高日明，李婷婷，范秀麗，孫樹民?

（1.金宇保靈生物藥品有限公司，呼和浩特010030；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古通遼028042）

五省牛、羊和豬口蹄疫疫苗免疫效果的試驗

高日明1，李婷婷2，范秀麗1，孫樹民2?

（1.金宇保靈生物藥品有限公司，呼和浩特010030；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古通遼028042）

為了監(jiān)測O、A和AsiaⅠ型口蹄疫疫苗免疫后引起的抗體水平，采用口蹄疫液相阻斷ELISA法和病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC-ELISA法對我國云南、內(nèi)蒙古、甘肅、新疆和西藏的部分地區(qū)牛、羊和豬的血清樣品共65591份進行三型口蹄疫抗體水平監(jiān)測。液相阻斷ELISA方法顯示加強免疫后各地合格率均能達到100%；非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC-ELISA方法顯示五省抗體檢測合格率分別為91.13%、88.38%、78.04%、88.15%和85.15%；不同動物口蹄疫分型抗體檢測結(jié)果以云南最高（均在85%以上），其它四省抗體檢測合格率均在70%以上。結(jié)果表明，該疫苗免疫可產(chǎn)生較好的免疫效果。［關(guān)鍵詞］ 口蹄疫；口蹄疫疫苗；抗體檢測；免疫效果

口蹄疫?。‵oot and mouth disease，F(xiàn)MDV）是由口蹄疫病毒引起偶蹄動物多發(fā)的一種傳染性較強的疾病。其病毒為小的正鏈，核糖核酸家族成員，現(xiàn)分七個血清型（O、A、C、AsiaⅠ、SAT1、SAT2和SAT3），我國流行最多的血清型為O、A和AsiaⅠ，五省鄰近國家流行情況較為復(fù)雜，在2009-2011年統(tǒng)計顯示：澳大利亞、韓國、朝鮮和日本口蹄流行主要以A和O型為主，印度、巴基斯坦、尼泊爾等南亞以O(shè)、A、C和AsiaⅠ型流行為主，越南以AsiaⅠ血清型為主要流行，這種錯綜復(fù)雜的流行情況，給我國口蹄疫病防治提出了巨大的挑戰(zhàn)［1］。迄今為止，該病治療上尚無有效藥物，疫苗免疫是控制本病最為有效的方法之一，同時這種方法也幫助一些國家的部分地區(qū)消滅了本?。?］。澳大利亞通過選擇適宜的血清型疫苗免疫，使口蹄疫的發(fā)病率逐年減少，以致部分地區(qū)消滅此病。土耳其、韓國、朝鮮、日本和越南等國家選擇性增加免疫次數(shù)，直至達到規(guī)定國家規(guī)定的免疫防控標(biāo)準(zhǔn)。我國流行口蹄疫血清分型多，接種一種血清型的口蹄疫疫苗不足以保護其他血清型病毒的感染的抗體［3］。其根源在于每個分型具有不同的遺傳系譜［4］，其每種血清型遺傳變異可導(dǎo)致抗原變異，從而影響疫苗對同一血清異源毒株的保護［5］。盡管我國將該病列為強制免疫病種，如何實時監(jiān)測免疫后抗體產(chǎn)生的水平，成為當(dāng)前亟待解決的問題。本試驗以2014年五省牛、羊、豬疫苗免疫后血清樣品為研究對象，分別監(jiān)測65591份血清樣品抗體水平，為我國牛、羊、豬口蹄疫防控工作提供依據(jù)與參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清來源 2014年收集我國內(nèi)蒙古、云南、寧夏、新疆、西藏五個省份口蹄疫疫苗后15、30、60 d的牛血清、羊血清和豬血清共65591份，不區(qū)分動物、飼養(yǎng)性質(zhì)和地區(qū)，統(tǒng)計抗體產(chǎn)生合格率情況。

1.1.2 ELISA試劑盒 口蹄疫病毒（O、A和AsiaⅠ型）非結(jié)構(gòu)蛋白液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒和口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC-ELISA抗體檢測試劑盒均購自中國蘭州獸醫(yī)研究所。

1.1.3 免疫疫苗 所選疫苗購于金宇保靈生物藥品有限公司生產(chǎn)（批號：4235002，簡稱金宇）

1.2 方法

1.2.1 不同免疫期抗體合格率測定 采用口蹄疫O、A和AsiaⅠ型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，按照檢測試劑盒說明書對收集的15、30、60 d各3000份牛血清、3000份羊血清和3000份豬血清（每個采血日期三種動物各1000份樣品，共9000份樣品）進行測定。

1.2.2 不同地區(qū)免疫效果評價 采用口蹄疫O、A和AsiaⅠ型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，按照檢測試劑盒說明書對不同地區(qū)牛、羊、豬規(guī)模化養(yǎng)殖場、屠宰場和散戶飼養(yǎng)收集的30 d共7146份樣品進行檢測，分析各地區(qū)用疫苗后免疫效果。

