劉源，任靜，賴可，陶靜，李佳，尹罡，李楠

(成都大學(xué)四川抗菌素工業(yè)研究所，成都 610052)

格列美脲片處方工藝篩選及溶出度評價

劉源，任靜，賴可，陶靜，李佳，尹罡，李楠

(成都大學(xué)四川抗菌素工業(yè)研究所，成都 610052)

目的 以溶出度為指標(biāo)，篩選格列美脲片處方和制備工藝。方法 以國外原研片為參比制劑，采用f2相似因子法進行溶出曲線的相似度評價。結(jié)果 在不同pH的溶出介質(zhì)中，自制片溶出曲線優(yōu)于其他國產(chǎn)上市片的溶出曲線，與原研片比較，f2相似因子均>50。自制片和原研片在不同pH的溶出介質(zhì)中體外溶出行為相似。結(jié)論 不同廠家生產(chǎn)的格列美脲片采用f2相似因子法進行溶出曲線的相似度評價，結(jié)果差異較大，顯示現(xiàn)有藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已達(dá)不到質(zhì)量控制的要求。

格列美脲；處方工藝；溶出曲線；f2相似因子

格列美脲片是磺脲類口服降糖藥，因為其降糖作用平穩(wěn)有效，且不良反應(yīng)少，臨床應(yīng)用日益廣泛。由于格列美脲的低溶解性和低滲透性，要達(dá)到良好的治療效果，對制劑工藝具有一定的要求。目前，國家食品藥品監(jiān)督管理總局正逐步開展藥品一致性評價，特別對于口服仿制藥要求嚴(yán)格以原研藥為對照，溶出度為核心考察指標(biāo)，目的是解決國內(nèi)眾多仿制藥質(zhì)量參差不齊的問題。由于各廠家處方工藝不同，其溶出行為也各有差異，直接影響到藥物療效。因此有必要對格列美脲片的處方工藝和溶出度評價作更深入的研究。筆者采用了比現(xiàn)有藥品標(biāo)準(zhǔn)更加科學(xué)的不同pH溶出介質(zhì)條件下，溶出曲線的f2相似因子判定法，對本制劑工藝制備的格列美脲片、國產(chǎn)市售片與原研片劑的溶出行為進行比較。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 TDP單沖壓片機(上海第一制藥機械廠)，ZRS-8G智能溶出實驗儀(天津大學(xué)無線電廠)，PM/100行星式球磨儀(弗爾德萊馳有限公司)，Horiba激光粒度分析儀LA-300(上海映格機電設(shè)備有限公司)，LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津)，LCsolution工作站(日本島津)。AE200電子天平(瑞士Mettler公司，感量：0.000 1 g)。

1.2 試藥 格列美脲片(北京安萬特制藥有限公司，商品名：亞莫利，規(guī)格：2 mg，批號：B2073)，格列美脲片 (自制片，規(guī)格：2 mg，批號：20120801，20120802)，格列美脲片(國內(nèi)廠家A生產(chǎn)， 規(guī)格：2 mg，批號：1206411)，格列美脲片(國內(nèi)廠家B生產(chǎn)， 規(guī)格：2 mg，批號：1202603)，格列美脲對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100674-201102，含量：99.5%)，微晶纖維素(日本旭化成有限公司，批號：k335)，乳糖(美劑樂公司，批號：0410-A4921)，硬脂酸鎂(上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司，批號：201104409)，甲醇(Fisher公司，色譜純，批號：710001140216)，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 格列美脲片處方工藝

2.1.1 格列美脲原料藥的微粉化 采取球磨粉碎的方法將原料藥進行微粉化，格列美脲原料藥經(jīng)過PM/100行星式球磨儀粉碎后粒徑由原有的D50為20.2 μm轉(zhuǎn)變?yōu)镈50為2.7 μm。

