盧繼承，朱群群，王雪飛

(泰山學(xué)院生物與釀酒工程學(xué)院，山東泰安271000)

螭霖魚人工早繁初步研究

盧繼承，朱群群，王雪飛

(泰山學(xué)院生物與釀酒工程學(xué)院，山東泰安271000)

經(jīng)過營養(yǎng)強(qiáng)化和提高水溫等生殖調(diào)控措施，螭霖魚的繁殖提早到3月上旬，雌魚產(chǎn)卵率為60%，各批次受精率在40－90%，孵化率在61－85%，出苗率在30－45%.正交試驗(yàn)結(jié)果表明，影響螭霖魚繁殖最主要的環(huán)境因素是溫度.

螭霖魚;早繁;溫度調(diào)控

泰山螭霖魚是一種為泰山所獨(dú)有的小型野生魚類，學(xué)名多鱗白甲魚(Scaphesthes macrolepis Bleeker)，隸屬鯉形目、鯉科、鲃亞科、白甲魚屬［1］，是泰安市首個(gè)獲得國家地理標(biāo)志性保護(hù)的產(chǎn)品，其肉質(zhì)細(xì)嫩、味美不腥、營養(yǎng)豐富、藥用價(jià)值高，深受廣大養(yǎng)殖者和消費(fèi)者青睞，市場價(jià)格居高不下，是經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的名優(yōu)魚類，也是目前最具發(fā)展?jié)摿Φ牡B(yǎng)殖品種之一.

泰山螭霖魚雄魚3冬齡、雌魚4冬齡可達(dá)性成熟，每年的5月至6月是螭霖魚主要的繁殖季節(jié).螭霖魚的人工繁殖多采用沙盆集卵，費(fèi)時(shí)費(fèi)力、效率差、孵化率低.在自然條件下，螭霖魚生長緩慢，加之對水質(zhì)、水溫要求較高，低于3℃就會凍死，夏季水溫超過28℃時(shí)也會熱死，一年中適合螭霖魚生長的時(shí)間較短［2－3］.另外，螭霖魚孵化期較長(10天左右)，等到培育出供成魚養(yǎng)殖所需的夏花魚種時(shí)，已到6月底，當(dāng)年生魚苗往往已錯過了春末夏初的有利生長時(shí)機(jī).因此，為延長螭霖魚生長期，縮短養(yǎng)殖周期，提早進(jìn)行螭霖魚的春季繁殖就顯得十分必要了.為了探索螭霖魚早繁的可行性，我們于2014年12月－2015年4月在泰山學(xué)院生物與釀酒工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行了泰山螭霖魚的早繁初步研究，研究過程如下.

1 材料與方法

1.1 營養(yǎng)強(qiáng)化及提高水溫對螭霖魚早繁的影響

1.1.1 試驗(yàn)設(shè)施條件

早繁設(shè)3個(gè)試驗(yàn)組，A為營養(yǎng)強(qiáng)化提溫組、B為營養(yǎng)強(qiáng)化正常溫度對照組、C為未經(jīng)營養(yǎng)強(qiáng)化提溫組，每組均投放10尾雌魚、2尾雄魚于100×50×50cm的水族箱中.水族箱放置兩臺20W循環(huán)水泵，24小時(shí)開啟進(jìn)行水質(zhì)循環(huán)過濾，水流速度0.2m/s左右，流量4000L/h左右.水族箱放置在明亮的室內(nèi)，采用自然光照(散射光)，光照強(qiáng)度在800－2000lux之間.每周換水1次，換水量占總?cè)萘康?/4－1/3，并清洗過濾棉和過濾環(huán)等濾材.

1.1.2 親魚的營養(yǎng)強(qiáng)化培育

泰山螭霖魚親魚均購于泰安天井灣泰山螭霖魚繁育有限公司，雌魚4－6齡，雄魚3－5齡.12月挑選體型健碩、性腺發(fā)育良好、性情活潑、規(guī)格均勻的親魚隨機(jī)放養(yǎng)在A、B兩缸中進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化培養(yǎng)，2015年1月24日之前，水溫在17－18℃，每天上午和下午交替投喂升索牌鱘魚顆粒料和添加了螺旋藻的錦鯉顆粒飼料各一次，日飼料投喂量為魚體重的1%－2%.2015年1月24日－2月23日室內(nèi)停止供暖，水溫約8－9℃，日飼料投喂量為其體重的0.5%－1%.C組親魚購于2015年2月20日，規(guī)格與A、B兩組的親魚接近，因養(yǎng)殖場冬季水溫度低，親魚未進(jìn)行投喂.

