李夢(mèng)迪石麗君劉紅梅陽志軍潘忠勉李力2,王琪

作者單位：530021南寧1廣西腫瘤防治研究所實(shí)驗(yàn)研究部；2區(qū)域性高發(fā)腫瘤早期防治研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（廣西醫(yī)科大學(xué)）；3廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦瘤科；4廣西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院

基礎(chǔ)研究

A2M介導(dǎo)Fas信號(hào)傳導(dǎo)途徑提高卵巢癌對(duì)鉑類化療的敏感性研究

李夢(mèng)迪1，4石麗君1，4劉紅梅1，4陽志軍2，3潘忠勉3李力2,3王琪1，2

作者單位：530021南寧1廣西腫瘤防治研究所實(shí)驗(yàn)研究部；2區(qū)域性高發(fā)腫瘤早期防治研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（廣西醫(yī)科大學(xué)）；3廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦瘤科；4廣西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院

目的探討A2M基因的表達(dá)與卵巢癌患者耐藥及預(yù)后的關(guān)系及其對(duì)Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響。方法利用癌癥基因圖集（The Cancer Genome Atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫中鉑類敏感和耐藥的卵巢癌患者的基因表達(dá)譜，分析A2M基因在鉑類敏感和耐藥患者中的表達(dá)差異。利用已構(gòu)建的帶有綠色熒光標(biāo)記的卵巢癌SKOV3敏感細(xì)胞（SKOV3-GFP）和順鉑耐藥細(xì)胞（SKOV3-GFP/DDPⅡ）進(jìn)行裸鼠皮下種植，成瘤后分次予以順鉑體內(nèi)干預(yù)，以實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time quantitative PCR，qRT-PCR）技術(shù)檢測(cè)不同次數(shù)順鉑干預(yù)后的腫瘤組織中A2M mRNA與Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路上重要節(jié)點(diǎn)基因的表達(dá)水平。用雙變量線性回歸分析A2M mRNA與所檢測(cè)基因的表達(dá)量的相關(guān)性。結(jié)果相對(duì)于鉑類敏感病例，A2M mRNA在鉑類耐藥患者中的表達(dá)下降（P＜0.05），A2MmRNA的表達(dá)與耐藥相關(guān)（P=0.02），與卵巢癌患者總生存期、化療間隔生存期和無疾病進(jìn)展生存期高度相關(guān)（P均＜0.001），其表達(dá)量越高，患者生存期越長。A2M mRNA以及細(xì)胞凋亡相關(guān)的Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路上重要節(jié)點(diǎn)基因Fas、FADD、caspase10、caspase9和caspase3隨順鉑注射次數(shù)的增加，在耐藥的移植瘤組織中相對(duì)低表達(dá)（P＜0.001）；而其下游與DNA修復(fù)相關(guān)的基因PARP1隨順鉑注射次數(shù)的增加，在耐藥的移植瘤組織中相對(duì)高表達(dá)（P＜0.05）。A2M mRNA的表達(dá)與Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路上節(jié)點(diǎn)基因的表達(dá)存在線性相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論A2M可能是卵巢癌順鉑耐藥的潛在信號(hào)分子，它可能維持腫瘤細(xì)胞對(duì)鉑類藥物的敏感性。其在耐藥細(xì)胞中的低表達(dá)可能通過某種機(jī)制抑制下游的Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路，使其傳導(dǎo)失調(diào)，最終引起PARP1的表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)DNA修復(fù)，抑制細(xì)胞凋亡，誘發(fā)卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥。