2.1.2 格列美脲片輔料的篩選及制備工藝 根據(jù)國外原研片的產(chǎn)品說明書，篩選乳糖、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮為輔料制備格列美脲片，參考《藥用輔料手冊》[1]及格列美脲片制備工藝改進[2]確定處方為：格列美脲2 g，乳糖69 g，微晶纖維素8.5 g，羧甲基淀粉鈉5 g，硬脂酸鎂0.5 g，共制1 000片。制備工藝為：分別將處方量的乳糖、微晶纖維素過篩孔內(nèi)徑0.180 mm篩，以等量遞增法與格列美脲混合均勻，加入適量2%聚乙烯吡咯烷酮(K30)水溶液作為粘合劑，攪拌均勻，制成適宜軟材。再將軟材過篩孔內(nèi)徑0.850 mm篩制粒，顆粒于40 ℃干燥1 h，再過20目篩整粒。在干顆粒中加入羧甲基淀粉鈉和硬脂酸鎂，混合均勻后壓片即得成品。通過檢測，處方所制的顆粒均流動性良好，可壓性好，壓制出的成片外觀光潔，硬度保持在約5.4 kg，含量均勻度均符合要求。

2.2 溶出度評價

2.2.1 測定方法學(xué)驗證

2.2.1.1 格列美脲特征圖譜及輔料干擾實驗 稱取處方量的空白輔料以甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氫銨溶液(70：30)為溶劑超聲溶解并濾過作為陰性對照溶液；稱取格列美脲對照品10.1 mg，加30 mL乙醇溶解，以流動相稀釋制成每毫升含格列美脲約2 μg的溶液作為陽性對照溶液；另取自制片，分別以pH1.2鹽酸、pH4.0醋酸緩沖溶液、pH6.8磷酸緩沖溶液和水超聲溶解后過濾并稀釋制成每毫升含格列美脲約2 μg的溶液。分別取上述溶液100 μL注入液相色譜儀進樣分析，實驗結(jié)果表明，空白輔料對本品溶出度的測定均無干擾。見圖1。

2.2.1.2 濾膜吸附 本品的原料藥經(jīng)微粉化處理后，平均粒徑較小，且由于本品主藥含量較低，濾膜的吸附可能會對本品的測定造成一定的影響，故為考察此種影響，取在各介質(zhì)中達(dá)到溶出平臺的本品溶出液15 mL，分別采用以純化水浸泡24 h的濾膜、沸水煮2 h的濾膜對本品在各介質(zhì)中的溶出液進行過濾，并以高速離心處理的同介質(zhì)上清液中格列美脲的含量作100%，考察濾膜對本品的吸附性。結(jié)果見表1。

A.陰性對照品；B.陽性對照品；C.pH1.2鹽酸溶液；D.pH4.0醋酸緩沖溶液；E.pH6.8磷酸緩沖溶液；F.水；1.格列美脲

圖1 陰性對照品、陽性對照品、格列美脲片在4種介質(zhì)中HPLC圖

表1 濾膜吸附性考察結(jié)果 %

實驗結(jié)果表明，濾膜的預(yù)處理方法對本品的吸附有一定的影響，沸水煮2 h的濾膜與僅用純化水浸泡處理的濾膜相比對本品的吸附影響較小，當(dāng)棄去5 mL以上初濾液時，經(jīng)沸水煮2 h預(yù)處理的濾膜對本品吸附影響較小，但相比離心處理，仍存在一定的誤差，因此，最終采用高速離心作為本品溶出液的處理方法。

2.2.1.3 線性關(guān)系考察 取格列美脲對照品10.1 mg精密稱定，加30 mL乙醇溶解，加流動相溶解并稀釋制成每毫升含格列美脲10 μg的溶液作為對照品儲備液，分別吸取對照品儲備液適量，加流動相稀釋制成每毫升含格列美脲3，2，1，0.5，0.2 μg的溶液，分別取上述溶液100 μL注入液相色譜儀進樣分析，以濃度為橫坐標(biāo)，格列美脲峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算回歸方程Y=141 118X+3 720.1，r=0.999 9。實驗結(jié)果表明，本品在0.210 4～3.156 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，格列美脲峰面積與濃度具有良好的線性關(guān)系，可滿足本品溶出度測定的要求。

