李 姍 李 妍 趙振慧 楊順娥

AURKA T91A多態(tài)性與新疆維、漢民族乳腺癌易感性的關(guān)聯(lián)研究

李 姍 李 妍 趙振慧 楊順娥

目的探討AURKA T91A基因多態(tài)性在維、漢民族乳腺癌中的分布的差異與乳腺癌易感性的關(guān)系。方法

應(yīng)用PCR-RFLP檢測192例維吾爾族女性乳腺癌患者、200例健康者及254例漢族女性乳腺癌患者及200例健康者AURKA T91A位點多態(tài)性，分析該位點多態(tài)性與新疆維、漢民族乳腺癌易感性之間的關(guān)系。結(jié)果在病例組及對照組中，不同基因型及等位基因頻率在維、漢兩民族中分布的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。維吾爾族組中，攜帶A等位基因的人群較攜帶T等位基因的人群患乳腺癌的風(fēng)險減低(OR=0.740，95% CI=0.558-0.982，P=0.037)。漢族乳腺癌組中，AA vs.TT、AA vs.(TT+TA)、TT vs.(TA+AA)3種遺傳模型都沒有顯示出增加患乳腺癌的風(fēng)險。結(jié)論AURKA T91A位點多態(tài)性與新疆維吾爾族乳腺癌易感性相關(guān)，T等位基因為易感基因，可作為新疆維吾爾族女性乳腺癌患病風(fēng)險因子。

乳腺癌；AURKA T91A；維吾爾族；漢族；基因多態(tài)性

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:1584～1587)

乳腺癌是女性最常見惡性腫瘤之一，近20年來我國乳腺癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢。日益增多的資料表明，乳腺癌的遺傳學(xué)易感性及臨床預(yù)后存在著種族及地域差異，目前產(chǎn)生這種差異的機制尚未明確，而腫瘤增殖相關(guān)基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)的研究最有可能揭示腫瘤易感性的本質(zhì)。AURKA(Aurora-A/STK15/BTAK)基因定位于人類染色體20q13.2，其編碼的蛋白屬于絲/蘇氨酸蛋白激酶家族，主要參與調(diào)控細(xì)胞中心體及微管的正常功能并調(diào)節(jié)有絲分裂[1]，AURKA與人類多種惡性腫瘤密切相關(guān)，其中與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有著密切聯(lián)系[2]。成芳等[3]研究顯示新疆維吾爾族、漢族乳腺癌患者的病理及臨床特征不同。這種差異可能是由于遺傳所致，而遺傳學(xué)易感性可能在維吾爾族女性乳腺癌的發(fā)病中起著關(guān)鍵作用。因此，本研究針對AURKA編碼區(qū)91位點T>A的突變，導(dǎo)致Phe→Ile的變化，來探討該位點基因多態(tài)性與新疆維、漢民族女性乳腺癌易感性之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

標(biāo)本來自我院2012年01月至2014年12月間收治的無異族通婚史的維吾爾族女性乳腺癌患者192例及漢族女性乳腺癌患者254例，所有患者均經(jīng)組織病理學(xué)確診，術(shù)前未行化療、放療及內(nèi)分泌治療。病例組平均年齡：維吾爾族(44.24±8.78)歲、漢族(46.75±8.47)歲。同期收集在本院體檢的健康維吾爾族女性外周血標(biāo)本200例及漢族健康女性血標(biāo)本200例，對照組為無乳腺及其他系統(tǒng)惡性腫瘤病史的健康志愿者。對照組平均年齡：維吾爾族(45.32±9.46)歲、漢族(45.15±9.34)歲。維、漢民族兩組年齡分布均無統(tǒng)計學(xué)差異，P>0.05。所有患者及體檢健康者均簽署知情同意書，本研究經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院研究倫理委員會審查并認(rèn)可。

1.2 方法

1.2.1 基因組DNA的提取 抽取乳腺癌組和對照組空腹靜脈血5 ml，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)抗凝，分裝后置-80 ℃冰箱保存。采用全血基因組DNA提取系統(tǒng)試劑盒(TIANGEN天根公司),嚴(yán)格按照說明書提取基因組DNA，-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 引物設(shè)計與合成 查閱NCBI網(wǎng)并應(yīng)用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計引物，由北京奧科鼎盛生物公司合成。引物序列：上游(Forward)：5'-CTT TCA TGA ATG CCA GAA AGT T-3'；下游(Reverse)：5'-CTG GGA AGA ATT TGA AGG ACA-3'，產(chǎn)物大小為153 bp。