卵巢腫瘤；順鉑耐藥；A2M；Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路；癌癥基因圖集

鉑類藥物是目前臨床上治療卵巢癌的一線化療藥物。而臨床上約80%的卵巢癌患者在多次化療后產(chǎn)生鉑類獲得性耐藥，嚴(yán)重影響了患者的預(yù)后，產(chǎn)生耐藥后的患者5年生存率僅為20%［1］。研究表明，鉑類獲得性耐藥產(chǎn)生是一個(gè)時(shí)間依賴的生物學(xué)過程［2］。已知的鉑類藥物耐藥機(jī)制主要包括：DNA修復(fù)能力的提高；藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)蓄積減少，包括細(xì)胞攝入藥物減少和藥物主動(dòng)外排增加；腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的轉(zhuǎn)化和解毒功能增強(qiáng)；細(xì)胞凋亡傳導(dǎo)通路上調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)改變等。眾所周知，F(xiàn)as信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)細(xì)胞凋亡起關(guān)鍵性作用。有研究表明，抑制腫瘤細(xì)胞的Fas基因后，下游信號(hào)傳導(dǎo)通路同樣被抑制，并能增強(qiáng)細(xì)胞毒性化療藥物對(duì)卵巢癌細(xì)胞的毒性，可逆轉(zhuǎn)卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療的耐受［3］。

本課題組在前期模擬臨床耐藥的過程中，通過活體內(nèi)連續(xù)誘導(dǎo)，建立了裸鼠卵巢癌的順鉑（DDP）耐藥模型，并獲得順鉑獲得性耐藥的SKOV3-GFP/DDPⅡ細(xì)胞株［4］。繼之我們對(duì)SKOV3-GFP/DDPⅡ耐藥過程進(jìn)行動(dòng)態(tài)的生物學(xué)分析，整和基因表達(dá)譜、microRNA譜及蛋白質(zhì)譜三個(gè)水平的數(shù)據(jù)信息后，篩選到α2巨球蛋白（A2M）在耐藥細(xì)胞中均顯著降低。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，A2M是血液中的一種大分子血漿蛋白。月irkenmeier等［5］認(rèn)為老年人血液A2M水平的下降與腫瘤發(fā)病率高度相關(guān)；最近研究表明，A2M與其細(xì)胞膜受體LRP1結(jié)合可抑制Wnt/β-catenin腫瘤信號(hào)傳導(dǎo)途徑［6］。

在以上研究成果的基礎(chǔ)上，我們利用癌癥基因圖集（The Cancer Genome Atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫進(jìn)一步分析了A2M基因的表達(dá)與卵巢癌化療耐藥的相關(guān)性。并采用SKOV3-GFP和SKOV3-GFP/DDPⅡ兩種細(xì)胞株進(jìn)行裸鼠皮下種植成瘤，對(duì)移植瘤分次進(jìn)行體內(nèi)順鉑干預(yù)，對(duì)所獲腫瘤組織進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time quantitative PCR，qRT-PCR）檢測(cè)，研究了A2M和Fas凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路上重要節(jié)點(diǎn)基因在鉑類敏感組織和耐藥組織中的表達(dá)變化，并對(duì)二者的相關(guān)性進(jìn)行了探討，試圖推測(cè)A2M是否有助于維持卵巢癌細(xì)胞對(duì)鉑類藥物的敏感性及其表達(dá)變化是否能通過影響下游的Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制細(xì)胞凋亡，從而誘發(fā)腫瘤細(xì)胞耐藥。

1 材料和方法

1.1 材料

細(xì)胞株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SKOV3-GFP細(xì)胞株為帶有綠色熒光蛋白（green fluorescentprotein，GFP）綠色熒光標(biāo)記的卵巢癌SKOV3親本細(xì)胞，SKOV3-GFP/DDPⅡ?yàn)楸菊n題組前期在裸鼠體內(nèi)由順鉑誘導(dǎo)的DDP耐藥細(xì)胞株，耐藥指數(shù)為2.42倍［4，7］。裸鼠（SPF級(jí)，月al月/C）由廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：NO.1011131），均為4周齡左右的雌性裸鼠，體重為18～20 g。

主要試劑：順鉑為山東齊魯制藥有限公司生產(chǎn)，DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清購自美國Corning公司。Trizol Reagent為美國Invitrogen公司產(chǎn)品，M-MLV Reverse Transcriptase由美國Promega公司提供，SY月R Premix Ex TaqⅡ購自日本Takara公司，基因引物由美國Invitrogen公司合成，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀為美國生產(chǎn)（A月I7300型）。