2.2.1.4 回收率實驗 分別取格列美脲對照品19.9 mg精密稱定置于100 mL量瓶，加乙醇溶解并定容制成格列美脲對照品儲備液，分別按溶出度的20%，50%，80%，100%量取格列美脲對照品儲備液2，5，8，10 mL置于各溶出杯中，分別精密加入4種溶出介質(zhì)900 mL，加入按處方量稱取的空白輔料。啟動溶出儀，依法操作，每個濃度各取3份，分別作為供試品溶液。取各供試品溶液高速離心，取上清液100 μL注入液相色譜儀進樣分析，以外標(biāo)法計算本品在4種介質(zhì)中的回收率。結(jié)果見表2。

表2 4種濃度格列美脲在4種介質(zhì)中回收率測定結(jié)果 %

實驗結(jié)果表明，本品在不同介質(zhì)中的回收率為99.0%～101.0%，RSD均<1%，可滿足本品在不同介質(zhì)中溶出度測定的要求。

3.2.5 精密度實驗

3.2.5.1 重復(fù)性實驗 取本品，以各溶出介質(zhì)900 mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，于規(guī)定的各時間點取溶出液，高速離心，取上清液作為供試品溶液。取供試品溶液100 μL，入液相色譜儀進樣分析，以外標(biāo)法計算本品在4種介質(zhì)中的溶出度，并計算重復(fù)性，結(jié)果見表3。

表3 重復(fù)性實驗結(jié)果溶出度 %

實驗結(jié)果表明，分別在不同介質(zhì)中測定本品的溶出度，RSD<2.0%，重復(fù)性較好，可滿足本品溶出度測定的要求。

3.2.5.2 中間精密度實驗 取本品，由不同的實驗人員在不同的日期、不同儀器上分別以4種介質(zhì)測定本品的溶出度，并將測定結(jié)果與重復(fù)性實驗結(jié)果進行比較，考察本品溶出度測定的中間精密度，結(jié)果見表4。

表4 中間精密度實驗結(jié)果(相對含量) %

實驗結(jié)果表明，由不同的實驗人員在不同的日期、不同的儀器上測定本品的溶出度，各個溶出介質(zhì)的溶出度RSD均<2.0%，中間精密度良好，可滿足本品在不同溶出介質(zhì)中溶出度測定的要求。

3.2.6 溶液穩(wěn)定性 取本品20片，研細(xì)，精密稱取85 mg(相當(dāng)于格列美脲2 mg)，分別加pH1.2鹽酸溶液、pH4.0醋酸緩沖溶液、pH6.8磷酸緩沖溶液和水超聲溶解，分別取上述溶液離心，取上清液并稀釋制成每毫升含格列美脲約2 μg的溶液，置室溫下，分別于0，0.5，1，2，3，4，6，8 h取高速離心上清液100 μL注入液相色譜儀進樣分析，以0 h格列美脲峰面積為100%，以本品在8 h內(nèi)的相對含量計算本品在各介質(zhì)中的穩(wěn)定性，結(jié)果見表5。

實驗結(jié)果表明，本品在各介質(zhì)中室溫放置8 h含量有緩慢下降的趨勢，在4 h內(nèi)含量下降不明顯，故取樣后應(yīng)在4 h內(nèi)測定。

3.2.7 溶出度測定方法與溶出曲線 參考藥品評審中心公布的《普通口服固體制劑溶出度實驗技術(shù)指導(dǎo)原則(初稿)》，選取pH1.2鹽酸溶液、pH4.0醋酸緩沖溶液、pH6.8磷酸緩沖溶液和水作為溶出介質(zhì)，照《中華人民共和國藥典》2010年版溶出度測定法第二法(槳板法)， 以各溶出介質(zhì)900 mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，于規(guī)定的各時間點取溶出液5 mL(并即補充同溫同體積的相應(yīng)溶出介質(zhì))，高速離心(4 000 r·min-1)5 min，取上清液作為供試品溶液。另精密稱取格列美脲對照品20 mg，置100 mL量瓶，加乙醇適量，超聲溶解，再加乙醇定容，搖勻。精密量取1 mL，置200 mL量瓶，用相應(yīng)溶出介質(zhì)定容，作為對照品溶液。高效液相色譜法測定，甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氫銨溶液(70：30)為流動相，檢測波長228 nm，進樣量100 μL，按外標(biāo)法以峰面積計算每片溶出量，繪制溶出曲線。結(jié)果見圖2～5。