1.2.3 不同地區(qū)3種動物的非結(jié)構(gòu)蛋白抗體監(jiān)測

采用病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC-ELISA抗體檢測試劑盒，按照檢測試劑盒說明書進行對2014年五個省不同地區(qū)牛、羊、豬30407份血清進行了自然感染抗體監(jiān)測及比較。

1.2.4 不同地區(qū)非結(jié)構(gòu)蛋白抗體測定 采用病毒

非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC-ELISA抗體檢測試劑盒，按照檢測試劑盒說明書進行對2014年五個省不同地區(qū)牛、羊、豬19038份血清進行了自然感染抗體監(jiān)測及比較。

2 結(jié)果

2.1 不同免疫期抗體合格率測定 在接種疫苗前被檢測動物的抗體合格率基本在53%左右，一免后15 d都能達到國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)（抗體合格率70%），檢測血清樣品中口蹄疫AsiaⅠ型免疫抗體消長規(guī)律與O型口蹄疫消長規(guī)律基本一致，而口蹄疫A型免疫抗體消長規(guī)律相對于AsiaⅠ型和O型要低，加強免疫后抗體合格率能達到100%，結(jié)果見表1。

表1 注射口蹄疫三價滅活苗檢測抗體合格率結(jié)果

2.2 不同地區(qū)口蹄疫免疫效果評價 經(jīng)液相阻斷ELISA方法對牛、羊和豬口蹄疫O型、亞洲I型（AsiaⅠ型）、A型的免疫抗體的檢測，其中豬檢測O型，牛、羊檢測O型、亞洲Ⅰ型（AsiaⅠ型）、A型，以評價各地口蹄疫的免疫效果。結(jié)果顯示：2014年五省和自治區(qū)中云南省合格率最高達91.13%，而內(nèi)蒙古、甘肅、新疆和西藏抗體合格率均在70%以上符合國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見表2。

表2 不同地區(qū)口蹄疫的免疫效果檢測結(jié)果

2.3 不同地區(qū)3種動物的非結(jié)構(gòu)蛋白抗體測定經(jīng)3ABC非結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA方法對牛、羊和豬口蹄疫抗體進行檢測，結(jié)果如下：牛O型口蹄疫免疫抗體檢測7737頭份，合格6262頭份，云南省合格率最高90.52%，西藏最低74.96%，平均合格率80.94%；亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體檢測6308頭份，合格5075頭份，云南合格率最高90.48%，西藏最低75.12%，平均合格率80.45%；A型口蹄疫免疫抗體檢測6250頭份，合格4705頭份，云南合格率最高85.28%，西藏最低72.00%，平均合格率75.28%；全部抗體合格率均在70%以上，符合國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。

羊O型口蹄疫免疫抗體檢測1168頭份、合格959頭份、云南合格率最高93.16%，新疆最低75.31%，平均合格率82.11%；亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體檢測1107頭份、合格935頭份、云南格率最高91.00%，甘肅最低78.79%，平均合格率84.46%，全部抗體合格率均在70%以上，符合國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。

豬僅統(tǒng)計O型口蹄疫抗體檢測情況，抗體檢測7836頭份、合格6327頭份、云南合格率最高96.43%，新疆最低73.54%，平均合格率80.74%，全部抗體合格率均在70%以上，符合國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見表3-表5。2.4 不同地區(qū)非結(jié)構(gòu)蛋白抗體測定 采用非結(jié)構(gòu)蛋白抗體（3ABC-ELISA）陽性率顯示：不同地區(qū)2014年口蹄疫感染抗體的測定血清19038頭份、陽性血清樣品羊738頭份，各省均有。內(nèi)蒙古陽性率最低2.91%，云南省陽性率最高5.05%。檢測陽性的刮取OP液進行PCR復(fù)檢，結(jié)果為陰性，結(jié)果見表6。

表3 2014年不同地區(qū)牛非結(jié)構(gòu)蛋白抗體監(jiān)測情況

表4 2014年不同地區(qū)羊非結(jié)構(gòu)蛋白抗體監(jiān)測情況

表5 2014年不同地區(qū)豬非結(jié)構(gòu)蛋白抗體監(jiān)測情況

表6 2014年不同地區(qū)非結(jié)構(gòu)蛋白抗體的測定結(jié)果

3 討論

本研究的目的是通過邊境各省ELISA方法檢測的數(shù)據(jù)來評估口蹄疫滅活疫苗對本地區(qū)可能起到的防控作用，通過數(shù)據(jù)說明口蹄疫滅活疫苗接種不同的動物后，均能起到較好的防控效果。

從監(jiān)測結(jié)果看不同血清型免疫抗體合格率均超過70%，總體免疫合格率均高于國家標(biāo)準(zhǔn)，這與祁光宇等［6］試驗結(jié)論相一致。說明我國推廣的口蹄疫疫苗強制免疫，提高了易感動物的免疫力，特別是在邊境復(fù)雜的流行環(huán)境下，獲得了較大的成效。

