丁金旺，周國(guó)明，王克義，葉柳青，周建松，樊 璠，于愛(ài)軍

(1.杭州市第一人民醫(yī)院，浙江 杭州310006；2.浙江省腫瘤醫(yī)院，浙江 杭州310022)

血清HE4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及臨床意義

丁金旺1，周國(guó)明2，王克義1，葉柳青2，周建松2，樊 璠2，于愛(ài)軍2

(1.杭州市第一人民醫(yī)院，浙江 杭州310006；2.浙江省腫瘤醫(yī)院，浙江 杭州310022)

目的 探討血清人附睪蛋白4(HE4)在子宮內(nèi)膜癌患者中的表達(dá)情況以及與臨床特點(diǎn)和病理學(xué)特征的關(guān)系。方法 采用ELISA法檢測(cè)并比較266例子宮內(nèi)膜癌患者、204例子宮良性疾病患者及100例健康女性血清中HE4的表達(dá)差異，分析血清HE4與子宮內(nèi)膜癌患者年齡、月經(jīng)狀態(tài)、病理學(xué)類型、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度、國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期以及療效的相關(guān)性。結(jié)果 研究組266例子宮內(nèi)膜癌患者血清HE4的表達(dá)水平為85.63(60.98～125.78)pmol/L，明顯高于正常對(duì)照組56.05(50.30～63.50)pmol/L(Z=-8.257，P<0.001)及對(duì)照組的59.52(50.11～71.09)pmol/L(Z=-8.865，P<0.001)；而在正常對(duì)照組與對(duì)照組之間，血清HE4的表達(dá)比較差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-1.458，P>0.05)。研究組中，血清HE4水平在不同患者年齡、月經(jīng)狀態(tài)、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度以及FIGO分期等方面比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z值分別為-3.849、-3.099、-5.279、-7.763、-5.704、-5.855，均P<0.01)；而在腫瘤的組織病理學(xué)類型方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=5.086，P>0.05)。有198例子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前的血清HE4水平為87.24(62.65～129.95)pmol/L，顯著高于術(shù)后血清HE4水平65.38(51.58～82.01)pmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-7.833，P<0.001)。結(jié)論 血清HE4水平在子宮內(nèi)膜癌患者中高表達(dá)，且與年齡、月經(jīng)狀態(tài)、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度、FIGO分期及療效相關(guān)，提示血清HE4可以作為子宮內(nèi)膜癌臨床診斷、療效評(píng)價(jià)、預(yù)后判斷及隨訪監(jiān)測(cè)的分子標(biāo)記物。

子宮內(nèi)膜癌；血清；人附睪蛋白4；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；分子標(biāo)記物

子宮內(nèi)膜癌是女性三大生殖器官惡性腫瘤之一，在歐美的發(fā)病率占婦科惡性腫瘤的第1位[1]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率也明顯上升，并呈年輕化趨勢(shì)，有些地區(qū)已超過(guò)宮頸癌而躍居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤首位。早期子宮內(nèi)膜癌雖然預(yù)后較好，但一直缺乏有效的早期篩查及后期監(jiān)測(cè)的腫瘤指標(biāo)。人附睪蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)是近年發(fā)現(xiàn)的一種新型分子標(biāo)志物，在正常組織及良性病變中不表達(dá)或低表達(dá)，但在婦科惡性腫瘤(如卵巢癌)中呈明顯高表達(dá)，目前血清HE4已被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)廣泛應(yīng)用于卵巢癌的早期篩查及鑒別診斷[2-4]。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌患者也存在HE4高表達(dá)，并且可能與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)系[5-10]。本文采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)并比較266例子宮內(nèi)膜癌、204例子宮良性疾病患者及100例健康女性血清中HE4的表達(dá)水平，并分析HE4與子宮內(nèi)膜癌臨床特點(diǎn)和病理學(xué)特征的關(guān)系，以進(jìn)一步探究血清HE4在子宮內(nèi)膜癌中的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年1月至2013年5月在浙江省腫瘤醫(yī)院住院并經(jīng)組織病理證實(shí)的266例子宮內(nèi)膜癌患者為研究組，年齡15～78歲，平均年齡(51.42±8.44)歲，絕經(jīng)者占53%(141/266)。按照2009年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)大會(huì)臨床分期標(biāo)準(zhǔn)將患者分為：Ⅰ期174例，Ⅱ期32例，Ⅲ期42例，復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移(Ⅳ期)18例。組織學(xué)類型包括：子宮內(nèi)膜樣腺癌190例，子宮內(nèi)膜樣腺癌伴鱗化46例，惡性苗勒混合瘤12例，漿液性腺癌9例，透明細(xì)胞癌9例。選擇同期子宮良性疾病患者204例作為對(duì)照組，年齡22～75歲，平均年齡(49.29±7.29)歲，絕經(jīng)者占49%(100/204)；其中包括：子宮平滑肌瘤120例，子宮腺肌癥54例，子宮內(nèi)膜息肉17例，子宮內(nèi)膜不典型增生13例。選取100例健康女性作為正常對(duì)照組，年齡22～76歲，平均年齡(49.15±14.35)歲，絕經(jīng)者占50%(50/100)。所有入選者均己排除子宮之外其他器官腫瘤病史。所有研究?jī)?nèi)容均獲得患者本人或者知情照料者同意。

