孟 嬌 李麗民 劉志紅 曾 科，

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腎臟特異性microRNA的鑒定及功能預(yù)測

孟 嬌1李麗民2劉志紅1曾 科1，2

目的：應(yīng)用 Solexa 技術(shù)分析和篩選出腎臟特異性表達(dá)microRNA (miRNA)，同時(shí)利用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測特異表達(dá) miRNA 的靶基因并對其功能進(jìn)行初步分析，探討特異表達(dá)miRNA在腎臟中的功能。 方法：選取8周齡C57/B6 雄性小鼠，取其全身11個(gè)組織器官，提取總RNA并從中分離小分子量RNA進(jìn)行Solexa測序，篩選出相較其他組織器官，在腎臟中表達(dá)最為特異的miRNA；然后，利用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)技術(shù)對篩選出的腎臟特異性表達(dá)miRNA進(jìn)一步驗(yàn)證；最后，通過生物信息學(xué)技術(shù)對其進(jìn)行靶基因預(yù)測，并對交集的基因集合分別進(jìn)行GO分析和KEGG 通路分析。 結(jié)果：Solexa測序結(jié)果顯示在正常小鼠中miR-196a和miR-196b在腎臟最特異性高表達(dá)。qRT-PCR驗(yàn)證了miR-196a和miR-196b在小鼠11個(gè)組織器官中的表達(dá)分布情況，定量結(jié)果與測序結(jié)果相一致。TargetScan6.2和 PicTar兩個(gè)軟件預(yù)測到交集靶基因74個(gè)。GO分析顯示miR-196a/b的預(yù)測靶基因集合顯著富集在血小板源生長因子結(jié)合活性、轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性、細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)組成等分子功能上并參與調(diào)控代謝、發(fā)育等生物學(xué)過程(P<0.01)。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路顯著富集于促性腺激素釋放激素信號(hào)通路、細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用等多個(gè)信號(hào)通路和腦膠質(zhì)瘤、前列腺癌等疾病通路中(P<0.05)。 結(jié)論：miR-196a/b在腎臟中特異性高表達(dá)，靶基因功能廣泛，與細(xì)胞代謝、生長發(fā)育等密切相關(guān)。

腎組織 Solexa 測序 miR-196a miR-196b

MicroRNA (miRNA)是一類廣泛存在于真核生物中的長約19～23個(gè)核苷酸的小分子單鏈非編碼RNA，其通過對靶基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控[1]，從而參與生物個(gè)體發(fā)育、組織分化、細(xì)胞增殖和凋亡、能量代謝、免疫、神經(jīng)內(nèi)分泌、癌癥等眾多生命過程[2-6]。許多miRNAs 的表達(dá)都有一定的組織特異性，例如miR-122主要在肝臟中特異性表達(dá)[7,8]，miR-143 為脂肪特異性 miRNA[9]， miR-133在肌肉中特異性表達(dá)[10]。這些在組織中特異性高表達(dá)的miRNA，在組織器官功能中發(fā)揮著十分重要的調(diào)控作用。例如，肝特異性miR-122，在抑制肝腫瘤發(fā)生和調(diào)控脂質(zhì)代謝的過程中發(fā)揮著十分重要的作用[7,11]。因此，明確動(dòng)物組織中特異性高表達(dá)的miRNA并對其功能進(jìn)行分析，對理解這些組織器官的生物學(xué)過程有十分重要的意義。但是，目前對于腎臟中特異性miRNA的表達(dá)情況還缺乏明確的分析。本研究通過Solexa測序分析和實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)的方法篩選并鑒定出腎臟中特異性高表達(dá)的miRNAs，并對其靶基因及可能參與調(diào)控的生物學(xué)信號(hào)通路進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，為進(jìn)一步研究miRNA在腎臟中的生物學(xué)功能提供理論基礎(chǔ)。

