王秀琴+李穎康+馬吉峰+梁小軍

摘要：為尋求抗弓形蟲病特效藥，進行了人工感染豬弓形蟲病治療和生物回歸試驗研究，結(jié)果表明，中藥AT10、混合制劑AT10+20對弓形蟲滋養(yǎng)體具有100%殺滅作用，對包囊分別有100%和98.04%殺滅作用，中藥AT20對滋養(yǎng)體有95%殺滅作用，對包囊無效，打破了傳統(tǒng)西藥治療弓形蟲病藥只對滋養(yǎng)體有效而對包囊無效的結(jié)論。

關(guān)鍵詞：中藥;治療;豬弓形蟲病;生物回歸試驗

中圖分類號： S855.99 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）04-0222-02

收稿日期：2014-06-05

基金項目：寧夏農(nóng)林科學院科技創(chuàng)新先導資金（編號：nkyj-14-20）

作者簡介：王秀琴（1964—），女，寧夏平羅人，副研究員，主要從事動物疾病預防及診斷研究。E-mail：nxnkyw@163.com。

通信作者：梁小軍，研究員，主要從事家畜繁殖育種和健康養(yǎng)殖方面的研究與示范。E-mail：Lxj0520@163.com。

弓形蟲病是由弓形蟲（Taxoplasma gondii）引起的一種人畜共患原蟲病，人類通過接觸終末宿主貓科動物和食入寄生弓形蟲包囊的豬、羊、雞等產(chǎn)品而感染[1-2]。人感染弓形蟲病可導致孕婦流產(chǎn)、死胎和新生兒先天性弓形蟲病等。弓形蟲病是嚴重影響人類健康及畜牧業(yè)發(fā)展的人畜共患寄生蟲病之一[3-4]。對弓形蟲病的治療，多年來一直采用螺旋霉素和磺胺類藥物，這些藥品僅對滋養(yǎng)體有效，對包囊無效[5-6]。為了尋求既能殺滅滋養(yǎng)體又對包囊有特效的抗弓形蟲藥物，我們對人工感染豬弓形蟲病進行了治療試驗。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 弓形蟲強毒株 試驗用標準強毒蟲株CN，引自中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.1.2 試驗藥物 試驗用抗弓形蟲中藥及混合制劑AT10（AT：Anti-Toxoplasaa的縮寫，下同），AT20、AT10+20混合制劑，由寧夏中藥研究所研制。

1.1.3 試驗動物 45 d健康豬，由寧夏賀蘭縣農(nóng)牧局提供;小白鼠，體質(zhì)量（20±2） g，購自寧夏自治區(qū)藥品檢驗所。

1.2 試驗方法

1.2.1 藥物安全性試驗[7] 注射藥物后1 h內(nèi)和2、4、8 h觀察試驗豬臨床反應多次。停藥后每日上下午各觀察1次，連續(xù)觀察3 d。無任何臨床反應為安全，有一定臨床反應，但能在短期內(nèi)耐過為基本安全，臨床反應重，甚至部分豬死亡，或較長時間方能耐過為不安全。

1.2.2 藥物治療試驗[8] 弓形蟲CN強毒株，采用腹腔注射攻毒試驗。試驗動物小白鼠，垂直傳遞3代以上，抽取小白鼠腹腔液，用生理鹽水稀釋，每頭試驗豬腹腔注射3 000萬～3 750萬個弓形蟲滋養(yǎng)體。對照組又分強毒對照：每批試驗共設1組，每組1頭;藥物對照：每種藥物設1頭;健康對照：每批試驗共設1組，每組1頭。治療組按不同藥物分別分為大、中、小劑量組。

1.2.3 生物回歸試驗 分別于攻毒后7、14 d，在AT10、AT20、AT10+203組中各隨機抽樣檢查經(jīng)藥效判定認為對弓形蟲滋養(yǎng)體有效的豬1頭（共6頭）剖殺，取腹水、腦、肝、脾、腸淋巴結(jié)、膈肌，按病原分離程序和方法，分別接種健鼠3只（肝、脾、淋、膈混合為1組），并分別于7、14 d盲傳1代，傳遞3代，分別測算各生物回歸試驗組鼠的陽性率。

1.2.4 臨床檢查[9] 每天測溫2次（上午體溫超過40 ℃，下午超過40.5 ℃即認為升溫，并以此統(tǒng)計稽留期），脈搏、呼吸、心、肺、眼結(jié)膜、鼻、胃腸、食欲、糞尿、體表淋巴結(jié)和精神、行動等常規(guī)觀察與檢查1次，檢查期30 d。分別統(tǒng)計體溫稽留小時數(shù)，并采用t測定法進行均數(shù)差異顯著性分析，比較各組與強毒對照組的差異性。

1.2.5 荷蟲量檢查[10] 分別在投藥前和臨床檢查結(jié)束時抽取腹水，以壓片鏡檢法觀察蟲體形態(tài)、運動和活力。以白細胞計數(shù)法計算荷蟲量，計算減少率。并采用χ2測定法進行差異顯著性分析，比較各組與強毒對照的差異性。

減少率=（1-投藥后荷蟲數(shù)投藥前荷蟲數(shù)）×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥物安全性試驗

通過45頭豬的藥物安全性觀察，獲得不同藥物的安全有效劑量，結(jié)果見表1。

表1 試驗藥物安全劑量

試驗藥物

大劑量 中劑量 小劑量

劑量

（mg/kg） 試驗豬數(shù)

（頭） 劑量

（mg/kg） 試驗豬數(shù)

（頭） 劑量

（mg/kg） 試驗豬數(shù)

