覃宇奇，覃冠平，藍(lán)川，韋愛(ài)芳

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論著·臨床

乙醛脫氫酶1、CD133在鼻咽癌組織中的表達(dá)及臨床意義

覃宇奇，覃冠平，藍(lán)川，韋愛(ài)芳

目的 觀(guān)察乙醛脫氫酶1(ALDH 1)、CD133在鼻咽癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法 檢測(cè)鼻咽癌組織135例(研究組)以及正常組織97例(對(duì)照組)標(biāo)本中的ALDH 1、CD133表達(dá)情況，并統(tǒng)計(jì)分析其與鼻咽癌患者臨床資料的關(guān)系。結(jié)果 (1)研究組ALDH 1陽(yáng)性表達(dá)率為75.56%(102/135)，高于對(duì)照組的42.30%(42/97)(χ2=24.945，P<0.05)。ALDH 1評(píng)分在鼻咽癌患者性別、年齡、原發(fā)癌/轉(zhuǎn)移癌、未分化癌/分化型以及有無(wú)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不同臨床資料間無(wú)顯著性差異(t=0.543、0.034、0.022、0.356、0.382，P均>0.05)。(2)研究組CD133陽(yáng)性表達(dá)率為35.56%(48/135)，高于對(duì)照組的12.37%(12/112)(χ2=15.824P<0.05)。CD133的表達(dá)在患者原發(fā)癌/轉(zhuǎn)移癌、未分化癌/分化型不同資料間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.028、5.186，P均<0.05)，在患者性別、年齡以及有無(wú)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不同臨床資料間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.545、0.000、0.036，P>0.05)。結(jié)論 ALDH1與CD133在鼻咽癌患者中均有較高的陽(yáng)性表達(dá)率，ALDH1的臨床價(jià)值需進(jìn)一步研究，而CD133可能與鼻咽癌轉(zhuǎn)移、病理分型有密切的關(guān)系。

乙醛脫氫酶1；細(xì)胞表面黏附分子；鼻咽癌；腫瘤干細(xì)胞

新近的研究顯示腫瘤也存在腫瘤干細(xì)胞，其存在與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)有密切的關(guān)系[1]，并且常導(dǎo)致放化療效果達(dá)不到臨床期望。腫瘤干細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化與乙醛脫氫酶1(ALDH1)有密切的關(guān)系，后者是前者的必需物質(zhì)[2]。細(xì)胞表面黏附分子(CD133)也是近年來(lái)研究較多的腫瘤干細(xì)胞的分子標(biāo)志物。越來(lái)越多的證據(jù)顯示二者參與了多種腫瘤的發(fā)病、發(fā)展，但其與鼻咽癌的關(guān)系目前研究甚少，本研究通過(guò)檢測(cè)其在鼻咽癌中的表達(dá)，以明確其與鼻咽癌的關(guān)系，并嘗試分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 病理樣本來(lái)源于2004年6月—2014年5月廣西壯族自治區(qū)江濱醫(yī)院病理科和河池市人民醫(yī)院病理科的活檢標(biāo)本，經(jīng)病理證實(shí)為鼻咽癌者135例納入本研究(研究組)，其中鼻咽部原發(fā)癌112例(未分化癌76例、分化型癌36例，伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例)，頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌23例；135例患者中男96例，女39例，年齡25～82(52.1±13.5)歲。選擇同期病理科證實(shí)為鼻咽慢性炎性反應(yīng)黏膜活檢標(biāo)本97份為對(duì)照組，男71例，女26例，年齡24～80(51.6±12.7)歲。2組標(biāo)本來(lái)源患者的性別、年齡比較無(wú)顯著性差異(P<0.05)，具有可比性。

1.2 標(biāo)本處理 標(biāo)本送病理科后均經(jīng)10%甲醛固定，并經(jīng)常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片以及脫蠟等處理，切片標(biāo)準(zhǔn)厚度為4 μm，采用Envision免疫學(xué)組織化學(xué)二步法進(jìn)行檢測(cè)。將已完成脫蠟至水的標(biāo)本先使用0.01 mol/L檸檬酸緩沖液高溫、高壓修復(fù)3 min，之后使用3%H2O2浸泡10 min以阻斷細(xì)胞內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。上述步驟完成后采用PBS洗滌，每次3 min，反復(fù)洗滌3次。滴入ALDH1[為ALDH1兔多克隆濃縮型抗體(BA3672)，購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司]和已經(jīng)稀釋為1∶100的CD133一抗[為CD133兔多克隆濃縮型抗體(BA3992)，購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司]，陰性對(duì)照組使用pH 7.4的0.01 mol/L PBS液代替一抗。滴注完畢后將標(biāo)本置于37℃暖箱中孵育60 min，使用PBS液洗滌，每次3 min，反復(fù)3次之后滴入HRP二抗，后將標(biāo)本再次置于37℃暖箱中孵育30 min，再次使用PBS液洗滌，每次3 min，反復(fù)3次。最后標(biāo)本使用DAB顯色、蘇木精復(fù)染、脫水、封片等程序。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 ALDH1： 依據(jù)切片中細(xì)胞染色的程度評(píng)分，評(píng)估顯色深淺和顯色范圍2個(gè)指標(biāo)。(1)顯色深淺評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：未見(jiàn)顯色 0分；淺黃色 1分；棕黃色 2分；棕褐色 3分。(2)顯色范圍評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：顯色部分占細(xì)胞比例0～10% 0分；11%～30% 1分；31%～60% 2分；61%～100% 3分。顯色深淺和顯色范圍評(píng)分之和0～2分為ALDH1陰性(-)，2項(xiàng)之和≥3分為ALDH1陽(yáng)性(+)。