數(shù)據(jù)來源：TCGA數(shù)據(jù)庫是目前世界上最大的癌癥基因數(shù)據(jù)庫，由英國帝國理工大學(xué)HaniGabra教授惠贈(zèng)，含497例卵巢癌患者的全基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)及臨床預(yù)后資料，患者的臨床資料見文獻(xiàn)［8］。其中卵巢癌鉑類耐藥89例，鉑類敏感165例，未確診鉑類耐藥243例。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 裸鼠皮下移植瘤鉑類耐藥模型按本課題組前期研究的方法［4］，以10%胎牛血清和1%青霉素和鏈霉素的DMED培養(yǎng)基，37℃、5%CO2培養(yǎng)SKOV3-GFP和SKOV3-GFP/DDPⅡ細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長期。以1×107個(gè)細(xì)胞的密度接種于裸鼠的腹股溝皮下，種植8 d后觀察成瘤情況。用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長直徑（a）與最短直徑（b），待腫瘤體積（0.52×a×b2）長至400 mm3時(shí)，開始予隔日腹腔注射DDP（劑量為2.5 mg/kg，共8次），每組4只裸鼠。分別在第2次、第5次、第6次注射后的次日取出瘤塊，對(duì)照組分別為無順鉑處理的移植瘤。

1.2.2 qRT-PCR檢測(cè)Fas凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路上節(jié)點(diǎn)基因mRNA的表達(dá)以Trizol法提取所得腫瘤組織的RNA，定量后逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。qRT-PCR檢測(cè)上述移植腫瘤組織cDNA中A2M、Fas凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上節(jié)點(diǎn)基因mRNA的表達(dá)。所檢測(cè)基因的引物序列如表1，以GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參。采用2-△△Gt法計(jì)算實(shí)驗(yàn)組目的基因的表達(dá)相對(duì)于對(duì)照組的表達(dá)倍數(shù)。

表1 所測(cè)基因引物序列

1.2.3 A2M mRNA的表達(dá)與卵巢癌鉑類獲得性耐藥和患者預(yù)后的相關(guān)性分析利用TCGA數(shù)據(jù)庫中鉑類敏感和耐藥的卵巢癌患者的基因表達(dá)譜，分析A2M基因在鉑類敏感和耐藥患者中的表達(dá)差異；Pearson相關(guān)分析A2M mRNA的表達(dá)量與卵巢癌患者臨床耐藥以及預(yù)后（包括患者總生存期、無疾病進(jìn)展生存期和化療間隔生存期）的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間的比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），進(jìn)一步兩兩比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)。以Pearson相關(guān)分析A2M mRNA的表達(dá)量與卵巢癌患者鉑類耐藥以及預(yù)后的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 A2M mRNA表達(dá)量與卵巢癌鉑類獲得性耐藥和患者預(yù)后的相關(guān)性分析

分析TCGA提供的89例卵巢癌鉑類耐藥患者和165例鉑類敏感患者的全基因組表達(dá)譜數(shù)據(jù)。結(jié)果表明相對(duì)于鉑類敏感病例，A2M mRNA在鉑類耐藥患者的表達(dá)下降（P＜0.05）（圖1）；Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)A2M mRNA的表達(dá)與卵巢癌患者臨床耐藥相關(guān)（P=0.02），與卵巢癌患者總生存期、化療間隔生存期和無疾病進(jìn)展生存期高度相關(guān)（P均＜0.001），其表達(dá)量越高，患者的生存期越長。

圖1 A2M m RNA在卵巢癌鉑類敏感和耐藥患者中的表達(dá)比較

2.2 qRT-PCR檢測(cè)A2M與Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路上節(jié)點(diǎn)基因mRNA的表達(dá)