（頭）

AT10 2.50 10 0.25 3 0.05 2

AT20 50.0 10 2.50 3 0.50 2

AT10+20 2.50+25.0 10 0.25+2.50 3 0.05+0.50 2

AT10以大劑量腹腔注射試驗豬后，15 min內(nèi)出現(xiàn)口涎增多、扭腰、步履蹣跚、精神遲滯等毒副反應。30 min左右明顯緩解，1 h左右基本恢復正常。注射第2、第3劑后都曾出現(xiàn)類似反應，但未再加劇。在正式治療試驗中也未出現(xiàn)嚴重藥物毒副反應，基本安全。以中劑量腹腔注射試驗豬后均未見異常反應，安全性能良好。以7.5 mg/kg大劑量腹腔注射試驗豬后15 min出現(xiàn)嚴重毒副反應，口吐大量白色泡沫，扭腰伸頸，后肢伸直，站立不穩(wěn)，行走困難，頻頻起臥，肌肉震顫，精神沉郁。2 h后逐漸緩解，4～8 h基本恢復。注射第2劑后 15 min 內(nèi)出現(xiàn)上述癥狀，并逐漸加劇，其中1頭注第2劑后25 min死亡，另1頭注第2劑后8 h基本恢復。注第3劑后仍出現(xiàn)類似癥狀，8 h左右基本康復。endprint

AT20以大劑量腹腔注射試驗豬后，15 min內(nèi)出現(xiàn)嘔吐、伸腰、行走不穩(wěn)等反應。1 h左右開始緩解，2 h基本恢復，注射第2、第3劑曾出現(xiàn)過類似反應，但未見加劇。在正式試驗中都未出現(xiàn)嚴重藥物毒副反應，基本安全。以中劑量腹腔注射仔豬后，均未見任何異常反應，安全性能良好。

AT10+20以大劑量腹腔注射試驗豬后，15 min內(nèi)出現(xiàn)口涎增多、嘔吐、扭腰、步履蹣跚、精神遲滯等毒副反應，15 min后毒副反應逐漸緩解，2 h左右基本恢復正常。注射第2、第3劑后，都曾出現(xiàn)過類似反應，但未見加劇，似無蓄積現(xiàn)象。以中、小劑量腹腔注射試驗豬，均未見異常反應，安全性能良好。

2.2 藥物治療試驗

根據(jù)藥效判定標準認為以AT100.25～2.5 mg/kg治療豬弓形蟲病，對滋養(yǎng)體殺滅率為100%;以AT100.05 mg/kg治療豬弓形蟲病，對滋養(yǎng)體殺滅率為95.23%。

根據(jù)藥效判定標準認為以AT200.5～50 mg/kg治療豬弓形蟲病，對滋養(yǎng)體殺滅率達到95%左右。

根據(jù)藥效判定標準認為以AT10+20 的0.05～2.5+0.5～25 mg/kg治療豬弓形蟲病，對滋養(yǎng)體殺滅率為100%（表2）。

表2 不同藥物治療效果比較

試驗藥物 組別

荷蟲量（mm3） 體溫

治療前蟲數(shù)

（頭）

治療后 差異顯著性

蟲數(shù)（頭） 減少率（%） χ2值 結(jié)果

稽留時間

（h）

差異顯著性

t值 結(jié)果

AT10 大劑量 10 730 0 100 333.37 P<0.01 44.4 6.860 P<0.01

中劑量 10 634 0 100 330.37 P<0.01 68.0 4.698 P<0.01

小劑量 10 600 506 95.23 282.44 P<0.01 84.0 7.639 P<0.01

強毒對照 11 254 12 100 123.27

AT20 大劑量 9 954 512 94.85 256.06 P<0.01 44.4 21.814 P<0.01

中劑量 10 400 500 95.19 276.92 P<0.01 68.0 3.188 P<0.01

小劑量 10 900 511 95.31 283.58 P<0.01 84.0 2.276 P<0.01

強毒對照 11 254 12 100 123.27

AT10+20 大劑量 11 260 0 100 349.84 P<0.01 2.40 21.303 P<0.01

中劑量 11 534 0 100 356.84 P<0.01 36.0 6.475 P<0.01

小劑量 10 800 0 100 335.51 P<0.01 60.0 2.578 P<0.05

強毒對照 11 254 12 100 123.27

2.3 生物回歸試驗

由表3可知，AT10、AT10+20 對包囊有效，對包囊的殺滅率分別達到100%、98.04%。AT20對包囊無效。強毒攻擊后自然耐過豬剖殺取材回歸小白鼠，結(jié)果表明，第1代鼠100%典型發(fā)病并在7 d內(nèi)死亡。

表3 生物回歸試驗陽性率結(jié)果比較

組別

回歸試驗小鼠陽性率（%）

7 d組 14 d組

腹水 腦 肝、脾、淋、膈 平均 腹水 腦 肝、脾、淋、膈 平均

總陽性率

AT10 0 0 0 0 0 0 0 0 0

AT20 35.71 35.71 30.77 33.33 83.33 25.00 29.17 41.67 37.25

AT10+20 0 0 0 0 8.33 8.33 0 4.16 1.96

強毒對照 100 100 100 100

3 結(jié)論與討論

治療弓形蟲病的理想藥物應能阻止感染和預防包囊形成，如已形成包囊則應破壞它或使包囊內(nèi)的蟲體死亡[11-12]。本試驗用5種中藥對人工感染豬弓形蟲病進行治療試驗，通過治療結(jié)果比較，篩選出3種治療弓形蟲病的新特效藥AT10、AT20、AT10+20，其中AT10和AT10+20對弓形蟲體滋養(yǎng)體和包囊均有強大的殺滅作用，AT20僅對弓形蟲滋養(yǎng)體有效。AT10、AT20均系中藥制劑，藥源廣、成本低、用量少、療效高，相關(guān)藥理機制還有待進一步研究。

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