1.1.3 溫度調(diào)控

2015年2月24日A、C兩組開始溫度調(diào)控，通過加裝在水族箱內(nèi)的一根300W加熱棒，于24－25日先將溫度逐漸提升至12℃，將此溫度保持一天，27－28日將溫度由12℃提升至15℃，并在3月1日將此溫度保持一天，接著在3月2－5日將溫度提升至18℃，之后水溫保持在18℃－20℃.B組未經(jīng)溫度調(diào)控，水溫一直與室溫接近(9－13℃).

1.1.4 人工擠卵授精

當(dāng)觀察到雄魚對雌魚的追逐增強(qiáng)并不時(shí)撞擊雌魚腹部時(shí)，輕擠壓雄魚腹部有精液流出，精液入水即散，雌魚腹部膨大、柔軟、生殖孔紅潤，輕壓腹部有卵子流出，則立即進(jìn)行人工擠卵和授精.

人工擠卵的具體操作如下:撈取雌魚，用干爽的紗布將魚身包住，擦干其腹部及泄殖孔，使魚尾斜向下，一手固定魚的頭部，一手輕輕地由上而下擠壓雌魚腹部，若有魚卵流出，則落入下面潔凈干燥的搪瓷托盤中.擠出魚卵后立即撈取一尾雄魚，用同樣的方法，將精液擠壓至魚卵上，為保險(xiǎn)起見，再撈一尾雄魚，將精液擠入魚卵上.用毛筆將精卵充分混勻，再倒入適量的精子稀釋液(0.2%的生理鹽水)，并用毛筆輕輕攪動精卵，使之充分混合，然后加入沖洗液(晾過的自來水，水溫20℃左右)，輕輕攪拌，倒掉一部分水，再加入新水，如此反復(fù)多次沖洗掉多余的精液，并盡快地使所有的卵粒都均勻的分布.

1.1.5 人工孵化

將受精卵分散在淺盤靜水中進(jìn)行人工孵化(水溫19－22℃)，保持光照強(qiáng)度200－600lux.當(dāng)魚卵發(fā)育到原腸中期，用小盆隨機(jī)取魚卵百余粒，放在白瓷盆中，用肉眼檢查，統(tǒng)計(jì)受精(好卵)卵數(shù)和混濁、發(fā)白的壞卵(或空心卵)，計(jì)算受精率.每日定時(shí)換水并且觀察魚卵的發(fā)育情況，及時(shí)清理死去的魚卵以保持水質(zhì)的清潔.

3天左右魚卵孵化出膜，計(jì)算孵化率.此時(shí)魚苗依靠自身的卵黃囊獲取營養(yǎng).螭霖魚胚后期較長，破膜10天左右，體色素不斷增加，出現(xiàn)集群現(xiàn)象，待卵黃囊吸收完畢，魚苗全長10mm左右，能正常平游并開口攝食，計(jì)算出苗率.

1.1.6 早繁魚苗培育

2015年3月20日開始逐漸將平游后的螭霖魚魚苗移入魚缸(40×30×30cm)中，缸內(nèi)設(shè)一個(gè)氣動式生化棉過濾器進(jìn)行增氧過濾，并有一根100W加熱棒進(jìn)行控溫，水溫控制在19℃－22℃.每缸放養(yǎng)200尾左右，水位10cm左右，隨著仔魚游泳能力的增強(qiáng)，不斷提高水位.待魚苗長到2cm左右時(shí)，水位提高到20cm左右，并可將仔魚分缸，放養(yǎng)密度降到每缸100尾.

