魏湜,張翯,顧萬榮,李晶,李改玲,焦健,曹鑫波,楊可攀
(1.東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院,哈爾濱150030;2.農(nóng)業(yè)部東北地區(qū)作物栽培科學觀測實驗站,哈爾濱150030)
DCPTA對鹽脅迫下玉米葉片滲透調(diào)節(jié)生理生化特征影響
魏湜1,2,張翯1,顧萬榮1,2,李晶1,2,李改玲1,焦健1,曹鑫波1,楊可攀1
(1.東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院,哈爾濱150030;2.農(nóng)業(yè)部東北地區(qū)作物栽培科學觀測實驗站,哈爾濱150030)
為明確DCPTA提高玉米幼苗耐鹽性生理生化機制,采用Hoagland營養(yǎng)液水培試驗,以‘先玉335’和‘豐禾1號’兩類不同耐鹽性玉米品種為材料,研究15 mg·L-1DCPTA對150 mmol·L-1NaCl脅迫下玉米幼苗生物量、葉片相對含水量、滲透調(diào)節(jié)及細胞膜穩(wěn)定性的影響。結(jié)果表明,DCPTA顯著增加鹽脅迫下玉米幼苗鮮重、干重及株高,緩解鹽脅迫對幼苗生長的抑制。鹽脅迫下DCPTA處理的玉米葉片可溶性糖和可溶性蛋白含量增加,脯氨酸含量降低,葉片相對含水量提高。施用DCPTA后,與單一鹽脅迫相比,‘先玉335’葉片MDA含量和相對電導率分別降低26.4%和26.0%,‘豐禾1號’分別降低31.3%和33.5%。外源DCPTA通過提高植株滲透調(diào)節(jié)能力,維持植株水分平衡,保護細胞膜結(jié)構(gòu)和功能,可減輕鹽脅迫對玉米幼苗的傷害。DCPTA對鹽敏感型玉米品種效果更佳。
DCPTA;鹽脅迫;植物生長調(diào)節(jié)劑;玉米;滲透調(diào)節(jié)
土壤鹽漬化是作物產(chǎn)量受損重要原因之一,中國土壤鹽漬化程度較高,尤其是在北方,已成為限制作物產(chǎn)量主要環(huán)境因素之一。黑龍江省西部鹽堿地面積高達96.65×104hm2,其中輕度鹽堿地面積為26.70×104hm2,占27.62%,主要分布在大慶及齊齊哈爾市南部地區(qū)[1]。因此,研究開發(fā)提高春玉米耐鹽性措施能合理利用鹽堿地,對指導玉米生產(chǎn)具有重大意義。
植物生長調(diào)節(jié)劑有顯著、高效調(diào)節(jié)效應(yīng),已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。研究表明,植物生長調(diào)節(jié)劑能增強作物在鹽脅迫下的適應(yīng)能力[2-4]。叔胺類物質(zhì)對植物生長發(fā)育有促進作用,2-(3,4-二氯苯氧基)-乙基-二乙胺(DCPTA)為其典型代表[5],有提高作物產(chǎn)量、改善品質(zhì)、增強抗逆性作用[6],已逐步應(yīng)用于蔬菜、花卉、林木及大田作物[7-8]。目前關(guān)于DCPTA增強作物抗逆性報道,主要集中在提高抗冷性與抗旱性上,原立地等研究表明適宜濃度DCPTA能有效保護低溫脅迫下玉米葉片光合系統(tǒng),使玉米幼苗葉片抗冷性提高[9]。朱恒光等發(fā)現(xiàn),不同濃度DCPTA處理均能提高低溫脅迫下玉米葉片可溶性糖和可溶性蛋白含量,降低相對電導率和MDA含量增長速率,減緩低溫帶來的氧化損傷,提高植株抗低溫能力[10]。謝騰龍等研究表明,干旱脅迫下玉米幼苗葉片噴施DCPTA可抑制膜脂過氧化,能增強滲透調(diào)節(jié)能力,增加幼苗抗旱性[11]。
DCPTA與作物抗逆性關(guān)系及其作用機理研究至今仍是研究熱點,但有關(guān)DCPTA對玉米苗期耐鹽性研究國內(nèi)外尚未見報道。本試驗以耐鹽性不同的兩個寒地玉米品種幼苗為試材,探究鹽脅迫下DCPTA對玉米幼苗生物量、葉片滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量及細胞膜穩(wěn)定性影響,為DCPTA在玉米抗逆生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論和實踐依據(jù)。