表5 溶液穩(wěn)定性實驗結(jié)果 %

圖2 自制制劑與參比制劑在pH1.2鹽酸中的溶出曲線

圖3 自制制劑與參比制劑在pH4.0醋酸緩沖液中的溶出曲線

圖4 自制制劑與參比制劑在pH6.8醋酸緩沖液中的溶出曲線

圖5 自制制劑與參比制劑在水中的溶出曲線

3 討論

格列美脲難溶于水，其溶出困難?，F(xiàn)國內(nèi)上市很多廠家采取多次過篩、加入表面活性劑增溶、固體分散體等技術(shù)均只能勉強符合現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)要求，很難達(dá)到原研產(chǎn)品的溶出結(jié)果。藥物微粉化技術(shù)是指通過機械研磨、超臨界流體過程、低溫噴淋等手段降低藥物的粒徑，改善顆粒的潤濕性,進而提高其溶解度和溶解速率。實驗研究表明，羅紅霉素、比卡魯銨等難溶性藥物，在對原料藥采用微粉化處理后制備的制劑，相比未經(jīng)微粉化處理的制劑，溶出度和溶出速率均有很大提高[3-4]。本實驗采取微粉化工藝，微粉化后的原料藥具有更小的粒徑，增大其比表面積，不僅減少壓片工藝的復(fù)雜性，而且大大提高了制劑的溶出度。

喬德水等[5]對不同廠家格列美脲片進行溶出度比較，發(fā)現(xiàn)按現(xiàn)有格列美脲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[6]，各廠的片劑溶出度指標(biāo)均合格，但對各廠的片劑采取溶出曲線f2相似因子法比較時，各廠片劑的溶出行為呈現(xiàn)出明顯差異。這種評價方法仍有不足，因為現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)采用0.02%三羥甲基氨基甲烷為溶出介質(zhì)，這種特殊溶出介質(zhì)無疑放寬了要求，75 r·min-1相比50 r·min-1也弱化對制劑溶出能力的區(qū)分。另外現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用的是小杯法，如使用不同溶出介質(zhì)進行選擇，相對于格列美脲這種難溶性藥物能否達(dá)到漏槽條件值得商榷。因此有必要采用更嚴(yán)格的4種不同溶出介質(zhì)的f2相似因子法[7]對自制片、國產(chǎn)片和原研片進行溶出度評價。

本實驗結(jié)果表明，現(xiàn)有的格列美脲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)至少在溶出度檢測方面達(dá)不到質(zhì)量控制要求。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修改和一致性再評價刻不容緩。

本實驗自制片和原研片在4種不同溶出介質(zhì)中溶出曲線f2相似因子均>50，體外溶出行為具有相似性，自制片和原研片體內(nèi)生物利用度是否等效還有待進一步考察；國產(chǎn)兩個廠家片劑與原研片在4種不同溶出介質(zhì)中溶出曲線f2相似因子均<50，體外溶出行為不具有相似性。且不同國產(chǎn)廠家生產(chǎn)的片劑之間體外溶出行為也有明顯差異，說明不同國產(chǎn)廠家生產(chǎn)的片劑彼此之間質(zhì)量也相差較大。

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[2] 羅小榮,靳祖英,付玉林,等.格列美脲片制備工藝改進[J].中國藥業(yè),2008,17(10)：47.

[3] 徐成,金春,秦勇,等.羅紅霉素微粉化分散片的制備與溶出度測定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報, 2010,29(8):1063-1064.

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[6] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].WS1-(X-045)-2004Z.

[7] 張啟明，謝沐風(fēng)，寧保明,等.采用多條溶出曲線評價口服固體制劑的內(nèi)在質(zhì)量[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40(12)：946-955.

DOI 10.3870/yydb.2015.03.031

2013-12-27

2014-02-10

劉源(1979-)，男，四川成都人，助理研究員，學(xué)士，主要從事藥物制劑研究。E-mail：6824867@qq.com。

李楠(1964-)，女，四川成都人，研究員，碩士，主要從事藥物分析研究。E-mail：512508622@qq.com。

R977.1；R927.2

B

1004-0781(2015)03-0399-04