仔魚開口后，前3天混合投喂輪蟲(2－6個(gè)/mL)和鹵蟲無節(jié)幼體(0.01－0.02個(gè)/mL)，第四天開始投喂鹵蟲無節(jié)幼體(1－2個(gè)/mL).餌料每天投喂4次，投喂量應(yīng)讓仔魚30分鐘內(nèi)基本攝食完畢，每天對魚缸底部進(jìn)行吸污，并加注晾過的新水.

1.2 溫度、水流和光照對螭霖魚早繁的影響

為探究影響螭霖魚提早繁殖的關(guān)鍵環(huán)境因子，從2015年3月20日至4月30日進(jìn)行了正交試驗(yàn)，設(shè)溫度(正常、提溫)、光照(正常、延長)和水流(靜水、造浪)3因素2水平，采用L4(23)表.在4個(gè)100 ×80×40cm規(guī)格的魚缸中分別放雌魚4尾，雄魚6尾.魚缸放置在靠窗的室內(nèi)進(jìn)行，試驗(yàn)開始時(shí)自然光照周期約為11L:13D，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)約為13L:11D.延長光照時(shí)開啟魚缸上方2根60w熒光燈，每天延長0.5h直至光照時(shí)長為15L:9D，后保持不變.試驗(yàn)開始水溫11－13℃，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)正常水溫在17－18℃.提溫通過300W加熱棒進(jìn)行，每天提水溫1℃直至18℃，后一直保持在18－20℃.水流造浪是通過一臺24w造浪泵實(shí)現(xiàn).每天定時(shí)、定質(zhì)投喂餌料，并吸污換水1/10－1/5.每天早晨注意檢查雄魚對雌魚的追逐情況，并適時(shí)檢查精卵成熟度.

2 結(jié)果

2.1 營養(yǎng)強(qiáng)化及提高水溫對螭霖魚早繁的影響

隨溫度提升，A組親魚的活動量、進(jìn)食量都明顯增加，不時(shí)觀察到雄魚對雌魚進(jìn)行追逐并撞擊雌魚腹部.C組親魚在提溫一周后才開始少量進(jìn)食，雌雄魚無追逐現(xiàn)象.3月7日檢查到A組中2條雄魚都能擠出精液，精液入水即散，10條雌魚腹部均比較膨大、柔軟有彈性，其中有2條雌魚的生殖孔紅潤，輕壓腹部有卵子流出，隨后對其進(jìn)行了人工擠卵和授精.

3月7－10日，A組先后共有6尾雌魚擠出魚卵，雌魚成熟率為60%，對其進(jìn)行人工授精，后經(jīng)人工孵化，成功培育出仔魚2000余尾，結(jié)果詳見表1.截至3月30日，B、C兩組親魚雄魚均無法擠出精液，雌魚腹部緊實(shí)，無流動感，無法擠出卵子.

表1 營養(yǎng)強(qiáng)化及提高溫度后螭霖魚人工早繁情況表

2.2 溫度、水流和光照對螭霖魚早繁的影響

試驗(yàn)開始后，每天注意觀察雄魚對雌魚的追逐情況，4月7日，觀察到第3實(shí)驗(yàn)組中雄魚一直對雌魚不斷追逐并不時(shí)撞擊雌魚腹部，撈出檢查精卵成熟情況，輕壓雌魚腹部有成熟卵子流出，持續(xù)觀察，記錄各組首次擠出卵子時(shí)所用天數(shù).結(jié)果采用直觀分析法，表明影響螭霖魚早繁的主要環(huán)境因素依次為溫度＞水流＞光照周期，詳見表2所示.