1.2 方法

1.2.1 血清標(biāo)本的收集與保存

采集患者首次治療(手術(shù)或化療)前空腹靜脈血4mL于血清分離管內(nèi)，室溫靜置1h完全凝固，3 000rpm離心15min后分離血清，置于-70℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 血清人附睪蛋白4的檢測(cè)試劑與方法

采用ELISA檢測(cè)血清HE4含量，檢測(cè)試劑盒由瑞典康乃格診斷公司(Fujirebio Diagnostics，Inc.，Goteborg, Sweden)提供，濃度單位pmo/L。采用美國(guó)伯樂(lè)公司CODA酶標(biāo)分析儀比色。本研究采取盲法、復(fù)孔檢測(cè)，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。因研究數(shù)據(jù)均呈偏態(tài)分布，故采用中位數(shù)及四分位數(shù)描述，組間兩兩比較進(jìn)行Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，3組間比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman檢驗(yàn)，手術(shù)前后血清HE4的變化采用配對(duì)樣本的Wilcoxon檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清人附睪蛋白4在各組人群中的表達(dá)差異

經(jīng)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，研究組266例子宮內(nèi)膜癌患者血清HE4的表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組(Z=-8.257，P<0.001)及對(duì)照組(Z=-8.865，P<0.001)；而在正常對(duì)照組與對(duì)照組之間血清HE4的表達(dá)差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-1.458，P=0.145>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 子宮良、惡性疾病患者及健康女性血清HE4表達(dá)水平的比較

Table 1 Comparison of serum HE4 levels among different groups

組別例數(shù)(n)HE4(pmol/L)中位數(shù)(范圍)研究組26685.63(60.98～125.78)對(duì)照組20459.52(50.11～71.09)正常對(duì)照組10056.05(50.30～63.50)

2.2 血清人附睪蛋白4表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的相關(guān)性

血清HE4水平在年齡≤60歲者與>60歲者、絕經(jīng)前與絕經(jīng)后的子宮內(nèi)膜癌患者中差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z值分別為-3.849、-3.099，均P<0.01)；但子宮內(nèi)膜癌患者血清HE4表達(dá)水平在各種病理學(xué)類型之間差異未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=5.086，P>0.05)。與組織學(xué)G1～G2級(jí)患者相比，組織學(xué)G3級(jí)的子宮內(nèi)膜癌患者血清HE4含量顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-5.279，P<0.01)。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及深肌層浸潤(rùn)(>1/2肌層)者血清HE4水平顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不伴有深肌層浸潤(rùn)(≤1/2肌層)者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z值分別為-5.704、-7.763，均P<0.01)。Ⅲ～Ⅳ期患者血清HE4表達(dá)水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-5.855，P<0.01)。Spearman相關(guān)分析顯示，血清HE4表達(dá)水平與FIGO分期顯著相關(guān)(r=0.498，P=0.000)。以上結(jié)果表明，子宮內(nèi)膜癌患者血清HE4水平與年齡、月經(jīng)、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層侵潤(rùn)深度及FIGO分期密切相關(guān)，但與病理類型無(wú)關(guān)，見(jiàn)表2。

