郭美仙，劉光明，沈磊，李冬梅，趙健榮，楊靜

（1.武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，武漢430072；2.云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南大理671000；3.保山中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，云南保山678000）

云南松松塔不同極性部位對(duì)不同狀態(tài)豚鼠離體氣管的影響

郭美仙1，2，劉光明2，沈磊2，李冬梅2，趙健榮3，楊靜1*

（1.武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，武漢430072；2.云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南大理671000；3.保山中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，云南保山678000）

目的：觀察云南松松塔不同極性部位對(duì)不同狀態(tài)豚鼠離體氣管的解痙作用。方法：采用離體氣管法，觀察云南松松塔不同極性部位對(duì)靜息、乙酰膽堿（Ach）和組胺（His）致痙豚鼠離體氣管的影響。結(jié)果：云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位和氯仿部位可以降低靜息離體氣管的張力，明顯提高基礎(chǔ)解痙率；云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位、氯仿部位和乙酸乙酯部位可以降低Ach、His致痙的離體氣管張力，明顯提高致痙氣管的解痙率。結(jié)論：云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位和氯仿部位可提高不同狀態(tài)豚鼠離體氣管的解痙率，對(duì)靜息和致痙離體氣管平滑肌有松弛作用。

云南松松塔；離體氣管；解痙作用

哮喘是氣道慢性炎癥性疾病，這種慢性炎癥與氣道高反應(yīng)性相關(guān)，通常出現(xiàn)廣泛而多變的可逆性氣流受限。世界大部分地區(qū)哮喘患病率呈大幅上升趨勢(shì)，哮喘已成為最常見的慢性呼吸道疾病〔1〕。松科松屬植物約80余種，多產(chǎn)于北半球。我國(guó)產(chǎn)22種10變種，云南松主要分布于云南，資源十分豐富，松塔是其球果〔2〕?！侗静菥V目》記載了松塔具有祛痰、止咳、平喘、祛風(fēng)、潤(rùn)腸、安神等功效。陳績(jī)逕等〔3〕研究表明白皮松松塔具有平喘作用。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)云南松松塔中含有木質(zhì)素類和黃酮類物質(zhì)〔4-5〕，這類活性物質(zhì)對(duì)平滑肌具有松弛作用。國(guó)內(nèi)外尚未見云南松松塔平喘作用的研究報(bào)道，因此，本實(shí)驗(yàn)研究了云南松松塔不同極性部位對(duì)不同狀態(tài)豚鼠離體氣管的影響。

1 材料

1.1 動(dòng)物豚鼠，普通級(jí)，雌雄不限，體重250～300 g，常規(guī)飼養(yǎng)。由大理學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥品與試劑K-H營(yíng)養(yǎng)液〔6〕，氯化乙酰膽堿（Ach），上海三愛思試劑有限公司（批號(hào)：20061130）；磷酸組胺（His），上海如吉生物科技發(fā)展有限公司（批號(hào)：100703）；氨茶堿注射液，廣州白云山明興制藥有限公司（批號(hào)：130826）。

1.3 儀器BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)和HW-400S恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）；JH-2肌張力傳感器（航天工程醫(yī)學(xué)工程研究所）。

1.4 樣品由大理學(xué)院生藥學(xué)副教授周濃鑒定為云南松Pinus yunnanensis松塔。云南松松塔干燥粗粉10 kg，用95%乙醇冷浸提?。?4 h×3次），合并提取液，減壓濃縮回收溶劑。濃縮得到的乙醇浸膏加適量水混懸后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，各萃取極性部位減壓濃縮回收溶劑，得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水5個(gè)極性部位。冷凍干燥后備用。用1.0×102μL∕mL DMSO配制成4.8×10 mg∕mL混懸液。

2 方法

2.1 標(biāo)本制作用木棒擊斃豚鼠，立即分離并取出上至甲狀軟骨、下至氣管分叉處的氣管段，放入4℃飽和氧的K-H營(yíng)養(yǎng)液中，剔除氣管周圍結(jié)締組織，將其剪成2 cm×2 mm的螺旋條，并固定于張力換能器上，置于盛有19.5 mL K-H營(yíng)養(yǎng)液（37±0.5）℃的浴槽中，持續(xù)通入混合氣體（95%O2和5%CO2），調(diào)節(jié)基礎(chǔ)張力為1.9～2.0 g，穩(wěn)定60 min，每20 min換1次新鮮K-H營(yíng)養(yǎng)液〔6-7〕。