對象和方法

研究對象 3只均為8周齡的C57/B6雄性小鼠，5%的戊巴比妥那麻醉后，進(jìn)行心臟灌流，將小鼠全身血液灌出后，取其全身11處組織器官，包括大腦、小腦、心、肝、脾、肺、胃、胰腺、腎、小腸、大腸。將取出的組織立即投入液氮后，于-80℃保存。

總RNA 提取 按照 Trizol (Invitrogen， Gaithersburg， MD， USA)法提取所有組織的總 RNA，用NANODROP2000 紫外分光光度計(jì)(Nanodrop Nechnologies，Wilmington，DE)測定濃度后，用 Agilent BioAnalyzer 2100(Agilent Technologies，Palo Alto，CA)進(jìn)行質(zhì)量檢測，總RNA于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

Solexa測序分析 將3個(gè)小鼠的相同組織器官的總 RNA進(jìn)行混合，制備成11個(gè)小RNA測序文庫的原始材料。Solexa測序在深圳華大基因科技有限公司完成。首先，采用 15%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)(PAGE)從總 RNA 中分離小分子量(15～30 nt) RNA，純化后對小RNA 連接 3′和 5′接頭。然后運(yùn)用SuperScriptⅡ反轉(zhuǎn)錄酶將連接有5′和3′接頭的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成 cDNA，并使用下列程序進(jìn)行 PCR擴(kuò)增：98℃預(yù)變性 30s; 98℃變性10s、60℃退火30s、72℃延伸 30s，17 個(gè)循環(huán)；72℃ 延伸10 min；4℃保存。然后進(jìn)行文庫檢測、DNA的成簇?cái)U(kuò)增和上機(jī)測序。最后進(jìn)行生物信息組裝和分析。將測序獲得的各組織器官的total reads (Solexa 測序所得的序列總數(shù))進(jìn)行去除低質(zhì)量、去除污染、去除接頭等處理，獲得clean reads (分析處理后的干凈序列)，然后統(tǒng)計(jì)序列總數(shù)、種數(shù)和長度，最后獲得全部有效序列用作后續(xù)分析。首先將有效序列比對到 GeneBank、Repeat sequence、Rfam數(shù)據(jù)庫，去除mRNA、rRNA、tRNA、snoRNA、snRNA等非編碼小RNAs。最后，將剩余序列與 miRBase 數(shù)據(jù)庫 (Release 20.0)中已收錄的哺乳動(dòng)物中已知的miRNA的成熟序列或前體序列進(jìn)行比較，從而鑒定樣品中成熟 miRNA 的表達(dá)量。

qRT-PCR驗(yàn)證 腎臟特異性高表達(dá)miRNA的驗(yàn)證采用qRT-PCR的方法?？俁NA 在AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶(TaKaRa)和莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物(Applied Biosystems)的作用下逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。10 μl逆轉(zhuǎn)錄體系：5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液 (TaKaRa) 2 μl，AMV逆轉(zhuǎn)錄酶 (TaKaRa) 0.5 μl，dNTPs (TaKaRa，10 mmol/L) 1 μl，莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物(Applied Biosystems)1 μl，RNA 2 μl (1 μg)，DEPC水 3.5 μl。反應(yīng)條件為：16 ℃/30 min，42℃/30 min，85℃/5 min。將獲得的cDNA于-20 ℃ 中保存?zhèn)溆?。qRT-PCR在ABI 7900 HT Fast 熒光定量PCR儀(Applied Biosystems)上進(jìn)行。20 μl的定量PCR反應(yīng)體系為：10×PCR緩沖液(TaKaRa)2 μl， dNTPs(TaKaRa，10 mmol/L) 0.4 μl，MgCl2 (TaKaRa，25 mmol/L)1.2 μl，Taq酶 (TaKaRa) 0.3 μl，TaqMan探針(Applied Biosystems)0.33 μl，水 14.77 μl， cDNA 1 μl。反應(yīng)條件為：95℃/5 min， 95℃/15s，60℃/1 min進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。所有的PCR反應(yīng)都有三個(gè)副孔。以U6 snRNA作為內(nèi)參基因，相對表達(dá)量結(jié)果采用2-ΔCT法進(jìn)行計(jì)算分析。