1.1 材料與設(shè)計
供試品種為耐鹽型‘先玉335’和鹽敏感型‘豐禾1號’玉米品種。
2-(3,4-二氯苯氧基)-乙基-二乙胺(DCPTA)98%可濕性粉劑由鄭州化工集團提供。
試驗于2014年7~8月在東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院溫室內(nèi)進行。選取飽滿、整齊一致種子經(jīng)表面消毒后浸種催芽,待種子發(fā)芽后播于溫室內(nèi)裝有蛭石的育苗盤中,自然光照培養(yǎng),晝溫25~30℃、夜溫15~20℃。長至二葉一心期時,挑選生長一致幼苗,洗凈根部蛭石后定植于裝有1/2 Hoagland營養(yǎng)液(pH 6.2±0.1)的水槽內(nèi)培養(yǎng),水槽容量為15 L,槽內(nèi)盛裝14 L營養(yǎng)液,槽外裹雙層黑色遮光布。
待幼苗三葉一心時進行處理,設(shè)置4個試驗處理,各3次重復。①1/2Hoagland營養(yǎng)液栽培(CK);②1/2Hoagland營養(yǎng)液+15 mg·L-1DCPTA(DCPTA處理);③1/2 Hoagland營養(yǎng)液+150 mmol·L-1NaCl(NaCl處理);④1/2 Hoagland營養(yǎng)液+150 mmol·L-1NaCl+15 mg·L-1DCPTA(NaCl+ DCPTA處理)。
DCPTA濃度(15 mg·L-1)是基于預(yù)備試驗篩選出的最適濃度,于鹽脅迫前1 d將DCPTA施加到營養(yǎng)液中,進行DCPTA預(yù)處理。鹽脅迫處理時,為防止鹽沖擊,先在營養(yǎng)液中加入50 mmol·L-1NaCl,直接將NaCl溶于營養(yǎng)液中,每12 h遞增50 mmol·L-1NaCl,直至濃度達到150 mmol·L-1,此時為取樣期的0 d。整個水培過程全程通氣,每天調(diào)節(jié)pH至6.2±0.1,每2 d更換1次營養(yǎng)液。
分別于處理后0、1、2、3、4 d取樣測定葉片相對含水量、MDA含量和相對電導率,于處理后第3天測定植株鮮重、干重、株高及滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量。
1.2 測定指標及方法
1.2.1 鮮重干重及株高
每處理選取5株幼苗,蒸餾水快速沖洗,用濾紙吸干表面水分,稱鮮重。之后將材料在烘箱中105℃殺青15 min,再在80℃下烘干至恒重,稱量干重。鮮重干重均以5株幼苗平均值表示。株高以幼苗地上部分最高點拉直高度為準。
1.2.2 滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量
取幼苗倒三位葉片,稱取0.5 g,液氮冷凍后立即置于-80℃保存,測定各指標。脯氨酸含量采用茚三酮比色法測定[12]??扇苄缘鞍缀坎捎每捡R斯亮藍G-250染色法測定[12]??扇苄蕴呛坎捎幂焱y定[13]。
1.2.3 葉片相對含水量
取5株幼苗所有葉片,蒸餾水清洗,濾紙吸干表面水分后稱鮮重,再將葉片在蒸餾水中浸泡6 h,稱取飽和鮮重,之后放入烘箱80℃烘干至恒重,稱量干重。葉片相對含水量(%)=(鮮重-干重)/(飽和鮮重-干重)×100%。
1.2.4MDA含量測定
取0.5 g葉片,采用TBA顯色法測定[14]。
1.2.5 相對電導率測定
葉片經(jīng)去離子水沖洗干凈,用濾紙吸凈表面水分,將葉片避開主脈切割成大小一致葉塊,稱取0.5 g,放入試管中,加入20 mL去離子水,浸泡10 h后用DDS-307A型電導率儀測得電導率R1,再將試管放入沸水浴中煮沸20 min,冷卻至室溫,測得電導率R2。相對電導率(%)=R1/R2×100%。
1.3 數(shù)據(jù)分析
試驗數(shù)據(jù)采用DPS7.05軟件LSD法進行標準差及顯著性比較分析,繪圖采用軟件Microsoft Excel 2003。
2.1DCPTA對鹽脅迫下幼苗生長的影響