表2 螭霖魚早繁正交試驗(yàn)表

3 分析與討論

3.1 營養(yǎng)強(qiáng)化

營養(yǎng)是魚類性腺發(fā)育的物質(zhì)基礎(chǔ).當(dāng)卵巢發(fā)育到第Ⅲ期以后(即卵母細(xì)胞進(jìn)入大生長期)，卵母細(xì)胞要沉積大量的營養(yǎng)物質(zhì)，以供胚胎發(fā)育的需要，卵巢增重約占體重的20%.因此，親魚需要從外界攝取大量的營養(yǎng)物質(zhì)，特別是蛋白質(zhì)和脂肪供其性腺發(fā)育.C組親魚雖也采取了提高水溫、加強(qiáng)流水刺激等措施，雌魚性腺仍未發(fā)育成熟，早繁試驗(yàn)未能成功.后通過探卵發(fā)現(xiàn)雌魚體內(nèi)卵黃積累不夠，主要原因親魚因在養(yǎng)殖場水溫低，停止喂食3個(gè)月，造成體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)積累不夠.目前，李慶華等［4］發(fā)現(xiàn)大菱鲆經(jīng)營養(yǎng)強(qiáng)化后親魚產(chǎn)卵量、上浮卵量、上浮率及受精卵存活率、孵化率均有顯著提高;通過采取對親魚進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化等措施，宋友韓等［5］在自然水溫下已實(shí)現(xiàn)了草魚的早繁技術(shù).這些研究成果都是與我們的初步研究結(jié)果相符的.因此，營養(yǎng)強(qiáng)化是影響螭霖魚早繁的關(guān)鍵因素.

3.2 溫度、水流和光照

魚類是變溫動物，通過溫度的變化，可以改變魚體的代謝強(qiáng)度，加速或抑制性腺發(fā)育和成熟的過程.水溫及其變化是魚類產(chǎn)卵行為的信號，若水溫達(dá)不到產(chǎn)卵或排精的溫度閾值，即使性腺已經(jīng)發(fā)育成熟，也不能完成生殖活動.另外，在近幾年的繁殖試驗(yàn)中，筆者也觀察到一現(xiàn)象，即魚齡越大，產(chǎn)卵越早.目前，草魚、鯉魚等通過調(diào)控水溫可實(shí)現(xiàn)提早繁殖，另外鲇形目、鱸形目也可通過溫度控制來實(shí)現(xiàn)早繁或反季節(jié)繁殖.目前，通過提高親魚養(yǎng)殖溫度這一條件，胡國宏等［6］把黃顙魚在寒區(qū)的繁殖提早了20天.王本健等［7］使赤點(diǎn)石斑魚提早2個(gè)月產(chǎn)卵，實(shí)現(xiàn)了人工早繁.因此，溫度是決定螭霖魚早繁的重要因素.

魚類的生殖周期在很大程度上受光照時(shí)間長短的調(diào)節(jié)，光刺激通過中樞神經(jīng)，引起腦垂體的分泌活動，從而影響性腺發(fā)育.對春季產(chǎn)卵魚類，延長光照期可促進(jìn)性腺發(fā)育和提早產(chǎn)卵，但大多數(shù)魚類的產(chǎn)卵是受溫度和光照周期的共同調(diào)控.如，采取降低溫度和光照，能將翹嘴鱖在江蘇地區(qū)的人工繁殖期推遲至7月底，從而實(shí)現(xiàn)高溫期的批量育苗［8］.羅海忠等［9］研究表明，通過調(diào)控水溫、光照周期和注射外源激素能使鮸魚由原來在9－10月份產(chǎn)卵提前到6月份產(chǎn)卵;而僅調(diào)控水溫只能提前至8月份產(chǎn)卵;僅調(diào)控光照或僅在春季注射激素，不會使鮸魚提前產(chǎn)卵.木云雷等［10］利用延長光照時(shí)間和提高水溫使牙鲆親魚性腺提前1－5個(gè)月成熟和產(chǎn)卵.李慶華等［4］通過人工控光控溫使大菱鲆親魚性腺提早發(fā)育兩個(gè)月以上，達(dá)到反季節(jié)產(chǎn)卵的效果.光照周期對秋季產(chǎn)卵魚類影響較大，對鯉形目魚類來說，只調(diào)控水溫也可實(shí)現(xiàn)繁殖［11］.本試驗(yàn)研究也驗(yàn)證了這一點(diǎn)，即影響螭霖魚繁殖最主要的環(huán)境因素是溫度，在不延長光照時(shí)間，也可實(shí)現(xiàn)螭霖魚的提早繁殖.