miRNAs靶基因預(yù)測及功能分析 利用 TargetScan 6.2(http://www.targetscan.org/)和 PicTar ( http://pictar.mdc-berlin.De)兩種方法計(jì)算預(yù)測 miR-196a/b 的靶基因，將其交集進(jìn)行后續(xù)的生物信息學(xué)分析。采用GO(http://www.geneontology.org /)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO分析，并根據(jù)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)方法(P<0.01)篩選顯著性差異的分類。采用 DAVID 數(shù)據(jù)庫( http://david.abcc.ncifcrf.gov/)對 miR-196a/b進(jìn)行 KEGG 通路分析。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 不同組織器官表達(dá)量差異顯著性檢驗(yàn)采用 SPSS 19.0的獨(dú)立樣本的 T-test 法。GO注釋的顯著性分析是利用超幾何檢驗(yàn)計(jì)算顯著性程度P值，以P<0．01為顯著性閾值分別得到相對于背景具有統(tǒng)計(jì)意義的高頻率注釋。生物通路富集分析是通過Fisher Exact Test計(jì)算P值，以P<0．05為顯著性閾值得到基因集合相對于背景具有統(tǒng)計(jì)意義的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及疾病通路。

結(jié) 果

Solexa測序結(jié)果分析 首先對小鼠腎組織的測序結(jié)果分析后發(fā)現(xiàn)，在腎組織中表達(dá)量位于前20位的miRNAs依次為let-7b,miR-143,miR-196b,miR-21,miR-378,miR-29a,miR-27b,miR-140*,miR-148a,miR-146a,miR-30a,miR-200a,miR-148b,miR-872,miR-429,miR-196a,miR-30e,miR-151-3p,miR-200b,miR-30c-2*，其在腎臟miRNA的百分比如圖1所示。這些miRNAs的表達(dá)量(拷貝數(shù))都高于10 000，說明這些miRNAs在小鼠腎組織中都是表達(dá)量較高的miRNAs。為了篩選出在腎臟特異性高表達(dá)的miRNAs,我們檢查了上述20個(gè)腎臟高表達(dá)的miRNAs在其他10個(gè)組織器官(心、肝、脾、肺、胃、大腦、小腦、胰腺、小腸、結(jié)腸)中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在所測的11個(gè)組織器官中miR-196a和miR-196b大多在腎臟中出現(xiàn)，分別占61.69%和62.24%，其次是結(jié)腸，表達(dá)量分別占總量的33.26%和33.14%(圖2A、B)，并且測序結(jié)果表明miR-196b在腎臟中含量是miR-196a的11.26倍。為了保證測序和分析結(jié)果的可靠性，我們同時(shí)分析了目前被認(rèn)為是肝臟特異性高表達(dá)的miR-122在各組織器官中表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-122在肝臟中最為富集，占到了所測組織表達(dá)量的99.27%，而在其他組織器官中表達(dá)量都極低(圖2C)，這和已發(fā)表的實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一致性[7,8]。

qRT-PCR驗(yàn)證 對miR-196a/b在11個(gè)組織器官中表達(dá)水平進(jìn)行了qRT-PCR驗(yàn)證，以U6為內(nèi)參，分別計(jì)算出miR-196a和miR-196b在各組織器官中的相對表達(dá)量。如圖3所示，和其他10個(gè)組織器官相比，miR-196a和miR-196b在腎臟中的表達(dá)量最高，并且miR-196b的含量高于miR-196a，這和Solexa的測序結(jié)果一致。

