李志，曹燕，伍勇，3?，白霞，王楠，戴濱陽(yáng)，肖倩文，鄭殿重，孫志良，3

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)沙410128；2.岳陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物醫(yī)藥系，湖南岳陽(yáng)414000；3.湖南省植物功能成分利用協(xié)同創(chuàng)新中心，長(zhǎng)沙410128）

血根堿安全性試驗(yàn)研究

李志1，曹燕2，伍勇1，3?，白霞1，王楠1，戴濱陽(yáng)1，肖倩文1，鄭殿重1，孫志良1，3

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)沙410128；2.岳陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物醫(yī)藥系，湖南岳陽(yáng)414000；3.湖南省植物功能成分利用協(xié)同創(chuàng)新中心，長(zhǎng)沙410128）

為觀察大鼠連續(xù)給予血根堿30 d所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及停藥后恢復(fù)情況，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，將血根堿分別按高、中、低劑量［21、10.5、2.1 mg／（kg·d）］給大鼠連續(xù)灌胃給藥30 d，觀察給藥期間及停藥后14 d大鼠的臨床體征、血液常規(guī)和生化指標(biāo)、臟器指數(shù)等方面的變化。結(jié)果表明，連續(xù)給藥30 d后與對(duì)照組比較，高、中劑量組體重明顯增加（P＜0.05），高劑量組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶水平升高（P＜0.05），其他劑量組的血液生化指標(biāo)，各劑量組的血液常規(guī)、臟器指數(shù)均未見(jiàn)顯著性變化（P＞0.05）；停藥后14 d，高、中劑量組比對(duì)照組體重明顯增加（P＜0.05），其他各項(xiàng)檢查指標(biāo)無(wú)顯著差異性（P＞0.05）。本研究對(duì)血根堿的安全性進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)，結(jié)果可為血根堿的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

血根堿；大鼠；毒性；安全性評(píng)價(jià)

血根堿是一種存在于罌粟科、藍(lán)堇科與蕓香科植物中的苯菲啶異喹啉類(lèi)生物堿，能抑制弧菌［1］、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、四連球菌、枯草芽孢桿菌等細(xì)菌的生長(zhǎng)［2］，亦能抑制黃曲霉、根霉等8種真菌［3］，還能殺滅魚(yú)類(lèi)指環(huán)蟲(chóng)和抑制6種水產(chǎn)病原菌［4］。有效成分為血根堿的博落回注射液，對(duì)豬的傳染性腸胃炎和仔豬黃白痢、傷寒等療效好［4］。在火雞日糧中添加博落回提取物（含血根堿1.5%），能增加火雞的日采食量，提高日增重比［6］。在28日齡斷奶仔豬飼料中添加含3.75 mg／kg血根堿的博落回生物堿，能有效地改善仔豬的日增重、采食量及飼料的利用效率，促進(jìn)其生長(zhǎng)［7］。

為將血根堿開(kāi)發(fā)為獸藥應(yīng)用于細(xì)菌性疾病，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，擬通過(guò)觀察大鼠連續(xù)灌胃血根堿30 d所產(chǎn)生的生理指標(biāo)變化及停藥后恢復(fù)情況，對(duì)血根堿的安全性進(jìn)行初步評(píng)價(jià)，以期為臨床劑量的確定提供理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 試劑與儀器 血根堿（湖南美可達(dá)股份有限公司，批號(hào)20130712，純度＞98%），稱取適量用純凈水依次配制成2.1、1.05和0.21 mg／mL三種濃度；谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒（批號(hào)140306）、谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒（批號(hào)140311）、尿素氮試劑盒（批號(hào)131215）、肌酐試劑盒（批號(hào)140108）、血糖試劑盒（批號(hào)131207）、白蛋白試劑盒（批號(hào)131122）、總蛋白試劑盒（批號(hào)140107）、總膽固醇試劑盒（批號(hào)131219）、甘油三脂試劑盒（批號(hào)140224）均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

UV2100紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)（美國(guó)萊伯泰克公司）、KT6HB全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)雅培公司）、BC-2800動(dòng)物血液自動(dòng)分析儀（深圳邁瑞醫(yī)療國(guó)際有限公司）、Z383K低溫高速離心機(jī)（德國(guó)HERMLE公司）、Sartorius TE 212-L電子天平（北京賽多利斯公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SPF級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體重90～110 g，購(gòu)于上海斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司湖南分公司（許可證號(hào)SCXK（湘）2009-0012）。