表2 血清HE4的表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌臨床特點(diǎn)和病理學(xué)特征的關(guān)系

Table 2 Correlation between serum HE4 level and clinicopathological characteristics in endometrial carcinoma

注：(1)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)；(2)Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)。

2.3 血清人附睪蛋白4表達(dá)水平在子宮內(nèi)膜癌手術(shù)前后的變化情況

本組研究266例子宮內(nèi)膜癌患者中有198例同時(shí)檢測(cè)了手術(shù)前、后血清HE4的表達(dá)水平，經(jīng)配對(duì)樣本的Wilcoxon非參數(shù)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后血清HE4水平[65.38(51.58～82.01)pmol/L]顯著低于術(shù)前水平[87.24(62.65～129.95)pmol/L]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-5.846，P=0.000)，見(jiàn)表3。

表3 198例子宮內(nèi)膜癌患者手術(shù)前后血清HE4表達(dá)水平變化

Table 3 Pre- and post-operative serum expression levels of HE4 in 198 endometrial cancer patients

注：(1)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。

3 討論

3.1 人附睪蛋白4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)分析

HE4屬于抑蛋白酶基因家族，定位于染色體20q12-13.1，編碼一種與精子成熟相關(guān)的小分子分泌蛋白[4]。HE4 cDNA最早是由Kirchhoff等于1991年從人的附睪上皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)其主要分布于包括附睪在內(nèi)的生殖系統(tǒng)上皮，如輸精管上皮、輸卵管上皮和子宮內(nèi)膜等組織[5]。研究顯示，HE4在多種惡性腫瘤，如漿液性卵巢癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌等組織中高表達(dá)。大量研究表明，HE4在識(shí)別卵巢癌的早期階段具有很高的靈敏度和特異度，因此國(guó)外許多國(guó)家已將HE4作為卵巢癌早期篩查的最佳指標(biāo)[2-4]。Bignotti等[5]研究結(jié)果證實(shí)，子宮內(nèi)膜癌組織中同樣也存在HE4基因擴(kuò)增和蛋白高表達(dá)，隨后的研究還顯示子宮內(nèi)膜癌患者血清HE4水平明顯升高，并且發(fā)現(xiàn)在相同的特異度下，血清HE4較CA125具有更高的敏感性。本研究采用ELISA法檢測(cè)266例子宮內(nèi)膜癌患者、204例子宮良性疾病患者及100例健康女性血清中的HE4水平，結(jié)果表明子宮內(nèi)膜癌患者血清HE4含量顯著高于對(duì)照組和正常對(duì)照組(均P=0.000)，與國(guó)外研究類似[4，6]。因此推測(cè)HE4與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病相關(guān)，這也提示HE4有望成為子宮內(nèi)膜癌的血清標(biāo)志物。