1.3.2 CD133： 切片染色未見(jiàn)顯色為CD133陰性(-)，顯色為CD133陽(yáng)性(+)。

2 結(jié) 果

2.1 ALDH1、CD133表達(dá) 研究組ALDH1陽(yáng)性表達(dá)率為75.56%(102/135)，高于對(duì)照組的42.30%(42/97)(χ2=24.945，P<0.05)。研究組CD133陽(yáng)性表達(dá)率為35.56%(48/135)，高于對(duì)照組的12.37%(12/97)(χ2=15.824，P<0.05)。

2.2 ALDH1、CD133表達(dá)的臨床特征 ALDH 1的表達(dá)在患者性別、年齡、原發(fā)癌/轉(zhuǎn)移癌、未分化癌/分化型以及有無(wú)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不同臨床資料間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。CD133的表達(dá)在患者原發(fā)癌/轉(zhuǎn)移癌、未分化癌/分化型不同資料間比較有顯著性差異(P<0.05)，而在患者性別、年齡以及有無(wú)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不同臨床資料間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

3 討 論

近年來(lái)鼻咽癌的發(fā)病率呈逐年增高的趨勢(shì)[3]，但對(duì)其治療目前并不十分樂(lè)觀(guān)，即使是放化療技術(shù)明顯進(jìn)步的情況下，晚期鼻咽癌的5年生存率仍很低，最樂(lè)觀(guān)的數(shù)據(jù)也不足40%[4]，遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足醫(yī)患雙方的期望。近年來(lái)對(duì)惡性腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞對(duì)放化療不敏感可能與腫瘤組織中存在腫瘤干細(xì)胞(TSC)有關(guān)[5]。

表1 ALDH1、CD133在鼻咽癌患者中表達(dá)的臨床特征分析

TSC具備干細(xì)胞的某些特性，表現(xiàn)在存在自我分化多重潛能、自我修復(fù)更新等能力，其與腫瘤的增長(zhǎng)、復(fù)發(fā)，甚至是轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)系的觀(guān)點(diǎn)已被較為廣泛的認(rèn)可[6]。由此可見(jiàn)，抑制TSC的活性甚至將其殺死后惡性腫瘤的遠(yuǎn)期生存率有望得到改善，這就需要深入研究TSC的特異性腫瘤標(biāo)記物，了解其生長(zhǎng)特點(diǎn)。本研究所檢測(cè)的ALDH1和CD133就是目前研究較多的腫瘤標(biāo)記物，但它們與鼻咽癌的關(guān)系目前研究甚少，本研究嘗試在這一領(lǐng)域做出努力。

ALDH1是將細(xì)胞內(nèi)乙醛氧化為乙酸的溶質(zhì)酶，是維持細(xì)胞生物活性不可或缺的物質(zhì)，這一點(diǎn)在TSC中也同樣成立[7]。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，ALDH1可作為肺癌、乳腺癌、胃癌、白血病等的功能性腫瘤標(biāo)記物[5]，并且研究顯示ALDH 1陽(yáng)性癌細(xì)胞具有更高的生長(zhǎng)、增殖、分化、轉(zhuǎn)移能力[8]。本研究中，135例鼻咽癌組織標(biāo)本中檢出陽(yáng)性102例，檢出率高達(dá)75.56%，遠(yuǎn)高于正常組織，提示其與鼻咽癌的發(fā)病存在密切的關(guān)系，檢測(cè)該標(biāo)記物有助于臨床診斷。分析ALDH 1與患者臨床資料的關(guān)系，顯示在2組性別、年齡、原發(fā)癌/轉(zhuǎn)移癌、未分化癌/分化型以及有無(wú)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等資料間均未顯示出顯著的差異性，這一結(jié)果提示ALDH 1作為鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物的特征性并不顯著，本研究不能肯定其鼻咽癌特異性腫瘤標(biāo)志物的地位。關(guān)于A(yíng)LDH1在鼻咽癌檢測(cè)中的意義目前爭(zhēng)論頗多，差異也較為明顯，需進(jìn)一步研究[5，9]。