1.2.3 PCR擴增 PCR反應(yīng)體系總體積為25 μL，包括PCR Master Mix12.5 μL，DNA模板2.0 μL，上、下游引物各0.5 μL，ddH20 9.5 μL。擴增條件：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，35次循環(huán)后，72 ℃最終延伸7 min，4 ℃保存。

1.2.4 PCR產(chǎn)物鑒定及測序 用XapI(ApoI)限制性內(nèi)切酶1 μL酶切，將酶切產(chǎn)物置于3.5%瓊脂糖凝膠中電泳60 min后將其置于凝膠成像系統(tǒng)中觀察產(chǎn)物片段大小。未被酶切開的長度153的一條亮帶為TT型，出現(xiàn)89bp和64bp兩個條帶的為AA型，出現(xiàn)153 bp、89 bp、64 bp 3個條帶的為TA型(圖1)。將PCR產(chǎn)物送至測序公司(北京奧科鼎盛)測序驗證。

M為Marker、2、4為TT純合子；1、3為TA雜合子；5為AA純合子。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 19.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理?；蝾l率和基因型頻率采用Hardy-Weinberg平衡檢驗，各組間比較采用χ2檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。采用非條件邏輯回歸危險度比值比(OR) 和95%可信區(qū)間(CI)評估單核苷酸多態(tài)性與乳腺癌危險性關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢測

維吾爾族及漢族病例組和對照組的基因型均符合Hardy-Weinberg平衡定律，其P值分別為0.333、0.980、0.846、0.922。P值均大于0.05，提示納入的試驗對象能較好的代表本地區(qū)兩民族乳腺癌及正常人群。

2.2 基因型分布及等位基因頻率

漢族人群以攜帶A等位基因為主，而維吾爾族人群以攜帶T等位基因為主。在病例組及對照組中，不同基因型及等位基因頻率在維、漢兩民族中分布的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義，χ2值分別為47.176、52.691、24.922、26.366，P<0.01。在維吾爾族亞組中，病例組與對照組基因型分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，等位基因頻率的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.352，P<0.05)；在漢族亞組中，病例組與對照組基因型分布及等位基因頻率的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表1、表2)。

2.3 AURKA T91A 多態(tài)性與乳腺癌危險性的關(guān)系

在維吾爾族組中，與TT基因型相比，攜帶TA基因型者的OR值為0.586(95% CI=0.372～0.925，P=0.022)，有統(tǒng)計學(xué)意義。與TA+AA基因型相比，攜帶TT基因型者患乳腺癌的風(fēng)險為1.685，95% CI=1.104～2.572，P=0.016，有統(tǒng)計學(xué)意義。攜帶A等位基因的人群患乳腺癌的風(fēng)險減低(OR=0.740，95% CI=0.558～0.982，P=0.037)；在漢族人群中，TA vs.TT與(TT+TA) vs.AA及TT vs.(TA+AA)3種模型均未顯示出與乳腺癌易感性的關(guān)系，見表3。

3 討論

AURKA目前已經(jīng)被認(rèn)定為1種癌基因，當(dāng)該基因表達(dá)過量時，細(xì)胞內(nèi)的中心體異常增多，進(jìn)而產(chǎn)生細(xì)胞多極分裂及異倍體形成，導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，從而促進(jìn)多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。該基因可在約12%～18%的原發(fā)性乳腺癌及60%的同時存在BRCA2突變的乳腺癌中出現(xiàn)堿基的重復(fù)或擴增[4]，該基因T91A位點的多態(tài)性與多種腫瘤的易感性相關(guān)，如乳腺癌、結(jié)腸癌、食管癌等，這種相關(guān)性在種族中存在著差異[5]。

表1 病例組及對照組維、漢民族基因型分布及等位基因頻率的比較(例，%)

表2 維、漢民族中各基因型分布及等位基因頻率的比較(例，%)

表3 AURKA T91A各基因型及等位基因與乳腺癌危險性關(guān)系

注：a為P=0.022，b為P=0.016，c為P=0.037 。

鮮有研究報道AURKA T91A位點多態(tài)性在維吾爾族人群中的分布情況。本研究顯示，維、漢兩民族病例組及對照組基因型分布及等位基因頻率均具有顯著差異(P<0.01)，這一結(jié)果更好的解釋了AURKA T91A位點多態(tài)性在不同種族間具有顯著差異。維吾爾族含有高加索人種血統(tǒng)，其主要攜帶T等位基因，而漢族作為亞洲人種，其主要攜帶A等位基因，這與既往國內(nèi)外研究結(jié)果一致[6-8]。但不同的是，幾項針對高加索人種的研究顯示病例組及對照組中TT基因型占主導(dǎo)[8]，而本研究中維吾爾族病例組以TA基因型為主，這一結(jié)果與其他高加索人種的結(jié)論有偏倚，今后需加大樣本量進(jìn)一步驗證其結(jié)論的可靠性。