3.2 血清人附睪蛋白4與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系

本研究中發(fā)現(xiàn)，血清HE4水平在年齡>60歲及絕經(jīng)后的子宮內(nèi)膜癌患者中顯著高于年齡≤60歲及未絕經(jīng)者(P<0.01)，并且在不同子宮內(nèi)膜癌患者組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度以及FIGO分期等方面比較，血清HE4差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)，與Antonsen等[7]及Bignotti等[5]研究結(jié)論一致。經(jīng)Spearman相關(guān)分析顯示，血清HE4表達(dá)水平與FIGO分期顯著相關(guān)(r=0.498，P=0.000)，這提示血清HE4表達(dá)水平能預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者的分期狀況。另外，本研究顯示子宮內(nèi)膜癌患者血清HE4表達(dá)水平在各種病理學(xué)類型之間差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，這表明子宮內(nèi)膜癌患者高水平HE4與患者高齡、絕經(jīng)、分化程度低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深肌層浸潤(rùn)以及FIGO分期晚等臨床病理特征密切相關(guān)，而與組織病理無(wú)關(guān)。最新的兩項(xiàng)研究通過(guò)多因素分析發(fā)現(xiàn)，高水平的血清HE4是子宮內(nèi)膜癌患者較低的總生存、無(wú)瘤生存以及腫瘤無(wú)進(jìn)展生存等不良預(yù)后的獨(dú)立因素[8-9]。Li等[10]最近利用轉(zhuǎn)染及克隆技術(shù)已經(jīng)在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系及移植瘤小鼠模型中證實(shí)了高水平表達(dá)的HE4不僅介導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌的形成，而且直接促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、基質(zhì)(肌層)浸潤(rùn)及疾病進(jìn)展。在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移監(jiān)測(cè)方面，有研究也表明，在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者中血清HE4比CA125提前5～8個(gè)月出現(xiàn)異常表達(dá)，HE4可作為很好地預(yù)測(cè)卵巢癌復(fù)發(fā)的指標(biāo)[11]。Saarelainen等[12]研究發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測(cè)血清HE4和CA125對(duì)轉(zhuǎn)移性子宮內(nèi)膜癌診斷的敏感性、特異性分別達(dá)71.4%和89.5%。因此推斷，血清HE4表達(dá)水平不僅可以反映疾病的進(jìn)展情況，還可以作為子宮內(nèi)膜癌預(yù)后判斷及隨訪監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)之一。

3.3 血清人附睪蛋白4對(duì)子宮內(nèi)膜癌手術(shù)療效評(píng)估的價(jià)值

有研究證實(shí)，HE4水平在子宮內(nèi)膜癌治療后可明顯降低[13]。本研究結(jié)果提示，198例子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后血清HE4水平為65.38(51.58～82.01)pmol/L，顯著低于術(shù)前水平的87.24(62.65～129.95)pmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)，支持以往研究的結(jié)論，提示血清HE4水平亦有助于判斷手術(shù)效果及檢測(cè)病情是否進(jìn)展。

總之，通過(guò)本次研究認(rèn)為，血清HE4的檢測(cè)對(duì)子宮內(nèi)膜癌的早期診斷、療效評(píng)估、預(yù)后判斷以及隨訪監(jiān)測(cè)方面具有一定的價(jià)值，血清HE4可作為子宮內(nèi)膜癌的腫瘤標(biāo)志物。

[1]Siegel R, Naishadham D, Jemal A.Cancer statistics, 2013[J].CA Cancer J Clin,2013,63(1):11-30.

[2]宋曉翠,滕洪濤,張建海,等.聯(lián)合檢測(cè)血清HE4和CA125在卵巢癌早期診斷及病情監(jiān)測(cè)中的價(jià)值[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(14):2380-2382.

[3]史文靜,韓西群,徐曉明,等.血清人附睪蛋白4在卵巢癌診斷中的作用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(5):759-761.

[4]Simmons A R, Baggerly K, Bast R C Jr.The emerging role of HE4 in the evaluation of epithelial ovarian and endometrial carcinomas[J].Oncology (Williston Park),2013,27(6):548-556.

[5]Bignotti E, Ragnoli M, Zanotti L,etal.Diagnostic and prognostic impact of serum HE4 detection in endometrial carcinoma patients[J].Br J Cancer,2011,104(9):1418-1425.

[6]Omer B, Genc S, Takmaz O,etal.The diagnostic role of human epididymis protein 4 and serum amyloid-A in early-stage endometrial cancer patients[J].Tumour Biol,2013,34(5):2645-2650.

[7]Antonsen S L, H gdall E, Christensen I J,etal.HE4 and CA125 levels in the preoperative assessment of endometrial cancer patients:A prospective multicenter study (ENDOMET)[J].Acta Obstet Gynecol Scand,2013,92(11):1313-1322.