水流對于產(chǎn)半浮性卵魚類和溯河產(chǎn)卵魚類等的性腺成熟和產(chǎn)卵極為重要.棲息在天然條件下的家魚缺乏水流刺激，性腺就不能過渡到第Ⅴ期，致使家魚不能產(chǎn)卵.因此，流水刺激對家魚性腺進(jìn)一步發(fā)育成熟就很重要.雖然，野生螭霖魚生活在泰山270－800米溪流中，對水流、溶氧、水質(zhì)等條件要求較高，但經(jīng)過多年人工養(yǎng)殖后，螭霖魚的性腺在靜水中也可以正常發(fā)育成熟，也早已實(shí)現(xiàn)平原水泥池靜水繁殖.而本研究中螭霖魚繁殖更是采用人工擠卵、授精進(jìn)行，因而，水流對螭霖魚全人工早繁的影響不如溫度顯著.

3.3 其它因素

本次早繁試驗(yàn)魚卵的受精率、孵化(破膜)率也較高，但出苗(下塘)率較低，筆者認(rèn)為可能與以下因素有關(guān):一是螭霖魚胚胎期很短、胚后期較長，仔魚破膜后容易受到水霉菌及其它敵害生物的侵害.二是有幾條雌魚產(chǎn)出的卵大小不一，有些卵粒過于扁塌或糊狀，無光澤，過熟程度輕的卵雖可受精發(fā)育，魚苗也能孵出，但大多為畸形，如歪尾、曲背、卵黃膜腫大，不能正常游動等，絕大多數(shù)畸形魚苗均陸續(xù)夭折.三是目前螭霖魚近親繁殖嚴(yán)重、種質(zhì)退化，導(dǎo)致魚苗畸形率高.這些因素使得本研究中出苗率較低.因此，如何恢復(fù)螭霖魚種質(zhì)，優(yōu)化螭霖魚的孵化技術(shù)，提高螭霖魚的出苗率，是目前亟待解決的問題.

4 小結(jié)

本研究在未使用任何催產(chǎn)藥物的情況下，僅通過營養(yǎng)強(qiáng)化親魚，提高水溫，持續(xù)流水刺激等措施，將螭霖魚的人工繁殖時(shí)間提早到3月上旬，并采用人工擠卵授精、孵化，室內(nèi)高密度培育仔魚等全人工繁殖技術(shù)，節(jié)省了人力，延長了仔魚生長期.等到4月底5月初，泰山山區(qū)養(yǎng)殖池水溫度達(dá)16℃－19℃，自然條件下螭霖魚剛剛進(jìn)入繁殖初期，而早繁仔魚在室內(nèi)已經(jīng)過1個(gè)月左右培育，魚苗體長3cm左右，此時(shí)，再下池養(yǎng)殖，魚種規(guī)格較大、生長快、成活率高，在生存能力上已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過自然條件下繁殖的仔魚.

我們開創(chuàng)的早繁模式，將螭霖魚每年的最適生長期延長兩個(gè)月以上，如果養(yǎng)殖得當(dāng)，商品魚可以在當(dāng)年春節(jié)期間就能達(dá)到上市規(guī)格，比自然條件下養(yǎng)殖的商品魚上市時(shí)間提前半年左右.這樣，既縮短了養(yǎng)殖周期，又可為優(yōu)質(zhì)螭霖魚的均衡上市提供條件.

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A Preliminary Study on the Early Propagation of Varicorhinus Macrolepis

LU Ji－cheng，ZHU Qun－qun，WANG Xue－fei
(School of Biology and Brewing Engineering，Taishan University，Tai＇an，271000，China)

By controlling water temperature and the nutrition reinforced conditioning of broodstock，the propagation of varicorhinus macrolepis was moved up to early march，60%of females were sexually mature，the fertilization rate was 40－90%，the hatching rate was 61－85%，and the viable fry rate was 30－45%.Results of orthogonal test showed that the temperature was the main environmental factor，which influenced the early propagation of varicorhinus macrolepis.

varicorhinus macrolepis;early propagation;temperature control

S961.3

A

1672－2590(2015)06－0099－05

2015－10－11

泰安市大學(xué)生科技創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(2014D083)

盧繼承(1964－)，男，山東泰安人，泰山學(xué)院生物與釀酒工程學(xué)院副教授.