李修偉，校新蕾，梁亞萍，張春萍，張淑蘭，谷祖敏，祁之秋

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，沈陽 110866

環(huán)境激素甲草胺對(duì)搖蚊谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶的抑制作用

李修偉*，校新蕾，梁亞萍，張春萍，張淑蘭，谷祖敏#，祁之秋

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，沈陽 110866

谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)是生物體內(nèi)重要的解毒酶。為研究環(huán)境激素甲草胺對(duì)溪流搖蚊GST的抑制作用及機(jī)理，采用酶標(biāo)儀微量法測定甲草胺對(duì)溪流搖蚊4齡幼蟲GST的抑制活性及抑制類型。結(jié)果表明甲草胺在72 h活體染毒和離體狀態(tài)下均能顯著抑制溪流搖蚊GST的活性，且抑制程度隨著藥物濃度的增大而增大。甲草胺抑制GST活性的反應(yīng)為可逆性抑制。進(jìn)一步的酶動(dòng)力學(xué)分析揭示甲草胺對(duì)GST的特異底物1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)和還原型谷胱甘肽(GSH)均表現(xiàn)為競爭性抑制，即甲草胺僅影響米氏常數(shù)(Km)，不改變酶促反應(yīng)的最大反應(yīng)速度(Vmax)。以上結(jié)果表明農(nóng)藥殘留污染物甲草胺在脅迫下對(duì)搖蚊幼蟲GST酶活性會(huì)受到顯著影響，甲草胺對(duì)GST的抑制機(jī)制為可逆性和競爭性抑制。

甲草胺；溪流搖蚊；谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶；抑制機(jī)制

搖蚊是世界性分布的水生昆蟲，幾乎遍及所有的淡水生境，其分類上歸屬昆蟲綱，雙翅目，長角亞目，搖蚊科[1]。搖蚊幼蟲種類繁多，生物量約占底棲生物總量的70%～80%，是多種經(jīng)濟(jì)魚類的優(yōu)良天然餌料，在生態(tài)系統(tǒng)中占據(jù)重要環(huán)節(jié)[2-3]?？蒲猩铣u蚊幼蟲作為水體環(huán)境污染生物監(jiān)測的重要指示生物[4-12]。

甲草胺是酰胺類選擇性芽前除草劑，由美國孟山都公司開發(fā)并于1969年商品化。主要用于一年生禾本科雜草及闊葉雜草的防除。其作用機(jī)制是通過內(nèi)吸進(jìn)入植物體內(nèi)抑制蛋白酶的活性，使蛋白質(zhì)無法合成，進(jìn)而抑制細(xì)胞分裂，最終造成植物芽和根生長停止，無法形成不定根[13]。甲草胺是國際上應(yīng)用最廣泛的除草劑之一，在美國，其2001年的年用量高達(dá)3 500 t左右[14]。我國20世紀(jì)70年代在黑龍江率先引進(jìn)甲草胺，一度占據(jù)市場絕對(duì)優(yōu)勢份額。然而隨著乙草胺的國產(chǎn)化以及藥效、成本等因素影響，目前甲草胺已不再占據(jù)優(yōu)勢份額，僅在相應(yīng)的應(yīng)用范圍和地域擁有一定的市場[15]。截至2014年12月，在農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所登記的甲草胺原藥產(chǎn)品有12種，單劑及復(fù)配制劑32種。每年的產(chǎn)量在1 000 t以上，僅占除草劑市場份額的3‰，主要用于防治春、夏大豆田、花生田、棉花田和玉米田等的雜草[16]。甲草胺在地表水和地下水及水體沉積物中均能不同程度的檢測到[17]，其在水體中的殘留量最高可達(dá)3 000 μg·L-1[18]；其中在水體沉積物中的殘留量可達(dá)183 μg·L-1。甲草胺在地表水中的半衰期約為30 d，在地下水的半衰期為808～1 508 d，在有氧土壤和缺氧土壤中的半衰期分別為20 d和5 d[15]。甲草胺是典型的環(huán)境激素類農(nóng)藥，具有致畸及內(nèi)分泌干擾活性，已被日本國立研究所列入具有內(nèi)分泌干擾作用的黑名單[19]，美國規(guī)定其在飲用水的最低濃度值(MCL)為2 μg·L-1[20]。

谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)為生物體內(nèi)重要的代謝酶系，通過谷胱甘肽的軛合作用參與生物體對(duì)外源物質(zhì)的初級(jí)代謝和次級(jí)代謝。GST功能主要表現(xiàn)在以下3個(gè)方面：一是對(duì)異源有毒物質(zhì)進(jìn)行解毒代謝：GST可催化致癌劑、突變劑、農(nóng)藥、藥物、抗生素物質(zhì)等外源性化合物與還原型谷胱甘肽軛合，生成更易溶于水的物質(zhì)代謝或分泌出體外，從而保護(hù)細(xì)胞免受這些物質(zhì)的傷害，這是GSTs最基本的解毒和保護(hù)特性[21]。二是保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷，抑制微粒體過氧化反應(yīng)，修復(fù)自由基引起的膜磷脂損傷，清除體內(nèi)的過氧化氫物。三是對(duì)激素、內(nèi)源代謝物和外源化合物進(jìn)行細(xì)胞間運(yùn)輸[22]。Ying等[23]的研究發(fā)現(xiàn)甲草胺可以顯著抑制搖蚊GST活性，Li等[24]的研究證實(shí)了這一現(xiàn)象并發(fā)現(xiàn)甲草胺可以誘導(dǎo)3個(gè)GST基因CtGSTd1，CtGSTs2和CtGSTs3上調(diào)表達(dá)。然而關(guān)于甲草胺影響GST的作用機(jī)理、抑制效應(yīng)及酶促動(dòng)力學(xué)等方面的研究較少。

溪流搖蚊(Chironomus riparius Meigen)是世界性分布的水生昆蟲，國內(nèi)分布于天津、河北、浙江、海南、青海、遼寧等地[25]，其幼蟲具有體型小、世代周期短、易于養(yǎng)殖管理等優(yōu)點(diǎn)，在歐美國家已被作為生態(tài)毒理研究模式生物[12, 26]。以溪流搖蚊為供試對(duì)象，研究不同濃度甲草胺對(duì)活體和離體情況下GST活性的影響，系統(tǒng)測定甲草胺對(duì)搖蚊GST的抑制效應(yīng)，抑制類型和酶促動(dòng)力學(xué)參數(shù)的影響，以期從生物化學(xué)層面全面了解環(huán)境激素甲草胺對(duì)GSTs的抑制機(jī)理，為全面評(píng)價(jià)甲草胺對(duì)水生生物的生態(tài)毒理效應(yīng)提供生化依據(jù)。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 儀器與試劑

儀器：SpectraMax 340多功能酶標(biāo)儀(美國Molecular Devices公司)，CF16RXII型冷凍離心機(jī)(日本日立公司)，Potter-Elvehjem組織勻漿器(美國Sigma-Aldrich公司)。

試劑：2,2-聯(lián)喹啉-4,4-二甲酸二鈉(BCA二鈉鹽)、無水碳酸鈉、酒石酸鈉、氫氧化鈉、碳酸氫鈉、硫酸銅、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、曲拉通-100(TritonX-100)、三羥甲基氨基甲烷、2,4-二硝基氯苯(CDNB)、牛血清蛋白、還原性谷胱甘肽(GSH)、無水乙醇、丙酮均為中國國藥集團(tuán)化學(xué)試劑股份有限公司分析純試劑。甲草胺(分析標(biāo)準(zhǔn)品)購自美國Sigma-Aldrich公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用搖蚊采自于沈陽市沈河區(qū)滿堂河支流牤牛河河段(沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)附近)，該河段污染來源主要是生活污水，河水經(jīng)滿堂河污水處理廠處理凈化后達(dá)到GB18918—2002的一級(jí)B標(biāo)準(zhǔn)[27]；沉積物符合GB18918—2002的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)[28]。所采集搖蚊經(jīng)鑒定為溪流搖蚊(Chironomus riparius)[29]。搖蚊帶回實(shí)驗(yàn)室采用曝氣自來水于75 cm×45 cm×60 cm的玻璃缸內(nèi)人工傳代飼養(yǎng)。飼養(yǎng)條件為(25±1) ℃，光照時(shí)間16 h/8 h(光/暗)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 染毒試驗(yàn)、酶液制備及GST活性測定