鹽脅迫下植物最敏感的生理響應(yīng)是生長抑制、生物量降低。由表1可知,鹽脅迫下,玉米幼苗整株鮮重、整株干重和株高均顯著低于對照,表明NaCl對植株生長有明顯抑制作用,‘豐禾1號’受抑制程度大于‘先玉335’。施加DCPTA促進鹽脅迫下植株生物量積累,幼苗鮮重、干重和株高均顯著提高,‘先玉335’分別提高15.8%、14.8%和10.1%,‘豐禾1號’分別提高21.3%、17.2%和18.3%,對‘豐禾1號’促進效果更明顯。此外,單獨DCPTA處理對植株生長存在促進作用。
表1DCPTA對鹽脅迫下幼苗生物量影響Table 1Effects of DCPTA on biomass of maize seedlings under salt stress
2.2DCPTA對鹽脅迫下幼苗葉片相對含水量變化的影響
葉片相對含水量可反映植物葉片水分虧缺狀況,是衡量葉片水分狀況的重要指標。由圖1可知,幼苗葉片在鹽脅迫1、2、3、4 d后,葉片相對含水量明顯下降,‘先玉335’分別降低9.1%、12.5%、15.7%、22.0%,‘豐禾1號’分別降低12.3%、18.0%、22.9%、31.5%。經(jīng)DCPTA預(yù)處理幼苗,在鹽脅迫1、2、3、4 d后,‘先玉335’葉片RWC分別提高4.3%、5.3%、7.2%、10.6%,‘豐禾1號’分別提高6.9%、11.4%、14.7%、20.4%,表明DCPTA延緩鹽脅迫下葉片RWC下降,效果為‘豐禾1號’>‘先玉335’。此外,對照條件下施加DCPTA,葉片相對含水量增加。
圖1DCPTA對鹽脅迫下玉米幼苗葉片相對含水量(RWC)變化影響Fig.1Effects of DCPTA on variation of relative water content of maize seedling leaves under salt stress
2.3DCPTA對鹽脅迫下葉片滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的影響
脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白是三種重要滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),有助于調(diào)節(jié)逆境條件下植株滲透壓,防止細胞脫水。圖2(以第3天為例)表明,鹽脅迫下幼苗葉片中脯氨酸含量顯著高于對照,‘先玉335’和‘豐禾1號’分別高出51.5%和77.6%。施加DCPTA后,‘先玉335’和‘豐禾1號’葉片脯氨酸含量分別比鹽脅迫處理顯著降低17.9%和23.0%。與對照相比,DCPTA處理后,葉片脯氨酸含量降低,‘豐禾1號’葉片脯氨酸含量顯著下降。
圖2DCPTA對鹽脅迫下葉片脯氨酸含量影響Fig.2Effects of DCPTA on proline contents in maize seedling leaves under salt stress
DCPTA對鹽脅迫下葉片可溶性糖和蛋白含量的影響見圖3、4。由圖3、圖4(均以第3天為例)可知,鹽脅迫處理顯著提高幼苗葉片可溶性糖和蛋白含量,‘先玉335’分別為對照的188.4%和126.0%,‘豐禾1號’分別為對照的170.3%和119.6%。鹽脅迫下施加DCPTA進一步提高葉片可溶性糖和可溶性蛋白含量,‘先玉335’分別提高13.6%和10.7%,‘豐禾1號’分別提高23.8%和14.4%,‘豐禾1號’提高幅度均比‘先玉335’大。與對照相比,DCPTA處理后葉片可溶性糖含量顯著增加,但對可溶性蛋白含量無顯著影響。
圖3DCPTA對鹽脅迫下葉片可溶性糖含量影響Fig.3Effects of DCPTA on soluble sugar contents in maize seedling leaves under salt stress
圖4DCPTA對鹽脅迫下葉片可溶性蛋白含量影響Fig.4Effects of DCPTA on soluble protein contents in maize seedling leaves under salt stress
2.4DCPTA對鹽脅迫下葉片細胞膜穩(wěn)定性的影響