圖1 腎臟中表達(dá)豐度位于前20位的microRNAs

圖2 miR-196a/b以及miR-122在小鼠全身所測各組織中的表達(dá)分布

圖3 qRT-PCR分析小鼠11個(gè)組織器官中miR-196a/b的相對表達(dá)量

miRNA196a/b的靶基因預(yù)測 miR-196a和miR-196b的序列僅有一個(gè)堿基之差，且其種子序列相同，在用軟件預(yù)測靶基因時(shí)發(fā)現(xiàn)，其預(yù)測結(jié)果具有一致性，因此后續(xù)分析將miR-196a和miR-196b歸為一類進(jìn)行分析。TargetScan預(yù)測的靶基因?yàn)?95個(gè)，PicTar為162個(gè)，將這兩個(gè)數(shù)據(jù)庫的計(jì)算結(jié)果取交集后共獲得74個(gè)靶基因。

miR-196a/b預(yù)測靶基因的 GO分類富集分析 對基因集合中的74個(gè)靶基因 進(jìn)行 GO 注釋描述、GO 富集分析。通過GO注釋描述得到63個(gè)基因的GO 細(xì)胞組分注釋信息、65個(gè)基因的GO分子功能注釋信息以及64個(gè)基因的GO生物學(xué)過程注釋信息。進(jìn)一步對這些基因的GO注釋信息進(jìn)行富集分析，結(jié)果顯示miR-196a/b靶基因集合分別富集在血小板源生長因子結(jié)合活性、生長因子結(jié)合活性、轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性及細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分等分子功能上和骨骼系統(tǒng)形態(tài)發(fā)生/發(fā)育、代謝調(diào)控、發(fā)育進(jìn)程等生物學(xué)過程中(P<0.01)(表1)。

miR-196a/b預(yù)測靶基因的生物通路富集分析 利用DAVID數(shù)據(jù)庫對基因集合中的74個(gè)基因進(jìn)行生物通路富集分析結(jié)果顯示， 在KEGG代謝通路數(shù)據(jù)庫中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路顯著富集于胰島素信號(hào)通路、黏著斑信號(hào)通路、細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用信號(hào)通路、促性腺激素釋放激素信號(hào)通路等信號(hào)通路和腦膠質(zhì)瘤、前列腺癌等疾病通路中(P<0.05)(表2)。

表1 miR-196a/b預(yù)測靶基因的GO生物學(xué)過程分類

表2 miR-196a/b預(yù)測靶基因KEGG通路數(shù)據(jù)庫富集分析結(jié)果

討 論

隨著對miRNA越來越廣泛和深入的研究，miRNA在細(xì)胞分化、組織發(fā)育、疾病調(diào)控中的強(qiáng)大作用也越來越多的被人們所認(rèn)識(shí)。miRNA在序列、結(jié)構(gòu)、豐度和表達(dá)方式上具有多樣性，在不同的組織及在組織的不同發(fā)育階段，miRNA的表達(dá)水平不同。研究表明，某些miRNAs，如miRNA-122，miR-143等這些被認(rèn)為是在組織中特異性表達(dá)的miRNAs，都在組織器官正常功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮十分重要的作用。目前，在腎臟中，尚無明確的有關(guān)腎臟特異性高表達(dá)miRNA的報(bào)道，因此分析不同組織器官miRNA的表達(dá)情況，篩選出腎臟特異性高表達(dá)的miRNA，可以幫助我們更好的研究miRNAs在腎臟中的功能。

本研究運(yùn)用Solexa高通量測序技術(shù)對小鼠11個(gè)組織器官中的小RNA進(jìn)行了測序，獲取miRNA表達(dá)譜，通過分析篩選出在腎臟中特異性高表達(dá)的兩個(gè)miRNAs，分別為miR-196a和miR-196b，同時(shí)采用qRT-PCR的方法對測序結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果與測序檢測結(jié)果一致。隨后，對這些miRNAs進(jìn)行靶基因預(yù)測和功能分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-196a/b參與多種細(xì)胞代謝和功能調(diào)控。