挑取實(shí)驗(yàn)室人工傳代飼養(yǎng)的，個(gè)體大小基本一致、健康的溪流搖蚊4齡初期幼蟲置于1 000 mL燒杯中，每燒杯10頭。參考Li等[24]的方法，各燒杯中分別加入100 μL含有不同量的甲草胺丙酮溶液，使得甲草胺濃度分別為1、10、100、1 000 μg·L-1，對(duì)照組添加100 μL丙酮。每處理重復(fù)3次。試蟲置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)72 h，溫度(25±1) ℃，光照時(shí)間16 h/8 h(光/暗)。72 h收集存活的搖蚊幼蟲用蒸餾水沖洗數(shù)遍，濾紙吸干后待用。

收集甲草胺處理后存活的試蟲分別放入預(yù)冷的組織勻漿器中，按每頭100 μL的比例加入預(yù)冷的0.1 mol·L-1含0.3% TritonX-100的磷酸緩沖液(pH 7.4)，研磨至無明顯肉眼可見的蟲體組織，勻漿后10 000 g離心10 min，上清液即為待測酶液。

參考Habig等[30]的方法測定72 h處理后甲草胺對(duì)搖蚊GST酶活的影響。取酶標(biāo)板分別加入底物1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)和還原型谷胱甘肽(GSH)各100 μL并混勻，放入酶標(biāo)儀內(nèi)37 ℃孵育20 min，然后加入20 μL酶液，于340 nm處每隔1 min計(jì)數(shù)，共計(jì)數(shù)5 min，記錄其OD值，設(shè)3次重復(fù)并計(jì)算GST比活力(nmol·min-1·mg-1protein)，對(duì)照以20 μL磷酸緩沖液代替酶液。酶液蛋白質(zhì)含量采用2,2’-聯(lián)喹啉4,4’-二羧酸二鈉(BCA)法測定[31]。依照以下公式計(jì)算酶活力：

GSTs活力單位(nmol·min-1)=(ΔOD340·υ)/(ε·L)

式中ΔOD340為吸光度每分鐘的變化值(ΔOD340·min-1)，υ為酶促反應(yīng)體積(mL)，ε為產(chǎn)物的消光系數(shù)[0.0096L·(μmol·cm)-1]。

GSTs比活力[nmol·min-1·mg-1protein]=酶活力單位/酶液蛋白含量。

1.3.2 離體狀態(tài)下甲草胺對(duì)溪流搖蚊GST活性的影響測定

收集未染毒的健康溪流搖蚊4齡幼蟲采用1.3.1的方法制備酶液。分別將5 μL濃度為0(丙酮)、1、10、100、1 000 μg·L-1甲草胺丙酮溶液與100 μL CDNB和100 μL GSH混合。在酶標(biāo)儀內(nèi)37 ℃溫育20 min，然后加入20 μL酶液，采用1.3.1的方法測定酶活性，計(jì)算酶活力。

1.3.3 甲草胺對(duì)搖蚊GSTs抑制效應(yīng)的測定

在GSTs活性測定體系中，固定底物CDNB，GSH的濃度，改變加入的酶液量，測定不同甲草胺濃度下酶活力隨底物濃度變化的規(guī)律，以加入酶液量對(duì)酶活力作圖，從而判斷化合物的抑制效應(yīng)。

1.3.4 甲草胺對(duì)搖蚊GST抑制類型及抑制常數(shù)的測定

GST是雙底物酶，因此需要分別測定甲草胺對(duì)2種底物的抑制類型及抑制常數(shù)[32]，方法如下：在GST活性測定體系中，固定酶液和GSH的濃度，測定不同甲草胺濃度下酶活力隨底物CDNB濃度變化的規(guī)律；固定酶液和CDNB的濃度，測定不同甲草胺濃度下酶活力隨底物GSH濃度變化的規(guī)律。所得數(shù)據(jù)以Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖，計(jì)算比較甲草胺對(duì)GST表觀米氏常數(shù)(Km)和最大反應(yīng)速度(Vm)的影響。根據(jù)兩者的變化規(guī)律判斷抑制類型，計(jì)算抑制常數(shù)。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)結(jié)果采用Microsoft Excel 2003軟件計(jì)算平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差；所得數(shù)據(jù)采用PASW Statistics 18統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan法對(duì)均值進(jìn)行多重比較，顯著水平為P<0.05；極顯著水平為P<0.01。

