analyse the correlation between three groups.ResultsAmong three groups,MDM2, p53 expression:OSCC group>OLK group>control group (P<0.05).Ki-67 expression level among three groups, OSCC group>OLK group>control group (P<0.05).MDM2, p53, Ki-67 expression had a positive correlation in OSCC group and OLK group (P<0.05), but there was no obvious correlation in control group.ConclusionWhen oral leukoplakia developes into oral squamous cell carcinoma, MDM2, p53, Ki-67 shows high expression, and there is a positive correlation between MDM2, p53, Ki-67.

oral leukoplakia; oral squamous cell carcinoma; MDM2; p53; Ki-67

2012年唐山市科技局計劃項目(121302119a)

李崴嵬，男，碩士,主治醫(yī)師,研究方向：口腔修復(fù)，E-mail: kqlwwei@sina.com。

R739.8

A

1005-1678(2015)06-0065-03