2.2 云南松松塔不同極性部位對(duì)靜息豚鼠離體氣管的影響實(shí)驗(yàn)分為8組，DMSO組、氨茶堿組（9.6 ×10-1mg∕mL）、乙醇浸膏組、石油醚部位組、氯仿部位組、乙酸乙酯部位組、正丁醇部位組和水部位組〔8〕。待標(biāo)本穩(wěn)定，加入0.5 mL His（終濃度1.5× 10-3mg∕mL），觀察氣管條有無(wú)收縮反應(yīng)，以此判斷標(biāo)本的基本功能。實(shí)驗(yàn)開始，記錄正常氣管條3 min內(nèi)的張力變化（平均張力作為給藥前張力），加入0.5 mL DMSO，記錄氣管條3 min內(nèi)的張力變化（平均張力作為給藥后張力），換液5次，讓曲線回復(fù)正常。同樣方法，依次分別加入氨茶堿及受試樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。用下述公式計(jì)算解痙百分率〔6-7〕。

解痙率=（給藥前張力－給藥后張力）∕給藥前張力×100%

2.3 云南松松塔不同極性部位對(duì)致痙豚鼠離體氣管的影響分組與標(biāo)本基本功能判斷同“2.2”。實(shí)驗(yàn)開始，曲線收縮正常后加入0.5 mL Ach或His（終濃度1.5×10-3mg∕mL）誘發(fā)收縮反應(yīng)，記錄氣管條3 min內(nèi)的張力變化（平均張力作為給藥前張力），加入0.5 mL DMSO，記錄氣管條3 min內(nèi)的張力變化（平均張力作為給藥后張力）。同樣方法，依次分別加入氨茶堿及受試樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。用上述公式計(jì)算解痙百分率〔6-7〕。

2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，組內(nèi)均數(shù)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間均數(shù)比較采用Student'st檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 云南松松塔不同極性部位對(duì)靜息豚鼠離體氣管的影響與給藥前比較，乙醇浸膏組、石油醚部位組和氯仿部位組的給藥后張力明顯降低（P＜0.01，P＜0.05）；與DMSO組比較，乙醇浸膏組、石油醚部位組和氯仿部位組的解痙率明顯升高（P＜0.01，P＜0.05），說(shuō)明云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位和氯仿部位對(duì)靜息離體氣管有舒張作用。見表1。

3.2 云南松松塔不同極性部位對(duì)Ach致痙豚鼠離體氣管的影響與給藥前比較，乙醇浸膏組、石油醚部位組、氯仿部位組和乙酸乙酯部位組的給藥后張力明顯降低（P＜0.01，P＜0.05）；與DMSO組比較，乙醇浸膏組、石油醚部位組、氯仿部位組和乙酸乙酯部位組的解痙率明顯升高（P＜0.01，P＜0.05），說(shuō)明云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位、氯仿部位和乙酸乙酯部位對(duì)Ach致痙的離體氣管有解痙作用。見表2。

表1 云南松松塔不同極性部位對(duì)靜息豚鼠離體氣管的影響

表1 云南松松塔不同極性部位對(duì)靜息豚鼠離體氣管的影響

注：與給藥前比較，a）P＜0.05，b）P＜0.01；與DMSO組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與氨茶堿組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01。

表2 云南松松塔不同極性部位對(duì)Ach致痙豚鼠離體氣管的影響

表2 云南松松塔不同極性部位對(duì)Ach致痙豚鼠離體氣管的影響

注：與給藥前比較，a）P＜0.05，b）P＜0.01；與DMSO組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與氨茶堿組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01。

3.3 云南松松塔不同極性部位對(duì)His致痙豚鼠離體氣管的影響與給藥前比較，乙醇浸膏組、石油醚部位組、氯仿部位組和乙酸乙酯部位組的給藥后張力明顯降低（P＜0.01）；與DMSO組比較，乙醇浸膏組、石油醚部位組、氯仿部位組和乙酸乙酯部位組的解痙率明顯升高（P＜0.01），說(shuō)明云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位、氯仿部位和乙酸乙酯部位對(duì)His致痙的離體氣管有解痙作用。見表3。