以qRT-PCR檢測(cè)與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路上的重要節(jié)點(diǎn)基因的mRNA表達(dá)。結(jié)果表明，A2M mRNA在卵巢癌鉑類敏感組織和耐藥組織中的表達(dá)隨順鉑注射次數(shù)的增多均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。未進(jìn)行順鉑注射時(shí)，A2M mRNA在鉑類耐藥組織中的表達(dá)較鉑類敏感組織高2.0倍（P=0.001）。而經(jīng)不同次數(shù)順鉑作用后，其在鉑類耐藥組織中的表達(dá)均低于鉑類敏感組織，尤其在順鉑注射2次后，A2M mRNA的表達(dá)下調(diào)了4.7倍（P=0.001）；至順鉑注射6次后，A2M mRNA的表達(dá)在鉑類敏感和耐藥移植瘤組織中均較低，但是在后者中的表達(dá)相對(duì)于前者仍顯著降低（P=0.045）。另外，隨順鉑注射次數(shù)的增加，F(xiàn)as信號(hào)傳導(dǎo)通路上的Fas、FADD、caspase10、caspase9和caspase3在耐藥移植瘤組織中的mRNA表達(dá)相對(duì)于敏感移植瘤組織亦均明顯降低（P＜0.001），特別是在順鉑注射2次后，F(xiàn)asmRNA的表達(dá)下調(diào)了2.4倍（P=0.002），caspase9mRNA的表達(dá)下調(diào)了2.1倍（P=0.035），caspase3 mRNA的表達(dá)下調(diào)了2.1倍（P=0.043）；至順鉑注射6次后，F(xiàn)asmRNA的表達(dá)下調(diào)了3.7倍（P=0.001），F(xiàn)ADD mRNA的表達(dá)下調(diào)了3.2倍（P=0.028），caspase10 mRNA和caspase9mRNA均下調(diào)2.0倍（P均=0.001）。而隨順鉑注射次數(shù)的增加，在Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路下游與DNA修復(fù)相關(guān)的PARP1在耐藥移植瘤組織中的mRNA表達(dá)相對(duì)于敏感移植瘤組織明顯上調(diào)（P＜0.01），特別是順鉑注射6次后，上調(diào)了2.0倍（P=0.023）。各節(jié)點(diǎn)基因表達(dá)趨勢(shì)的變化見圖2。

圖2 qRT-PCR檢測(cè)A2M、Fas、FADD、caspase10、caspase9、caspase3和PARP1在裸鼠移植瘤中不同順鉑注射次數(shù)的m RNA相對(duì)表達(dá)量

2.3 A2M mRNA的表達(dá)與Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路上節(jié)點(diǎn)基因以及下游基因表達(dá)的相關(guān)性分析

將不同次數(shù)順鉑作用后的腫瘤組織中A2MmRNA的相對(duì)表達(dá)量與Fas信號(hào)通路上節(jié)點(diǎn)基因和下游PARP1的相對(duì)表達(dá)量分別進(jìn)行雙變量線性回歸分析，結(jié)果顯示A2MmRNA的表達(dá)變化與Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路上節(jié)點(diǎn)基因和下游PARP1的表達(dá)變化均存在相關(guān)性（P＜0.05）。見圖3。

圖3 雙變量線性回歸分析A2M mRNA與Fas、FADD、caspase10、caspase9、caspase3和PARP1在裸鼠移植瘤中相對(duì)表達(dá)量的相關(guān)性

3 討論

在婦科腫瘤中卵巢癌發(fā)病隱匿，當(dāng)腫瘤局限于卵巢時(shí)，僅約25%的患者可確診［2］。到腫瘤晚期（FIGO分期為Ⅲ期和Ⅳ期），當(dāng)病變擴(kuò)展至卵巢外部時(shí)，約70%的患者確診時(shí)已處于晚期，失去了最佳的治療時(shí)機(jī)。以鉑類藥物（順鉑、卡鉑、奧沙利鉑）為基礎(chǔ)結(jié)合紫杉醇類化療藥物的聯(lián)合化療是目前治療卵巢癌的一線化療方案［9］。盡管以順鉑治療卵巢癌初期表現(xiàn)較敏感［10］，但仍有15%～20%的患者出現(xiàn)原發(fā)性耐藥，而其余80%的患者雖然對(duì)鉑類敏感，但可能在反復(fù)化療過程中產(chǎn)生獲得性耐藥［11］。因此，深入探討卵巢癌的多藥耐藥機(jī)制，有利于了解疾病的發(fā)生、發(fā)展過程，以采取針對(duì)性的治療措施逆轉(zhuǎn)化療耐藥，改善卵巢癌患者的預(yù)后和提高生存質(zhì)量。