[8]Zanotti L, Bignotti E, Calza S,etal.Human epididymis protein 4 as a serum marker for diagnosis of endometrial carcinoma and prediction of clinical outcome[J].Clin Chem Lab Med,2012,50(12):2189-2198.

[9]Mutz-Dehbalaie I, Egle D, Fessler S,etal.HE4 is an independent prognostic marker in endometrial cancer patients[J].Gynecol Oncol,2012,126(2):186-191.

[10]Li J, Chen H, Mariani A,etal.HE4 (WFDC2) Promotes Tumor Growth in Endometrial Cancer Cell Lines[J].Int J Mol Sci,2013,14(3):6026-6043.

[11]Lamy P J, Roques S, Viglianti C,etal.HE4, a novel marker for epithelial ovarian cancer:Evaluation of analytical performances[J].Ann Biol Clin (Paris),2010,68(3):325-329.

[12]Saarelainen S K, Peltonen N, Lehtim?ki T,etal.Predictive value of serum human epididymis protein 4 and cancer antigen 125 concentrations in endometrial carcinoma[J].Am J Obstet Gynecol,2013,209(2):142.e1-e6.

[13]湯希凡,秦辛玲,藍(lán)蘭,等.人附睪蛋白4在子宮內(nèi)膜癌診斷中的臨床價(jià)值[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(11):1440-1441.

[專業(yè)責(zé)任編輯：張欣文]

Expression of serum HE4 in endometrial carcinoma and its clinic significance

DING Jin-wang1, ZHOU Guo-ming2, WANG Ke-yi1, YE Liu-qing2, ZHOU Jian-song2, FAN Fan2, YU Ai-jun2

(1.HangzhouFirstPeople’sHospital,ZhejiangHangzhou310006,China; 2.ZhejiangCancerHospital,ZhejiangHangzhou310022,China)

Objective To investigate the expression of serum human epididymis protein 4 (HE4) in endometrial cancer patients and its relationship with clinical and pathological characteristics. Methods The serum HE4 levels were detected by Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and compared among 100 healthy women, 204 patients with benign uterus diseases of uterus and 266 patients with histologically confirmed endometrial carcinoma. The correlation between expression of serum HE4 and clinicpathological characteristics (age, menstruation status, histopathology, tumor grade, lymph node metastasis, depth of myometrial invasion, FIGO stage) and therapeutic effect was also evaluated. Results The concentration of serum HE4 was 85.63 (60.98-125.78)pmol/L in patients with endometrial cancer, which was significantly higher than that in healthy women[56.05 (50.30-63.50)pmol/L,Z=-8.257,P<0.001] and benign lesion group[59.52 (50.11-71.09)pmol/L,Z=-8.865,P<0.001], but the difference was not significant between healthy group and benign lesion group (Z=-1.458,P>0.05). In endometrial cancer group, the expression of serum HE4 was not associated with the type of histopathology (Z=5.086,P>0.05), but it was positively correlated with age, menstruation status, tumor grade, lymph node metastasis, depth of myometrial invasion and FIGO stage (Zvalue was -3.849, -3.099, -5.279, -7.763, -5.704 and -5.855, respectively, allP<0.01). Furthermore, the postoperative level of serum HE4 [65.38 (51.58-82.01)] in 198 cases of endometrial cancer was significantly lower than preoperative level [87.24 (62.65-129.95)] (Z=-7.833,P<0.001). Conclusion The serum HE4 is over-expressed in endometrial carcinoma, and its concentration significantly correlates with age, menstruation status, histological grade, lymph node metastasis, depth of myometrial invasion, FIGO stage and treatment effect, which indicates that serum HE4 may serve as a biomarker for endometrial carcinoma and has significant application in diagnosis, therapeutic evaluation, prognostic prediction and postoperative surveillance.

endometrial carcinoma；serum；human epididymis protein 4 (HE4)；enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)；biomarker

2014-09-30

丁金旺(1983-)，男，主治醫(yī)師，腫瘤學(xué)碩士，主要從事常見(jiàn)腫瘤的早期診斷與治療工作。

于愛(ài)軍，主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.03.024

R711

A

1673-5293(2015)03-0471-03