CD133也是被廣泛研究的腫瘤標(biāo)志物，其最早于1997年在小鼠神經(jīng)上皮干細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)而被認(rèn)識(shí)，目前的研究顯示CD133在腦癌、喉癌、結(jié)腸癌、肺癌等中也是特異性的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物[10]，在鼻咽癌領(lǐng)域的研究[11]顯示CD133陽(yáng)性癌細(xì)胞具有很強(qiáng)的致瘤能力，且自我修復(fù)、分化能力較強(qiáng)。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)CD133與性別、年齡、腫瘤大小關(guān)系不大，但與病理分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度等關(guān)系密切[12]，CD133 陽(yáng)性細(xì)胞的檢出往往意味著腫瘤惡性程度較高，存在轉(zhuǎn)移，預(yù)后不容樂(lè)觀(guān)[13]。本研究中，135例鼻咽癌組織標(biāo)本中檢出陽(yáng)性48例，陽(yáng)性檢出率35.56%，雖然不及ALDH1的陽(yáng)性檢出率高，但其在轉(zhuǎn)移癌CD133檢出率為73.9%，而在原發(fā)癌中檢出率為27.7%，提示CD133陽(yáng)性時(shí)多意味著腫瘤有更強(qiáng)的侵襲性，這與國(guó)外的研究一致[13]。CD133在未分化癌中陽(yáng)性檢出率為21.1%，在分化型中檢出率為41.7%，雖然結(jié)果顯示這種差異具有顯著性，但均非高度表達(dá)，分化型中陽(yáng)性檢出也不足50%，以此為據(jù)將其作為反映腫瘤分化程度的特異性指標(biāo)仍然十分牽強(qiáng)。有文獻(xiàn)顯示，CD133能否作為反映腫瘤分化程度的特異性指標(biāo)物仍未見(jiàn)明確定論[14～16]，但考慮到未分化型/分化型中CD133表達(dá)存在顯著性差異，筆者考慮CD133有作為反映鼻咽癌病理分化程度特異性指標(biāo)的潛力，但仍需繼續(xù)研究。需要反思的是有報(bào)道顯示CD133在分化型鼻咽癌中陽(yáng)性表達(dá)率超過(guò)65%，這比本研究中的41.7%高出甚多，分析這種差異可能與本研究樣本量較小有關(guān)，同時(shí)需重視標(biāo)本采集的科學(xué)性?？傊?，CD133可能與鼻咽癌轉(zhuǎn)移、病理分型有密切的關(guān)系，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

1 王海麗,文忠,申聰香,等.人鼻咽癌CD133+干細(xì)胞的生物學(xué)特性及意義人鼻咽癌CD133+干細(xì)胞的生物學(xué)特性及意義[J].中國(guó)組織工程研究,2012,16(6):1007-1010.

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Expression of aldehyde dehydrogenase 1, CD133 in nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance

QINYuqi*,QINGuanping,LANChuan,WEIAifang.*DepartmentofPathology,JiangbinHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Guangxi,Nanning530021,China

Objective To observe the expression of aldehyde dehydrogenase 1 (ALDH-1), CD133 in nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance.Methods Nasopharyngeal carcinoma (NPC) of 135 cases (study group) and normal tissue of 97 cases (control group) were detected with the ALDH-1 and CD133 expression, and statistical analyzed its relationship with clinical data for the patients with NPC.Results (1) Study group’s ALDH-1 positive expression rate was 75.56% (102/135), which was higher than the control group’s 42.30%(42/97) (χ2=24.945,P<0.05). ALDH-1 score in nasopharyngeal carcinoma patients’ gender, age, primary carcinoma / metastatic carcinoma, undifferentiated/ differentiation carcinoma and cervical lymph node metastasis did not show significant difference (t=0.543,t=0.034,t=0.022,t=0.356,t=0.382,P>0.05). (2) Study group’s CD133 expression rate was 35.56%(48/135),which was higher than in the control group 12.37%(12/112) (χ2=15.824,P<0.05). The expressions of CD133 in patients with primary cancer / metastatic carcinoma, undifferentiated / differentiated carcinoma have significant difference (χ2=15.028,χ2=5.186,P<0.05). Gender, age, and with or without cervical lymph node metastasis showed no significant difference (χ2=1.545,χ2=0.000,χ2=0.036,P>0.05).Conclusion ALDH-1 and CD133 in patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC) had higher positive expression rate, ALDH-1’s clinical value needs to be further studied, and CD133 may have close relationship with nasopharyngeal carcinoma metastasis, pathological type.

Aldehyde dehydrogenase 1; Cell adhesion molecules; Nasopharyngeal carcinoma; Tumor stem cell

530021 南寧，廣西壯族自治區(qū)江濱醫(yī)院病理科(覃宇奇)； 547000 廣西河池市人民醫(yī)院病理科(覃冠平)， 腫瘤科(藍(lán)川，韋愛(ài)芳)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.06.012

2015-02-05)