本課題組在前期研究的基礎(chǔ)上，首先對(duì)A2M基因的表達(dá)與卵巢癌患者鉑類耐藥情況進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果表明，相對(duì)于鉑類敏感病例，A2M基因在鉑類耐藥患者的表達(dá)下降，并與卵巢癌患者的鉑類耐藥以及總生存期、無疾病進(jìn)展生存期和化療間隔生存期高度相關(guān)，其表達(dá)量越高，患者生存期越長。據(jù)此，我們初步認(rèn)為A2M可能是與卵巢癌鉑類耐藥有關(guān)的重要因子，它可能維持卵巢癌患者對(duì)鉑類化療的敏感性。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，在裸鼠移植瘤中A2M mRNA的表達(dá)隨順鉑注射次數(shù)的增多，相對(duì)于順鉑敏感組織，其在耐藥組織中的表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，未進(jìn)行順鉑注射時(shí)，A2M mRNA在耐藥組織中的表達(dá)高于敏感組織2.0倍，而經(jīng)不同次數(shù)順鉑作用后，其在耐藥組織中的表達(dá)均低于敏感組織，特別是在順鉑注射2次后，A2M mRNA的表達(dá)顯著下降，至順鉑注射6次后，A2M mRNA的表達(dá)在敏感組織和耐藥組織中均很低，但相對(duì)于前者在后者中的表達(dá)仍表現(xiàn)出下調(diào)。以上結(jié)果提示A2M的表達(dá)隨藥物的作用出現(xiàn)了異常，從而更好地論證A2M可能與腫瘤細(xì)胞的鉑類耐藥有關(guān)這一推測(cè)。綜合A2M的表達(dá)與卵巢癌患者鉑類耐藥的相關(guān)性分析，我們進(jìn)一步認(rèn)定A2M可能是與卵巢癌鉑類耐藥相關(guān)的潛在信號(hào)分子，它在腫瘤細(xì)胞中的低表達(dá)減弱了細(xì)胞對(duì)鉑類藥物的敏感性。而對(duì)Fas凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路上節(jié)點(diǎn)各基因mRNA的表達(dá)進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路在耐藥組織經(jīng)順鉑作用后明顯被抑制，而與DNA修復(fù)相關(guān)的PARP1mRNA出現(xiàn)了表達(dá)上調(diào)。另外，F(xiàn)as通路上的Fas、caspase10、caspase9和caspase3以及下游的PARP1未進(jìn)行順鉑注射時(shí)，在敏感組織和耐藥組織中的mRNA表達(dá)無明顯差異，而Fas、caspase9 mRNA和caspase3 mRNA的表達(dá)均在第2次順鉑注射后出現(xiàn)大幅度地下降。這種潛在的聯(lián)系提示順鉑的干預(yù)可能是在改變了A2M的表達(dá)后影響Fas通路上節(jié)點(diǎn)基因mRNA的表達(dá)，繼之上調(diào)了其下游與DNA修復(fù)相關(guān)的PARP1基因的表達(dá)。而對(duì)A2M的表達(dá)變化與Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路上節(jié)點(diǎn)基因和其下游基因的表達(dá)變化進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了A2M的表達(dá)變化與Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路存在一定聯(lián)系。

文獻(xiàn)報(bào)道，A2M作為血液中的一種大分子血漿蛋白，主要是通過抑制血液纖維蛋白溶酶和激肽釋放酶的活性來發(fā)揮抑制纖維蛋白溶解的功能，也可作為載體蛋白與許多生長因子和細(xì)胞因子，如血小板源生長因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（TGF-β）、胰島素樣生長因子（IGF-1）和白細(xì)胞介素等結(jié)合［12］。Lauer等［13］認(rèn)為A2M與生長因子結(jié)合，滅活了TGF-β1等已知的促腫瘤增殖因子，而抑制腫瘤生長和侵襲。Lillis等［14］證明A2M與其受體LRP1結(jié)合后能清除TGF-β1等其他生長調(diào)節(jié)配體。A2M和LRP1結(jié)合后還能吞噬多種基質(zhì)金屬蛋白酶，如MMP-2等而抑制細(xì)胞遷移和侵襲［15］。據(jù)此，我們認(rèn)為A2M可能是通過與LRP1結(jié)合而有助于機(jī)體自身免疫能力的維持，可促使鉑類藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，通過Fas途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，在一定程度上維持了腫瘤細(xì)胞對(duì)鉑類化療藥物的敏感性。在臨床上，卵巢癌患者由于長期進(jìn)行化療，血漿中A2M下降后，其與LRP1的結(jié)合相對(duì)減弱，從而使Fas凋亡通路被抑制，細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性減弱，導(dǎo)致細(xì)胞耐藥。本實(shí)驗(yàn)研究也證實(shí)卵巢癌細(xì)胞耐藥時(shí)，A2M與Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路上節(jié)點(diǎn)基因的表達(dá)均顯著下調(diào)，從而印證了以上推測(cè)。