MDA是膜脂過氧化主要產(chǎn)物之一,其含量可以判斷膜系統(tǒng)受損程度和植物抗逆性。由圖5可知,鹽脅迫處理使幼苗葉片MDA含量顯著升高,隨處理時間延長MDA含量呈增加趨勢,且‘豐禾1號’升高幅度大于‘先玉335’。鹽脅迫下DCPTA處理顯著降低葉片MDA含量,在處理的1、2、3、4 d‘先玉335’分別降低16.3%、21.9%、25.9%、26.4%,‘豐禾1號’分別降低20.3%、27.5%、30.1%、31.3%,‘豐禾1號’降低幅度大于‘先玉335’。對照組在整個處理過程中葉片MDA含量變化不大,施加DCPTA后葉片MDA含量顯著降低。
圖5DCPTA對鹽脅迫下玉米幼苗葉片MDA含量變化影響Fig.5Effects of DCPTA on variation of MDA content in maize seedling leaves under salt stress
圖6DCPTA對鹽脅迫下玉米幼苗葉片相對電導率變化的影響Fig.6Effects of DCPTA on variation of relative electrical conductivity of maize seedling leaves under salt stress
由圖6可見,鹽脅迫下幼苗葉片相對電導率增加,‘先玉335’和‘豐禾1號’分別在處理后第2天和第1天與對照差異達到顯著水平,相對電導率隨處理時間延長而增加,‘豐禾1號’增加幅度比‘先玉335’大。施加DCPTA能降低葉片相對電導率,與NaCl處理相比,‘先玉335’和‘豐禾1號’分別在處理后第2天和第1天顯著下降,處理1、2、3、4 d‘先玉335’分別降低11.3%、16.9%、21.9%、26.0%,‘豐禾1號’分別降低14.9%、23.1%、27.5%、33.5%,‘豐禾1號’降低幅度更大。對照條件下,葉片相對電導率在處理期間無明顯變化,DCPTA處理后葉片相對電導率降低。
生物量是植物對鹽脅迫響應(yīng)的綜合體現(xiàn)及對鹽脅迫的綜合反應(yīng)[15],是確定作物耐鹽性的常用指標。以往研究表明,較高濃度鹽脅迫會導致植株干重、鮮重及株高顯著降低[16-17]。本試驗結(jié)果表明,150 mmol·L-1鹽脅迫下玉米幼苗生長量明顯受到抑制,鮮重、干重及株高均顯著降低,外源施用DCPTA減輕鹽脅迫對幼苗生長的抑制,促進鹽脅迫下幼苗生長,使幼苗鮮重、干重及株高顯著增加,表明DCPTA有緩解鹽脅迫傷害的作用。鹽脅迫下,DCPTA處理效果與品種耐鹽性有關(guān),對耐鹽性強的品種作用效果較小,而對耐鹽性差的品種作用效果明顯。非逆境條件下DCPTA能顯著促進幼苗生長。
鹽脅迫下許多植物具有一定滲透調(diào)節(jié)能力,維持葉片含水量,但植株在鹽脅迫下仍然會表現(xiàn)出失水狀況[18]。在本研究中,隨鹽脅迫時間延長,玉米幼苗葉片相對含水量顯著下降,而使用DCPTA預(yù)處理的葉片相對含水量顯著增加,‘豐禾1號’增加幅度大于‘先玉335’,表明DCPTA增加植株水分吸收,降低因鹽脅迫造成的玉米幼苗水分虧缺,改善其水分狀況,這也可能是DCPTA提高玉米耐鹽性的重要途徑之一,且DCPTA對耐鹽性差的品種作用效果更好。對照條件下施加DCPTA葉片相對含水量增加,但與鹽脅迫下施加DCPTA相比,增加幅度較小。
鹽脅迫下外界滲透勢較低,可導致植物細胞失水而造成生理性缺水,這時植物體內(nèi)滲透調(diào)節(jié)起關(guān)鍵作用。脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白是滲透調(diào)節(jié)過程三種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。目前關(guān)于逆境下植物體內(nèi)脯氨酸積累的機制存在兩種觀點:第一種認為,鹽脅迫下脯氨酸大量積累是植物適應(yīng)逆境的一種方式,有助于提高植物耐鹽性[19];第二種則認為,脯氨酸是植物受到鹽脅迫傷害的產(chǎn)物,脯氨酸積累量更應(yīng)作為衡量鹽脅迫傷害程度的指標[20]。