1.3 檢測(cè)指標(biāo) 大鼠試驗(yàn)前飼養(yǎng)1周，觀察進(jìn)食、排便、活動(dòng)等無(wú)異常后，按體重隨機(jī)分為4組，每組24只，雌雄各半。根據(jù)血根堿經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)半數(shù)致死量LD50，以及參考相關(guān)文獻(xiàn)［8-9］，設(shè)定高、中、低劑量組分別為21、10.5、2.1 mg／（kg·d），空白對(duì)照組灌胃給予等體積純凈水，每日給藥1次，按體重定量給藥。大鼠于連續(xù)給藥30 d和停藥恢復(fù)期14 d后24 h（禁食不禁水12 h），每組取12只大鼠（雌雄各半）眼眶靜脈采血0.5 mL，用全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)血常規(guī)指標(biāo)后，剖殺大鼠取自凝血分離血清，采用谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、血糖、白蛋白、總蛋白、總膽固醇、甘油三脂等試劑盒與全自動(dòng)生化分析儀，測(cè)定血液生化指標(biāo)；取心、肝、脾、肺、腎臟稱重，計(jì)算臟器指數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)結(jié)果采用x±s表示，用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各組參數(shù)進(jìn)行單因素方差分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 血根堿對(duì)大鼠體重的影響 與空白對(duì)照組比較，血根堿高、中劑量組雄性、雌性大鼠體重增重顯著（P＜0.05），低劑量組大鼠體重與對(duì)照相比沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05），血根堿在連續(xù)30 d給藥期和停藥14 d內(nèi)對(duì)雄性大鼠體重影響見(jiàn)表1，對(duì)雌性大鼠體重的影響見(jiàn)表2。

表1 血根堿對(duì)雄性大鼠體重的影響（n＝12，只）

表2 血根堿對(duì)雌性大鼠體重的影響（n＝12，只）

2.2 血常規(guī)指標(biāo)檢查 空白對(duì)照組大鼠血常規(guī)各指標(biāo)水平均在正常范圍內(nèi)，連續(xù)給藥30 d和停藥14 d，血根堿各劑量組雄性的血紅蛋白、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞的百分比與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05），見(jiàn)表3-表4；各劑量組雌性大鼠的血常規(guī)與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05），見(jiàn)表5-表6。

表3 連續(xù)給予血根堿30 d對(duì)雄性大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響（n＝6，只）

表4 血根堿停藥14 d后對(duì)雄性大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響（n＝6，只）

表5 連續(xù)給予血根堿30 d對(duì)雌性大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響（n＝6，只）

表6 血根堿停藥14 d后對(duì)雌性大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響（n＝6，只）

2.3 生化指標(biāo)檢查 空白對(duì)照組大鼠的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、血糖、白蛋白、總蛋白、總膽固醇、甘油三脂等指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，高劑量血根堿能升高雄性大鼠的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶水平，與空白對(duì)照組有顯著性差異（P＜0.05），但對(duì)其他生化指標(biāo)沒(méi)有影響（P＞0.05），中、低劑量組的生化指標(biāo)與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05），見(jiàn)表7；在停藥14 d后，高劑量組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶水平恢復(fù)正常（P＞0.05），各劑量組未見(jiàn)其他明顯的后遺效應(yīng)和繼發(fā)毒性變化，見(jiàn)表8；雌性大鼠各劑量組的生化指標(biāo)在連續(xù)給藥30 d后及停藥14 d后的變化情況同雄性大鼠，見(jiàn)表9-表10。

表7 給予血根堿30 d對(duì)雄性大鼠血液生化指標(biāo)的影響（n＝6，只）

表8 血根堿停藥14 d后對(duì)雄性大鼠血液生化指標(biāo)的影響（n＝6，只）

表9 連續(xù)給予血根堿30 d對(duì)雌性大鼠血液生化指標(biāo)的影響（n＝6，只）

表10 血根堿停藥14 d后對(duì)雌性大鼠血液生化指標(biāo)的影響（n＝6，只）

2.4 臟器指數(shù)測(cè)定 解剖大鼠后精密稱取臟器質(zhì)量，計(jì)算其臟／體，結(jié)果進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，空白對(duì)照組的心、肝、脾、肺、腎等臟器指數(shù)在正常范圍內(nèi)，各劑量組的臟器指數(shù)與空白對(duì)照組比較均無(wú)顯著性異（P＞0.05），見(jiàn)表11-表12。

表11 連續(xù)給予血根堿30 d后大鼠臟器指數(shù)（n＝12，只）

表12 血根堿停藥14 d后大鼠臟器指數(shù)（n＝12，只）

3 討論與小結(jié)