綜上，我們推測(cè)A2M作為潛在的鉑類耐藥上游調(diào)控信號(hào)分子，直接或間接影響卵巢癌的腫瘤微環(huán)境，調(diào)控著微環(huán)境中某些細(xì)胞生長因子以及下游的葉酸代謝和凋亡信號(hào)通路，并能以某種方式激活細(xì)胞內(nèi)Fas凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路，維持卵巢癌細(xì)胞對(duì)鉑類藥物的敏感性。在順鉑反復(fù)作用下，卵巢癌細(xì)胞中A2M基因的表達(dá)降低，通過與腫瘤微環(huán)境中某些細(xì)胞因子或趨化因子的相互作用，抑制了細(xì)胞內(nèi)Fas凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路，使其調(diào)控下游的DNA修復(fù)功能增強(qiáng)，從而抵抗順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。亦即A2M可能介導(dǎo)Fas信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而提高卵巢癌患者對(duì)鉑類藥物的敏感性。但有關(guān)耐藥相關(guān)信號(hào)分子的表達(dá)異常后，具體是通過哪些細(xì)胞因子的協(xié)助以及如何與下游信號(hào)通路相互作用誘導(dǎo)了細(xì)胞對(duì)藥物的耐受，其機(jī)制仍需深入研究和證實(shí)。

［1］Cohen S，Mosig R，Moshier E，et al.Interferon regulatory factor 1 is an independent predictor of platinum resistance and survival in highgrade serous ovarian carcinoma［J］.Gynecol Oncol，2014，134（3）：591-598.

［2］OzolsRF，Bookman MA，Connolly DC，etal.Focuson epithelialovarian cancer［J］.Cancer Cell，2004，5（1）：19-24.

［3］Morimoto HS，Yonehara S，Bonavida B.Overcoming tumor necrosis factor and drug resistance of human tumor cell lines by combination treatmentwith anti-Fas antibody and drugs or toxins［J］.Cancer Res，1993，53（11）：2591-2596.

［4］石麗君，于紅靜，張瑋，等.順鉑耐藥卵巢上皮性癌細(xì)胞株及其裸鼠移植瘤模型的建立及耐藥特性探討［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2014，49（7）：523-530.

［5］Birkenmeier G，Müller R，Huse K，et al.Human alpha2-macroglobulin：genotype-pheno-type relation［J］.Exp Neurol，2003，184（1）：153-161.

［6］Lindner I，Hemdan NY，Buchold M，etal.Alpha2-macroglobulin inhibits the malignant properties of astrocytoma cells by impeding betacatenin signaling［J］.Cancer Res，2010，70（1）：277-287.

［7］尹巧云，李力，于紅靜，等.小分子蛋白慢病毒表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建［J］.中國癌癥防治雜志，2011，3（4）：271-276.

［8］石麗君，于紅靜，李力，等.鉑類耐藥相關(guān)基因在卵巢癌順鉑耐藥形成過程中表達(dá)量的動(dòng)態(tài)變化［J］.中國癌癥防治雜志，2013，5（3）：210-215.

［9］Metzger-Filho O，Moulin C，D'Hondt V.First-line systemic treatment of ovarian cancer：a critical review of available evidence and expectations for future directions［J］.Curr Opin Oncol，2010，22（5）：513-520.