本試驗中,鹽脅迫顯著增加玉米幼苗葉片脯氨酸含量,耐鹽性強品種增加幅度小于耐鹽性差品種,鹽脅迫下施加DCPTA葉片脯氨酸含量顯著降低,表明DCPTA減少鹽脅迫對幼苗傷害是脯氨酸含量下降的主要原因。鹽脅迫下施加DCPTA,‘豐禾1號’脯氨酸含量降低幅度大于‘先玉335’,表明DCPTA緩解鹽脅迫對幼苗傷害的效果表現(xiàn)為‘豐禾1號’>‘先玉335’??扇苄蕴呛涂扇苄缘鞍子姓{(diào)節(jié)細胞滲透壓,維持細胞含水量和膨壓作用。本試驗中,鹽脅迫處理的玉米幼苗葉片可溶性糖和可溶性蛋白含量顯著提高,施加DCPTA進一步提高鹽脅迫下葉片可溶性糖和可溶性蛋白含量,可以使細胞質(zhì)濃度增加,細胞滲透勢降低,有利于維持葉片相對含水量,一定程度上減輕鹽脅迫對玉米幼苗的傷害。
植物在適于生長的環(huán)境中,體內(nèi)活性氧產(chǎn)生與清除處于一種動態(tài)平衡狀態(tài),鹽脅迫會破壞這種平衡體系,導致自由基大量積累,引起膜脂肪酸中不飽和鍵被氧化分解,產(chǎn)生MDA[21],MDA能與酶蛋白發(fā)生鏈式反應(yīng)聚合,使膜系統(tǒng)變性,膜受到損傷和破壞[22],當質(zhì)膜的選擇透性因逆境傷害而明顯改變時,細胞內(nèi)大量電解質(zhì)滲透到膜外,致使組織浸泡液電導率升高,因此MDA含量和電導率是反映氧化損害程度強弱的兩個重要指標[23]。本試驗結(jié)果表明,鹽脅迫下玉米幼苗葉片MDA含量和相對電導率顯著升高,生物膜受到傷害,這與前人研究結(jié)果相符[24-25],施加DCPTA降低鹽脅迫下葉片MDA含量和相對電導率,‘豐禾1號’降低幅度大于‘先玉335’,表明DCPTA減輕玉米幼苗葉片細胞質(zhì)膜過氧化程度,維持質(zhì)膜選擇透性,說明DCPTA提高植物抗鹽脅迫能力與其對質(zhì)膜的保護作用有關(guān),對耐鹽性差品種作用效果更明顯。對照條件下施加DCPTA,葉片MDA含量和相對電導率含量降低,與顧萬榮等研究結(jié)果一致[8]。
鹽脅迫下,玉米幼苗生長受到抑制,葉片相對含水量下降,膜質(zhì)過氧化加劇,膜透性增大。外源DCPTA有效促進鹽脅迫下不同耐鹽性玉米品種幼苗生長,提高幼苗滲透調(diào)節(jié)能力,使葉片相對含水量保持在較高水平,降低MDA和相對電導率,減輕鹽脅迫對細胞膜傷害,說明DCPTA能誘導玉米耐鹽性提高,緩解鹽脅迫對幼苗傷害。DCPTA對提高鹽敏感型玉米品種耐鹽性效果更好。
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Effect of DCPTA on the physiological and biochemical characteristics of osmotic adjustment in maize seedling leaves under salt stress/WEI
Shi1,2,ZHANG He1,GU Wanrong1,2,LI Jing1,2,LI Gailing1,JIAO Jian1,CAO Xinbo1,YANG Kepan1
(1. School of Agriculture,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China;2.The Observation Experiment Station of the Ministry of Agriculture for Crop Cultivation Science in Northeast Area,Harbin 150030,China)