由于沒有區(qū)分動物的種類，表中所反應(yīng)的數(shù)據(jù)有一定的局限性。但從表中不難看出口蹄疫陽性樣品在五省不同程度的存在，具有潛在的威脅，這主要由于復(fù)雜的地理位置、病原血清種類的繁多、污染范圍較廣有關(guān)。從數(shù)據(jù)來看內(nèi)蒙古、甘肅和西藏與高日明、豆思遠和易俊等試驗結(jié)論相一致［7-9］。

免疫效果差異可能存在以下原因，一是合格率低的省份可能存在農(nóng)村采集散養(yǎng)戶樣品較多，免疫密度低于集中飼養(yǎng)動物和規(guī)?；B(yǎng)殖場，從而導(dǎo)致抗體水平較低；二是，從本次監(jiān)測數(shù)據(jù)未能區(qū)分各種動物，而且有的動物不使用三價滅活疫苗免疫，存在縱向和橫向比較的不對等，造成疫苗免疫效果不一；三是可能與樣品的采集、運輸、檢測和人員的操作等因素有關(guān)。因此，開展細致、實時、縱橫均衡的口蹄疫免疫抗體監(jiān)測，及時掌握不同動物種群和不同飼養(yǎng)性質(zhì)的免疫抗體產(chǎn)生水平，才能更加充分合理的反應(yīng)本病的流行和防控狀況。

［1］ 高飛，孫國斌，張金鳳.國外口蹄疫流行現(xiàn)狀分析及防治策略［J］.北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報，2006，1：76-77.

［2］ Rodriguez L L，Grubman M J.Foot and mouth disease virus vaccines.Vaccine.2009，5，27：90-94.

［3］ Sharma G K，Mohapatra J K，Mahajan S，et al.Comparative evaluation of non-structural protein-antibody detecting ELISAs for foot-and-mouth disease sero-surveillance under intensive vaccination［J］.J Virol Methods，2014：207：22-28.

［4］ Colling A，Morrissy C，Barr J，et al.Development and validation of a 3ABC antibody ELISA in Australia for foot and mouth disease［J］.Aust Vet J，2014，92（6）：192-199.

［5］ Nagendrakumar S B，Srinivasan V A，Madhanmohan M，et al.Evaluation of cross-protection between O1 Manisa and O1 Campos in cattle vaccinated with foot-and-mouth disease virus vaccine incorporating different payloads of inactivated O1 Manisa antigen［J］.Vaccine，2011，24，29（10）：1906-1912.

［6］ 祁光宇，任維維，智曉瑩，等.O型口蹄疫抗體金標(biāo)試紙盒檢測免疫動物抗體效價與攻毒保護關(guān)系［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2011，09：1277-1283.

［7］ 高日明，馬立峰，李敏，等.內(nèi)蒙古地區(qū)牛羊口蹄疫滅活疫苗的免疫效果比較研究［J］.中國獸藥雜志，2014，04：15-18.

［8］ 豆思遠，豆玲，王佳，等.2009～2012年甘肅省豬口蹄疫感染情況和抗體水平調(diào)查［J］.國外畜牧學(xué)（豬與禽），2014，04：57-58.

［9］ 易俊，陳智勇，韓晉玫，等.2013年度西藏及四川紅原地區(qū)牛血清口蹄疫抗體水平監(jiān)測［J］.中國奶牛，2014，18：64-65.

（編輯：陳希）

Experiment on the Immune Effects of FMD Vaccine to Cattle，Sheep and Swine in Five Provinces

GAO Ri-ming1，LI Ting-ting2，F(xiàn)ANG Xiu-li1，SUN Shu-min2?
（1.Inner Mongolia Jinyu Baoling Biological Pharmaceutical Company Limited，Huhehot 010030，China；2.College of Animal Science and Technology，Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao，Inner Mongolia 028042，China）

In order to control the prevalence of FMD and moniter antibody levels of FMDV type O，A and AsiaⅠin the border area，F(xiàn)MD phase blocking ELISA and virus nonstructural protein 3ABC-ELISA method are used to detect three types of FMDV 65591 sample sera antibody levels of cattle，sheep and swines in Yunnan，Inner Mongolia，Gansu，Xinjiang and Tibet.Liquid phase blocking ELISA method shows that the pass rate could reach 100%after booster；non-structural protein 3ABC-ELISA antibody test shows the pass rates of five provinces are 91.13%，88.38%，78.04%，88.15%and 85.15%respectively；samples from Yunnan are indicate as the highest antibody levels ones in different types of animal FMDV antibody detection（more than 85%），the other four provinces antibody test pass rates above 70%.The results show that it can be well immunization effect by inactivation of FMD vaccines.

foot and mouth disease；FMD vaccine；antibody monitoring；immunization effect

2015-02-01

A

1002-1280（2015）03-0017-04

S852.52

國家自然科學(xué)基金項目（31160504；31460658）

高日明，碩士，從事生物制品研究。

孫樹民。E-mail：shums1975＠163.com