關(guān)于不同組織器官中miRNAs的表達(dá)分布情況已有不少研究。同時(shí)檢測miRNAs表達(dá)水平的技術(shù)方法也有很多種，比如高通量測序、Northern分析、基因芯片分析和qRT-PCR等。本研究中采用的是Solexa高通量測序和qRT-PCR相結(jié)合的技術(shù)。Solexa作為第二代高通量測序技術(shù)具有高靈敏度、精確性及重復(fù)性[12]。相較于基因芯片是針對已知的數(shù)據(jù)庫設(shè)計(jì)探針進(jìn)行雜交，高通量測序的優(yōu)勢在于可直接對任何物種進(jìn)行包括未知基因在內(nèi)的全基因組表達(dá)譜分析，其發(fā)現(xiàn)能力和尋找新的信息的能力從本質(zhì)上高于芯片技術(shù)[13]。同時(shí)，我們又結(jié)合具有高特異性和重復(fù)性的qRT-PCR探針法[14]對Solexa分析結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，保證了腎臟特異性miRNA的篩選結(jié)果的可靠性。

和現(xiàn)有的有關(guān)腎臟miRNA的表達(dá)分布情況的研究相比較，我們的研究結(jié)果與其有一定的一致性，同時(shí)也有自己的獨(dú)特性。Landgraf P 等[15]通過對小鼠、大鼠腎組織及人類足細(xì)胞中 的miRNA進(jìn)行了廣泛的克隆和測序，研究結(jié)果表明miR-196a/b、miR-10a、miR-200a和miR-335 在腎組織較富集。而我們的研究對哪一種miRNA是相較于其他miRNA在腎臟中特異性表達(dá)進(jìn)行了更具體的分析。我們不僅篩選出在腎組織中比較富集的miRNAs，此外，還對這些miRNAs分別在腎臟中的富集程度以及這些miRNAs分別在所測小鼠11組織器官中表達(dá)分布情況進(jìn)行了分析比較，從而篩選出在腎臟中最特異性表達(dá)的miR-196a/b。在實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性方面，我們不僅驗(yàn)證了已經(jīng)公認(rèn)的在肝臟中特異性表達(dá)的miR-122，同時(shí)還將miR-122表達(dá)分布情況作為陽性參照，對測序結(jié)果進(jìn)行了qRT-PCR的驗(yàn)證，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的特異性及可靠性。但對miR-196a/b在腎臟組織和固有細(xì)胞中的表達(dá)分布情況，還需要我們用后續(xù)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析驗(yàn)證。

miR-196a/b在物種之間具有高度的保守性，且在腎臟中如此特異性的高表達(dá)，這些提示我們miR-196a/b在腎臟中發(fā)揮著極其重要的調(diào)控作用。為了更好的研究miR-196a/b在腎臟中的功能作用，我們首先對其可能的調(diào)控的靶基因進(jìn)行了預(yù)測。TargetScan 和PicTar預(yù)測靶基因預(yù)測的精確度較高，本實(shí)驗(yàn)同時(shí)采用這兩種預(yù)測算法進(jìn)行了miR-196a/b 靶基因的預(yù)測，然后取其交集，提高了預(yù)測結(jié)果的可靠性同時(shí)也減少了假陽性率[9,16,17]。但這種方法也使預(yù)測的靶基因數(shù)大大降低，對全面的研究miR-196a/b在腎臟中的功能可能帶來影響。