In order to make clear the physiological and biochemical mechanisms of DCPTA on salt resistant capability of maize seedlings,hydroponic experiments were performed with two different salt tolerance varieties‘Xianyu 335’and‘Fenghe No.1’to investigate the effects of 15 mg·L-1DCPTA on biomass,relative water content,osmotic adjustment and cell membrane stability of maize seedings under 150 mmol·L-1NaCl stress.The results showed that,DCPTA significantly increased fresh weight,dry weight and plant height of maize seedlings and alleviated growth inhibition under the condition of salt stress. DCPTA treatment under salt stress led to a increase in soluble sugar and soluble protein content,a decrease in proline content and an improvement in relative water content of maize leaves.The MDA content and relative conductivity of‘Xianyu 335’under DCPTA application were 26.4%and 26.0%lower than those under salt treatment,respectively,‘Fenghe No.1’were 31.3%and 33.5%lower,respectively.ExogenousDCPTA alleviated the salt stress damage to maize seedlings by enhancing the osmotic adjustment ability, maintaining the water balance and protecting cell membrane structure and function of seedling leaves. DCPTA has a better effect on salt-sensitive maize variety.
DCPTA;salt stress;plant growth regulator;maize;osmotic adjustment
S513
A
1005-9369(2015)09-0001-08
時間2015-9-23 9:38:09[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20150923.0938.010.html
魏湜,張翯,顧萬榮,等.DCPTA對鹽脅迫下玉米葉片滲透調(diào)節(jié)生理生化特征影響[J].東北農(nóng)業(yè)大學學報,2015,46(9):1-8.
Wei Shi,Zhang He,Gu Wanrong,et al.Effect of DCPTA on the physiological and biochemical characteristics of osmotic adjustment in maize seedling leaves under salt stress[J].Journal of Northeast Agricultural University,2015,46(9):1-8.(in Chinese with English abstract)
2015-05-17
“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國家科技支撐計劃課題(2011BAD16B11);黑龍江省科技攻關(guān)項目(GA12B101-02);2015哈爾濱市科技創(chuàng)新人才研究專項青年后備人才計劃(RC2015QN002083)
魏湜(1956-),男,教授,博士,博士生導師,研究方向為作物高產(chǎn)栽培生理生態(tài)。E-mail:weishi5608@163.com