劉紅

哈藥集團(tuán)生物工程有限公司

高效液相檢測(cè)注射用甲硫氨酸維B1雜質(zhì)的方法建立

劉紅

哈藥集團(tuán)生物工程有限公司

目的：采用高效液相色譜法建立注射用甲硫氨酸維B1雜質(zhì)的檢查方法。方法：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；流動(dòng)相為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.005mol/L庚烷磺酸鈉，磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8）-甲醇（85：15）；檢測(cè)波長(zhǎng)為201nm；流速為1.0ml/ min。結(jié)果：本方法專(zhuān)屬性試驗(yàn)、最小檢測(cè)限試驗(yàn)、耐用性試驗(yàn)均符合方法學(xué)試驗(yàn)要求。結(jié)論：該測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高、可靠、操作性強(qiáng)，可作為注射用甲硫氨酸維B1的有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定，以控制其質(zhì)量。

高效液相色譜法；甲硫氨酸；維B1；雜質(zhì)

甲硫氨酸維B1屬肝病輔助用藥，主要用于改善肝臟機(jī)能，對(duì)多數(shù)肝臟疾病，包括急慢性肝炎、肝硬化以及脂肪肝有一定療效；也可用于肝內(nèi)膽汁郁積，酒精、巴比妥類(lèi)、磺胺類(lèi)藥物中毒時(shí)的輔助治療等。本文采用HPLC法對(duì)其可能產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行分離測(cè)定，該方法可作為注射用甲硫氨酸維B1的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，其方法國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀；MS105型精密電子天平（梅特勒）；注射用甲硫氨酸維B1（規(guī)格：甲硫氨酸100mg與維生素B1 10mg。自制，批號(hào)：20141001、20141002、20141003)；甲醇、磷酸為色譜純，磷酸二氫鉀、庚烷磺酸鈉均為分析純，水為注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Dikma C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.005mol/L庚烷磺酸鈉，磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8）-甲醇（85：15）；流速：1.0ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：201nm；進(jìn)樣量：20μl。

2.2 檢查方法

取本品適量，精密稱(chēng)定，約相當(dāng)于甲硫氨酸50mg，置50ml量瓶中，加水約30ml，超聲振搖使溶解，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。作為對(duì)照溶液。分別精密量取供試品溶液及對(duì)照溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；供試品溶液色譜圖中除輔料峰外，單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.5倍（0.5%）；雜質(zhì)峰面積的總和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的2倍（2.0%）。

2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn)及吸收波長(zhǎng)的確定

照2.2檢查方法中供試品溶液配制方法，制得供試品溶液。另取本品處方制劑的空白輔料適量，按上述方法制備成空白輔料溶液。

酸破壞溶液：取本品，加水適量使其溶解，再加入0.1mol/L鹽酸溶液1ml，室溫放置120min后，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，按上述方法稀釋制備成酸破壞溶液。同時(shí)不加本品制成空白酸破壞溶液。堿破壞溶液：取本品，加水適量使其溶解，再加入0.1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置120min后，用0.1mol/L鹽酸溶液中和至中性，按上述方法稀釋制備成堿破壞溶液。同時(shí)不加本品制成空白堿破壞溶液。氧化破壞溶液：取本品，加水適量使其溶解，再加入0.5%過(guò)氧化氫溶液1ml，室溫放置30min后，按上述方法稀釋制備成氧化破壞溶液。同時(shí)不加本品制成氧化破壞溶液。高溫破壞溶液：取本品，置于100℃條件加熱3天后，按上述方法稀釋制備成高溫破壞溶液。光照破壞溶液：取本品，置于4500± 500lx光照條件下照射15天后，按上述方法稀釋制備成光照破壞溶液。

取上述溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。同時(shí)用二極管陣列檢測(cè)器在200nm～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。

結(jié)果表明：本有關(guān)物質(zhì)檢查方法條件下，空白輔料溶液不干擾主峰及雜質(zhì)峰的檢出。能夠有效檢出各破壞性試驗(yàn)溶液中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。且降解產(chǎn)物峰均能與主成分峰達(dá)到基線分離，表明本方法對(duì)相關(guān)降解產(chǎn)物檢查的專(zhuān)屬性較好。通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器掃描，本品有關(guān)物質(zhì)檢查波長(zhǎng)確定為201nm。

2.4 最小檢測(cè)限考察

取本品適量，照2.2檢查方法中供試品溶液配制方法，制得供試品溶液，并進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)礄z查方法色譜條件進(jìn)行檢查。結(jié)果表明，當(dāng)信噪比約3：1時(shí)，該檢查方法最小檢測(cè)限為12ng。

2.5 耐用性試驗(yàn)

取本品適量，按檢查方法色譜條件，分別變動(dòng)條件為流速± 0.2ml/min，柱溫±5℃，考察各變動(dòng)條件下有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果變化情況。

結(jié)果表明：有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果均無(wú)明顯變化，該有關(guān)物質(zhì)檢查方法耐用性良好。

2.6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批樣品，照2.2檢查方法中供試品溶液配制方法，制得供試品溶液。參照檢查方法色譜條件測(cè)定，分別于0,1,2,4,8h，取20μl進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果甲硫氨酸和維生素B1的峰面積基本不變，雜質(zhì)情況無(wú)明顯變化。表明該檢測(cè)溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 有關(guān)物質(zhì)檢查

取本品，按“2.1”、“2.2”項(xiàng)下方法制備溶液并進(jìn)行檢查。結(jié)果三批供試品有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果見(jiàn)下表

由上表可知，三批供試品中有關(guān)物質(zhì)均符合規(guī)定。

3.討論

綜上所述，本檢查方法是檢查注射用甲硫氨酸維B1雜質(zhì)的一個(gè)準(zhǔn)確、可靠、操作性強(qiáng)的方法，對(duì)于該品種的雜質(zhì)控制及產(chǎn)品穩(wěn)定性研究有一定的參考意義。

[1]甲硫氨酸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).中國(guó)藥典2010年版二部[S].157.

[2]紀(jì)宇,刁勇,王晨霞.高效液相色譜法測(cè)定甲硫氨酸維B1注射液的含量[J].中國(guó)生化藥品雜志,2005,26(4)：228-229.

[3]黃榕珍.高效液相色譜法測(cè)定甲硫氨酸維B1注射液中甲硫氨酸和維生素B1的含量[J].海峽藥學(xué)，2005,17(5)：42-45.

劉紅（1978-），女，黑龍江哈爾濱市，本科，哈藥集團(tuán)生物工程有限公司，質(zhì)量檢測(cè)中心，化驗(yàn)員，工程師。