［10］Siegel R，Ward E，Brawley O，et al.Cancer statistics，2011：the impact of eliminating socioeconomic and racial disparities on premature cancer deaths［J］.CA Cancer JClin，2011，61（4）：212-236.

［11］Gotlieb WH，Bruchim I，Ben-Baruch G，et al.Doxorubicin levels in the serum and ascites of patients with ovarian cancer［J］.Eur JSurg Oncol，2007，33（2）：213-215.

［12］Arandjelovic S，F(xiàn)reed TA，Gonias SL.Growth factor-binding sequence in human alpha2-macroglobulin targets the receptor-binding site in transforming growth factor-beta［J］.Biochemistry，2003，42（20）：6121-6127.

［13］Lauer D，Müller R，Cott C，et al.Modulation of growth factor binding properties of alpha2-macroglobulin by enzyme therapy［J］.Cancer Chemother Pharmacol，2001，47（Suppl）：4-9.

［14］Lillis AP，Van Duyn LB，Murphy-Ullrich JE，et al.LDL receptorrelated protein 1：unique tissue-specific functions revealed by selective gene knockout studies［J］.Physiol Rev，2008，88（3）：887-918.

［15］Fears CY，Grammer JR，Stewart JE Jr，et al.Low-density lipoprotein receptor-related protein contributes to the antiangiogenic activity of thrombospondin-2 in amurine gliomamodel［J］.Cancer Res，2005，65（20）：9338-9346.

［2015-01-20收稿］［2015-03-09修回］［編輯阮萃才］

Association between A2M-induced Fas apop totic signaling and ovarian tumor sensitivity to p latinum-based chemotherapy

LIMengdi1，4，SHILijun1，4，LIU Hongmei1，4，YANG Zhijun2，3，PAN Zhongmian3，LILi2，3，WANG Qi1，2（1Research Department of Guangxi Cancer Institute；2Key Laboratory of High-Incidence-Tumor Prevention Treatment，Ministry of Education；3Department of Gynecological Oncology，Affiliated Tumor Hospital of Guangxi Medical University；4Graduate School of Guangxi Medical University，Nanning 530021，P.R.China）

WANG Qi.E-mail：qi_catcat@163.com

ObjectiveTo analyze the relationship of A2M-induced Fas signaling to drug resistance of ovarian cancer and to patient prognosis.M ethodsWe used gene expression profiles in the Cancer Genome Atlas to search for correlations of A2M expression with drug resistance of ovarian cancer and with patient prognosis based on Pearson correlation analysis.Cisplatin-sensitive or-resistant SKOV3 ovarian cancer cells expressing green fluorescent protein were inoculated subcutaneously into nude mice.At different timesafter cisplatin administration，tumor tissues were analyzed using real-time fluorescent quantitative PCR to determine expression of A2M and key node genes in the Fas pathway.Correlation between A2M expression and expression of node geneswas examined using linear regression.ResultsA2M correlates significantly with drug resistance of ovarian cancer（P=0.020）.A2M was expressed at significantly lower levels in platinum-resistant tissue than in platinum-sensitive tissue（P＜0.05），and higher A2M levels correlated significantly with longer platinum-free interval，overall survival，and progression-free survival（P＜0.001）.Platinum-resistant transplanted tumors expressed significantly lower levels of A2M and the apoptosis-related node genes Fas，F(xiàn)ADD，Caspase10，Caspase9 and Caspase3 than did platinum-sensitive tumors（P＜0.001）.The downstream gene PARP1，important for DNA repair，was expressed at a significantly higher level in platinum-resistant tumors（P＜0.05）.Expression of A2M correlated linearly with that of node genes of the Fas signaling pathway（P＜0.05）.ConclusionsA2M may be amarker of cisplatin resistance in ovarian cancer.Lower levels of A2M expression may up-regulate expression of the DNA repair protein PARP1，inhibiting cell apoptosis and ultimately leading to cisplatin resistance.

Ovarian neoplasm；Cisplatin resistance；A2M；Fas signal transduction pathways；The cancer genome atlas

R737.31

A

1674-5671（2015）02-07

10.3969/j.issn.1674-5671.2015.02.01

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81360341）;廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2013GXNSFAA019248）

王琪。E-mail：qi_catcat@163.com