本文通過對靶基因交集進(jìn)行了GO功能注釋、GO富集分析和KEGG信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路富集分析，從多層次、多角度的探索miR-196a/b可能參與的功能調(diào)控。分析結(jié)果表明， 靶基因主要富集在代謝過程、 生物調(diào)控及發(fā)育等生物過程中。靶基因在發(fā)育和細(xì)胞生物合成等功能過程中的集中，表明其可能在機(jī)體發(fā)育和形態(tài)發(fā)生中起著重要調(diào)控作用，因此miR-196a/b對發(fā)育的調(diào)控作用也是不容忽視的。已有研究結(jié)果表明miRNA196a/b通過作用于HOX基因家族對胚胎發(fā)育起著十分重要的調(diào)控作用[18]，這也為我們在研究腎臟發(fā)育方面提供了新的思路。在KEGG通路分析中我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用為miR196a/b顯著富集的信號(hào)通路之一，而Honda等[19]的研究也發(fā)現(xiàn)miR-196a可通過調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)成分Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)參與硬皮病的發(fā)生。細(xì)胞外基質(zhì)是腎臟組織的重要組成成分，這就提示我們miR-196a/b可能也會(huì)通過對腎臟基質(zhì)成分的調(diào)節(jié)來參與一些腎臟疾病如腎纖維化疾病的發(fā)生發(fā)展。

miRNA對靶基因的調(diào)控作用具有多樣性與復(fù)雜性。生物信息學(xué)技術(shù)以及已有的文獻(xiàn)報(bào)道只是為我們提供可能性最大的參考信息和理論基礎(chǔ)，對于miR-196a/b在腎臟中的具體功能研究還需通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

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(本文編輯 人 正 一 訥)

Identification and function prediction of kidney-specific microRNAs

MENGJiao1,LILimin2,LIUZhihong1,ZENKe1，2

1NationalClinicalResearchCenterofKidneyDiseases,JinlingHosptital,NanjingUniversitySchoolofMedicine,Nanjing210016,China2JERC-MBB,StateKeyLaboratoryofPharmaceuticalBiotechnology,NanjingUniversitySchoolofLifeSciences

ZENKe(E-mail:kzen@nju.edu.cn);LIUZhihong(E-mail:liuzhihong@nju.edu.cn)

Objective：Solexa Sequencing was used to screen for kidney-specific microRNAs. The target genes of the identified miRNAs were analysed by bioinformatics to predict the biological functions of the miRNAs. Methodology：To screen for the miRNAs specifically expressed in kidney, leven tissues or organs from 8 weeks C57/B6 male mice were collected. Total RNA was extracted, followed by small RNA isolation. Solexa sequencing was performed to profile the small RNA samples. Real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) was used to validate the results from the sequencing. Bioinformatic analysis was performed to predict the target genes of the kidney specific miRNAs. The predicted target genes were subject to gene ontology (GO) and KEGG pathway analyses for function prediction. Results：Solexa sequencing results showed that miR-196a and miR-196b were the kidney specific miRNAs in normal mice. The distribution of miR-196a and miR-196b in 11 tissues or organs of mice were validated by q-PCR, and the results were consistent with those from sequencing. The number of overlapping predicted target genes by TargetScan6.2 and PicTar was 74. GO analysis showed that the genes involved in the regulation of platelet-derived growth factor binding, transcriptional activity and extracellular matrix structural constituent were enriched in the list of the 74 genes. The genes associated with several biological processes, including metabolic process and developmental process, were also enriched among the 74 genes (P<0.01). The pathway analysis showed that the genes involved in GnRH signaling, ECM-receptor interaction, and glioma and prostate cancer, were significantly enriched in the 74 genes (P<0.05). Conclusion：miR-196a/b specifically expressed in the kidney, and their functions are predicted to be closely related with cell metabolism, growth and development. Thus, our study may help understand the mechanism underlying kidney disease. Further studies are required to understand the role of miR-196a/b in the physiology and pathology of kidney.

kidney Solexa sequencing miR-196a miR-196b

國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)(2012CB517603)

1南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬金陵醫(yī)院(南京軍區(qū)南京總醫(yī)院)腎臟科 碩士研究生(孟 嬌)；國家腎臟疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心 全軍腎臟病研究所(南京，210016)；2南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 醫(yī)藥生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 江蘇小核糖核酸工程研究中心

曾 科(E-mail:kzen@nju.edu.cn)；劉志紅(E-mail:liuzhihong@nju.edu.cn)

2015-01-19

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