表3 云南松松塔不同極性部位對(duì)His致痙豚鼠離體氣管的影響

表3 云南松松塔不同極性部位對(duì)His致痙豚鼠離體氣管的影響

注：與給藥前比較，a）P＜0.05，b）P＜0.01；與DMSO組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與氨茶堿組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01。

4 討論

目前，哮喘尚無(wú)特效療法，主要以控制癥狀的藥物治療為主，常用的藥物是糖皮質(zhì)激素類和茶堿類，這兩類藥物的不良反應(yīng)較多且較嚴(yán)重。而中藥對(duì)哮喘有很好的防治效果，并且毒副作用較少較輕。因此，研發(fā)抗哮喘中藥有很好的前景。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位和氯仿部位可提高不同狀態(tài)豚鼠離體氣管的解痙率，也就是說(shuō)云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位和氯仿部位對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌有松弛作用，可降低離體氣道的高反應(yīng)性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為傳統(tǒng)中醫(yī)用松塔來(lái)治療哮喘提供了科學(xué)依據(jù)。但其機(jī)制還有待研究。

〔1〕劉學(xué)冠.支氣管哮喘治療進(jìn)展〔J〕.吉林醫(yī)學(xué)，2014，35（3）：596-597.

〔2〕中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編委會(huì).中國(guó)植物志〔M〕.北京：科學(xué)出版社，1978：204.

〔3〕江西交叉驗(yàn)證組.紅管藥、白皮松松塔治療慢性氣管炎115、116例臨床療效觀察〔J〕.山西醫(yī)藥雜志，1974（4）：12-20.

〔4〕張海珠，周萍，劉光明，等.云南松松塔中木質(zhì)素分析〔J〕.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2013，9（8）：24-25.

〔5〕李冬梅，李莉，吳五誼，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選云南松松塔總黃酮的提取工藝〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（1）：37-39.

〔6〕陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：1182-1183.

〔7〕吳國(guó)泰，劉峰林，高云娟，等.當(dāng)歸揮發(fā)油對(duì)離體氣管、十二指腸和血管平滑肌的作用〔J〕.中藥藥理與臨床，2012，28（6）：74-76.

〔8〕昌思思，馬志敏，宋正蕊，等.松塔球提取物的抑突變性研究〔J〕.癌變·畸變·突變，2010，22（1）：59-61.

The Influence of Different Polar Parts of Pinus yunnanensis on Trachea in Vitro of Guinea Pigs in Different State

Guo Meixian1,2,Liu Guangming2,Shen Lei2,Li Dongmei2,Zhao Jianrong3,Yang Jing1*
（1.College of Basic Medicine,Wuhan University,Wuhan 430072,China;2.Yunnan Provincial Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China;3.Baoshan College of Traditional Chinese Medicine,Baoshan, Yunnan 678000,China）

Objective:To observe the spasmolytic action of different polar parts ofPinus yunnanensison trachea in vitro of guinea pigs in different state.Methods:Using the methods of trachea in vitro,the influence of different polar parts ofP.yunnanensison trachea in vitro in resting state and acetylcholine（Ach）or histamine（His）induced spasm state were observed.Results:Ethanol extract,petroleum ether and chloroform parts ofP.yunnanensiscan reduce the tension of trachea in vitro in resting state and significantly increase basic spasmolysis rate;Ethanol extract,petroleum ether,chloroform and ethyl acetate parts ofP.yunnanensiscan reduce the tension of trachea in vitro in the Ach,His induced spasm state and significantly increase spasmolysis rate of spasmodic trachea.Conclusion:Ethanol extract,petroleum ether and chloroform part ofP.yunnanensiscan improve the spasmolysis rate of trachea in vitro of guinea pigs in different state,and relax resting and spasmodic trachea.

Pinus yunnanensis;trachea in vitro;spasmolytic effect

R996.2

A

1672-2345（2015）08-0001-04

10.3969∕j.issn.1672-2345.2015.08.001

（責(zé)任編輯 毛本勇）

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81260632）；云南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2012FD036）

2015-04-10

2015-04-27

郭美仙，實(shí)驗(yàn)師，主要從事中藥藥理學(xué)研究.

*通信作者：楊靜，教授.