有研究表明，在28日齡斷奶仔豬飼料中添加含3.75 mg／kg血根堿的博落回生物堿進(jìn)行90 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)，料肉比較空白對(duì)照組降低了5.12%［7］。本試驗(yàn)中，大鼠每日灌胃2110.5 mg／kg血根堿能促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育，可能是由于血根堿具有抑制膽脂酶活性，刺激唾液分泌，并具有利尿外周抗腎腺素解交感作用，同時(shí)有能抑制芳香族氨基酸脫羧酶的作用，血根堿通過(guò)這一作用調(diào)節(jié)色氨酸-5-色胺代謝途徑，從而增加飼養(yǎng)動(dòng)物的采食量，亦有可能是血根堿在腸道中發(fā)揮抗菌和抗炎作用，從而降低斷奶仔豬腹瀉率，保障腸道健康，改善飼料利用率提高動(dòng)物生產(chǎn)性能，此機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

有研究報(bào)道單劑量給予大鼠腹腔注射10 mg／kg的血根堿能升高血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平［10］，從本試驗(yàn)血根堿對(duì)大鼠的血清生化指標(biāo)的影響情況來(lái)看，高劑量組谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶水平要高于空白對(duì)照組，其他各劑量組指標(biāo)與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，且谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶可在停藥后恢復(fù)正常，進(jìn)一步證實(shí)高劑量的血根堿能升高血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平，同時(shí)提示高劑量的血根堿可能引起肝臟、骨骼肌、心肌的損傷，但這種損傷在血根堿停藥后可以恢復(fù)。

有研究表明大鼠口服血根堿的LD50為1658 mg／kg，靜脈注射的LD50為29 mg／kg，在大鼠日糧中添加150 μg／g血根堿喂養(yǎng)15 d，以及以0.6 mg／kg劑量灌胃30 d后未見(jiàn)大鼠出現(xiàn)毒性反應(yīng)，家兔肌肉注射血根堿的LD50為1658 mg／kg［11］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠經(jīng)灌胃分別給予21、10.5、2.1 mg／kg血根堿，給藥期間各組動(dòng)物的活動(dòng)、毛色、飲水、攝食、糞便正常，21、10.5 mg／kg劑量組能促進(jìn)大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)，21 mg／kg劑量組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶要高于空白對(duì)照組，其他組的血液常規(guī)與生化指標(biāo)、臟器指數(shù)均正常。

本試驗(yàn)結(jié)果對(duì)血根堿的安全性進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)，得出30 d喂飼不同劑量的血根堿對(duì)大鼠引起有害效應(yīng)的劑量和靶器官，為血根堿臨床劑量的確定提供數(shù)據(jù)支持。

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（編輯：陳希）

Safety Test of Sanguinarine

LI Zhi1，CAO Yan2，WU Yong1，3?，BAI Xia1，WANG Nan1，DAI Bin-yang1，XIAO Qian-wen1，ZHENG Dian-zhong1，SUN Zhi-liang1，3
（1.College of Veterinary Medicine，Hunan Agricultural University，Changsha 410128，China；2.Yueyang Polytechnical College，Yueyang，Hunan 414000，China；3.Hunan Collaborative Innovation for Ultilization of Botanical Function Ingredients，Changsha 410128，China）

To provide theoretical evidence for clinical applications，the toxicity of sanguinarine in rats after feeding the drug for 30 d and the recovery after drug withdrawal was observed.Three treatment groups and control group were divided up.Rats in high-dose，middle-dose and low-dose groups were respectively administrated sanguinarine at 21，10.5 and 2.1 mg／（kg·d）orally for 30 consecutive days.The clinical signs，hematological index，blood biochemical index and organ index of rats were investigated during 30 d drug administration period and 14 d after drug withdrawal.The results indicated that sanguinarine in high-dose and middle-dose could induce body weight increasing in rats compared with control group（P＜0.05）.The level of alanine aminotrans ferase（ALT）and partate aminotransferase（AST）in rats from high-dose group was higher than those from control group（P＜0.05）.Compared with control group，there was no evident effect in hematological index，and organ index（P＞0.05）.The body weight of rats from the high-dose group and middle-dose group had significantdifference compared with control group（P＜0.05），but the other indexes had no significant difference after another 14 d recovery（P＞0.05）.The safety evaluation of sanguinarine laid a theoretical foundation for its clinical application.

sanguinarine；rat；toxicity；safety evaluation

2014-12-08

A

1002-1280（2015）03-0035-05

S853.74

國(guó)家大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃資助項(xiàng)目（Gscx1316）；湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)東方科技學(xué)院青年基金項(xiàng)目（14QNZ13）；國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目（31402255）

李志，從事中藥有效成份與藥物代謝研究。

伍勇。E-mail：wuyong712＠126.com