目前AURKA T91A(Phe31Ile)基因多態(tài)性與乳腺癌易感性的相關(guān)性研究未取得一致的結(jié)論，大部分研究并未取得陽性的結(jié)果，尤其是針對高加索人群的研究。本研究比較了3種不同遺傳模型下維、漢兩民族人群患癌的危險性，TA vs.TT為共顯性模型，AA vs.(TT+TA)為隱性模型，TT vs.(TA+AA)為主導(dǎo)模型。在維吾爾族人群中，共顯性模型及主導(dǎo)模型顯示出統(tǒng)計學(xué)意義，與TT基因型相比，攜帶TA基因型的人群患乳腺癌的風(fēng)險減低(OR=0.586，95% CI=0.372～0.925)，攜帶TT基因型的人群患乳腺癌的風(fēng)險是TA或AA基因型攜帶者的1.685倍(95%CI=1.104～2.572)。A等位基因為保護性因素，與T等位基因相比，攜帶A等位基因的人群患乳腺癌的風(fēng)險減低(OR=0.740，95% CI=0.558～0.982)，這與Olivia Fletcher等[9]的結(jié)論相似。但Qin Jun等[10]發(fā)表的薈萃分析指出在高加索人種中AA基因型與增加乳腺癌患病風(fēng)險有關(guān)(隱性模型：OR=1.16,95 % CI =1.02～1.33;AA vs.TT:OR=1.16,95 % CI=1.01～1.33)，與本研究結(jié)論不一致，這種異質(zhì)性可能與樣本量的大小及維吾爾族人群獨特的遺傳背景有關(guān)。

AURKA T91A位點多態(tài)性與乳腺癌的易感性在不同種族間具有顯著差異，一宗大樣本量的薈萃分析[11]指出在亞洲人群中攜帶AA基因型的人群患乳腺癌的風(fēng)險是TA或TT基因型攜帶者的1.27倍(95%CI=1.10～1.47)，A等位基因攜帶者患乳腺癌的風(fēng)險是T等位基因攜帶者的1.14倍(95%CI=1.02～1.28)，而在高加索人群中并沒有顯示危險性關(guān)系。本研究顯示，在新疆漢族人群中，該基因多態(tài)性與乳腺癌易感性之間并沒有顯示出關(guān)聯(lián)。本研究僅對AURKA基因上的1個位點的核苷酸多態(tài)性與乳腺癌易感性進(jìn)行分析，尚不能確定是該位點本身或與其他位點交互作用增加乳腺癌易感性，仍需進(jìn)一步擴大樣本量及進(jìn)行多位點的基因多態(tài)性聯(lián)合檢測。

本研究顯示AURKA T91A多態(tài)性與新疆維吾爾族乳腺癌易感性之間有一定關(guān)聯(lián)，為今后新疆地區(qū)維吾爾族女性乳腺癌這一特定人群建立用于大范圍高危人群篩查和早期發(fā)現(xiàn)的分子標(biāo)志提供了遺傳學(xué)證據(jù)。

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(編輯：吳小紅)

Correlation Study of AURKA T91A Gene Polymorphism and Breast Cancer Susceptibility of Xinjiang Uygur and Han women

LIShan,LIYan,ZHAOZhenhui,etal.

Objective To investigate the distribution of single nucleotide polymorphism(SNP) at T91A position of AURKA gene and its relationship with susceptibility to breast cancer of Uyghur and Han patients.Methods AURKA T91A polymorphism was detected in 192 Uyghur female cases,200 Uyghur controls,254 Han female cases and 200 Han controls using PCR-RFLP method,its relationship with breast cancer susceptibility was analyzed.Results In the 2 groups,the difference in different genotypes and allele frequencies between the Uygur and Han ethnic groups were statistically significant.Carrying A allele reduced the risk of breast cancer in Uygur women (A vs.T：OR=0.740，95% CI=0.558-0.982，P=0.037).In the Han group,AA vs.TT,AA vs.(TT + TA),TT vs.(TA + AA),the 3 genetic models had not increased risk of breast cancer.Conclusion AURKA T91A polymorphism is associated with the susceptibility of breast cancer,especially in Uygur populations,T allele is a susceptibility gene and risk factor of breast cancer.

Breast cancer；AURKA T91A；Uygur；Han；Gene polymorphism

國家自然科學(xué)基金(編號：81160320)

830011 新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院

楊順娥

10.3969/j.issn.1001-5930.2015.11.002

R737.9

A

1001-5930(2015)11-1584-04

2015-04-20

2015-08-17)

TheAffiliatedTumorHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi,830011