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        降壓草的組織培養(yǎng)技術(shù)研究

        2015-06-10 11:43:10郭福生陳淑華王漫葉雅玲
        防護(hù)林科技 2015年6期
        關(guān)鍵詞:白城市叢生腋芽

        郭福生,陳淑華,王漫,葉雅玲

        (1.白城市到保機(jī)械林場(chǎng),吉林 白城 137000;2.白城市林業(yè)科學(xué)研究院,吉林 白城 137000)

        降壓草為菊科三七草屬多年生宿根常綠草本植物,是從東南亞引進(jìn)的一種稀有天然藥用植物,高25~35cm。該草對(duì)高血壓、動(dòng)脈硬化、腦溢血后遺癥、腦血栓、腦梗死均有特殊療效。降壓草用法簡(jiǎn)便,堅(jiān)持每天當(dāng)茶(沸水浸泡)飲用,可降低血脂、血黏度等。由于其社會(huì)需求量大,且要求高品質(zhì),我們采用了組織培養(yǎng)對(duì)其進(jìn)行繁殖。降壓草的培育成功,填補(bǔ)了我國(guó)利用天然稀有植物降血壓、降血脂、防治心血管等多種疾病的空白。

        1 試驗(yàn)材料和方法

        1.1 試驗(yàn)材料

        選用白城市林業(yè)科學(xué)研究院選育的降壓草優(yōu)株2號(hào)新品種為試材。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 取材消毒與接種 在春季采剪生長(zhǎng)旺盛的嫩枝,沖洗干凈,切成帶腋芽的莖段,用70%的酒精消毒20~30s,無(wú)菌水沖洗2次;0.1%的HgCI2消毒6~8min,無(wú)菌水沖洗2次,接種于空白培養(yǎng)基。接種時(shí)將莖段兩端接觸消毒液的切口剪掉,外植體長(zhǎng)3.0~5.0cm,當(dāng)嫩鞘長(zhǎng)至1.5~2.0cm時(shí),轉(zhuǎn)至附加不同濃度的培養(yǎng)基中,觀察芽的誘導(dǎo)、增殖與生長(zhǎng)的規(guī)律。

        1.2.2 基本培養(yǎng)基選擇 將莖段分別在MS、1/2MS和B5培養(yǎng)基中附加6-BA1.0mgL-1+NAA0.1mgL-1的培養(yǎng)基中培養(yǎng)30d,觀察不同培養(yǎng)基對(duì)誘導(dǎo)外植體分化的影響,確定適宜培養(yǎng)基類型。

        1.2.3 愈傷組織的誘導(dǎo)和初代培養(yǎng) 將經(jīng)消毒的外植體接種于培養(yǎng)基中,在25±2℃條件下培養(yǎng)15 d左右,莖段邊緣切口處出現(xiàn)淡綠色愈傷組織。經(jīng)10d左右的誘導(dǎo)培養(yǎng),形成的愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽分化,分化培養(yǎng)20d,可見(jiàn)愈傷組織出現(xiàn)綠色小突起,繼續(xù)培養(yǎng)則分化成不定芽。為了解基本培養(yǎng)基、激素組合對(duì)腋芽萌發(fā)的影響,采用3因素3水平9個(gè)處理試驗(yàn),每瓶接種外植體1個(gè),多個(gè)處理接種12瓶,重復(fù)3次。

        表1 初代培養(yǎng)誘導(dǎo)叢生芽9處理

        2.3 繼代增殖培養(yǎng)基的選擇

        通過(guò)初代培養(yǎng)基而獲得的無(wú)菌苗,叢生芽的數(shù)量是有限的,需要繼代培養(yǎng)增殖來(lái)擴(kuò)大繁殖系數(shù)??紤]到細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素之間可能存在交互作用,為了更準(zhǔn)確詳細(xì)地研究叢生芽的增殖問(wèn)題,分別選取不同含量的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素進(jìn)行誘導(dǎo)分化,選擇采用3因素3水平試驗(yàn),觀察降壓草增殖培養(yǎng)結(jié)果。

        表2 繼代增殖培養(yǎng)誘導(dǎo)分化9處理

        2 結(jié)果與分析

        2.1 降壓草基本培養(yǎng)基的選擇及培養(yǎng)條件

        由表3可知,MS培養(yǎng)基褐變率最低,分化率最高,較適合降壓草的快繁。以MS為基本培養(yǎng)基,除特別說(shuō)明,均附加蔗糖20gL-1,瓊脂8gL-1,pH5.8。培養(yǎng)基在121℃下滅菌25min,培養(yǎng)溫度25℃,光照強(qiáng)度2 000lx,光照12h。

        表3 不同培養(yǎng)基對(duì)誘導(dǎo)外植體分化的影響

        2.2 降壓草愈傷組織的誘導(dǎo)和初代培養(yǎng)

        試驗(yàn)的9個(gè)處理中,處理5:MS+6-BA0.5 mgL-1+NAA0.1mgL-1+I(xiàn)AA0.2mgL-1,誘導(dǎo)的叢生芽較粗壯,分生系數(shù)較高,最適宜降壓草的叢生芽誘導(dǎo);處理1-3培養(yǎng)基基本不分生;處理4:MS+6-BA0.5mgL-1+I(xiàn)AA0.1mgL-1誘導(dǎo)的叢生芽細(xì),分生系數(shù)低;而處理6-9分生系數(shù)最高,但芽苗細(xì)弱,不適合進(jìn)一步培養(yǎng)。

        2.3 繼代增殖培養(yǎng)

        將上一階段誘導(dǎo)培養(yǎng)的叢生芽切成小塊繼代和增殖,降壓草剛增殖時(shí),嫩莖條增加的倍數(shù)比較低,幾次繼代后,倍數(shù)加大,壯苗增加。不同的6-BA和NAA對(duì)繼代增殖的影響效果是不同的。觀察降壓草增殖培養(yǎng)結(jié)果,處理6號(hào)MS+6-BA 0.8mg L-1+NAA0.5mgL-1+I(xiàn)BA0.1mgL-1的繼代效果最好。

        3 結(jié)論

        3.1 在初代培養(yǎng)階段,以改良的MS培養(yǎng)基適合降壓草外植體誘導(dǎo)分化。適宜的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mgL-1+NAA0.1mgL-1。

        3.2 在繼代與增殖培養(yǎng)階段,以改良的MS作為基本培養(yǎng)基,適宜的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0 mgL-1+NAA0.5mgL-1+I(xiàn)AA0.1mgL-1。利用細(xì)胞分裂素可以促進(jìn)腋芽的快速形成,從而使嫩莖獲得增殖,這是快繁的一個(gè)重要途徑。該途徑速率快,繁殖系數(shù)高,遺傳性狀穩(wěn)定。

        [1]陳正華.木本植物組織培養(yǎng)及其應(yīng)用[M].北京:高等教育出版社,1986:12-15

        [2]潭文澄.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京:中國(guó)林業(yè)出版社,1991:21-23

        [3]郭福生,陳淑華,王曼,等.文冠果組織培養(yǎng)技術(shù)[J].防護(hù)林科技,2015(3):47-48

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