2 結(jié)果與分析(Results and analysis)

2.1 甲草胺對(duì)溪流搖蚊GST活性的影響

甲草胺染毒72 h后溪流搖蚊4齡幼蟲GST活性變化如圖1所示。不同濃度甲草胺對(duì)溪流搖蚊4齡初期幼蟲GST活性具有顯著的影響，其活性在處理72 h后明顯被抑制(t檢驗(yàn)，P<0.05)，且抑制程度隨著藥物濃度的增大而增大。與同期對(duì)照相比，濃度為10、100、1 000 μg·L-1的甲草胺處理后GST比活力分別被抑制1.32、1.57和1.94倍。

2.2 離體狀態(tài)下甲草胺對(duì)溪流搖蚊GST活性的影響

離體狀態(tài)下甲草胺對(duì)溪流搖蚊4齡幼蟲GST活性變化如圖2所示。與活體染毒試驗(yàn)結(jié)果相類似，不同濃度甲草胺亦能抑制離體狀態(tài)下溪流搖蚊4齡初期幼蟲GST活性。在濃度為10、100、1 000 μg·L-1的甲草胺作用下，搖蚊GST比活力分別被抑制1.21、1.33和1.41倍。

2.3 甲草胺對(duì)溪流搖蚊GSTs抑制效應(yīng)

GST經(jīng)甲草胺作用后酶活力與酶液量之間的關(guān)系如圖3所示。酶活力對(duì)酶液量作圖得到一組通過原點(diǎn)的直線，且直線的斜率隨著甲草胺濃度的增大而降低。此結(jié)果表明甲草胺抑制GST活力的反應(yīng)是可逆性抑制。此外，由圖3可以看出在同等酶液量下，酶活力隨甲草胺濃度的增加而降低，這與前述結(jié)果一致，進(jìn)一步說明甲草胺能對(duì)溪流搖蚊GST產(chǎn)生抑制作用。

圖1 甲草胺對(duì)溪流搖蚊4齡期幼蟲GST酶活性的影響(72 h)Fig. 1 Effects of alachlor on GST activities in fourth-instar larvae of C. riparius (72 h)

圖2 離體狀態(tài)下甲草胺對(duì)溪流搖蚊4齡期幼蟲GST酶活性的影響Fig. 2 In vitro effects of alachlor on GST activities in fourth-instar larvae of C. riparius

圖3 甲草胺存在下溪流搖蚊GST酶活性與酶量的關(guān)系Fig. 3 Relationship between GST activity and enzyme content of C. riparius at different concentrations of alachlor

2.4 甲草胺對(duì)搖蚊GST抑制類型及抑制常數(shù)

2.4.1 以CDNB為底物時(shí)甲草胺對(duì)溪流搖蚊GST的抑制類型及抑制常數(shù)

表1 對(duì)CDNB，不同濃度甲草胺作用下溪流 搖蚊GST的Vmax和KmTable 1 Vmax and Km of GST at different concentrations of alachlor against CDNB

注：Vmax為反應(yīng)最大速度；Km為米氏常數(shù)。

Note: Vmaxrepresents the maximum speed of reaction, and Kmrepresents the Michaelis constant.

對(duì)CDNB，甲草胺對(duì)溪流搖蚊GST抑制作用Lineweaver-Burk雙倒數(shù)圖，如圖4所示，為一組縱軸截距不變的直線，測定的數(shù)據(jù)(表1)表明甲草胺不改變酶促反應(yīng)的最大反應(yīng)速度(Vm)，只影響米氏常數(shù)(Km)，

其值隨著抑制劑濃度的增大而增大，其抑制機(jī)理表現(xiàn)為競爭性抑制[33]。運(yùn)用二次作圖法以不同濃度甲草胺對(duì)酶抑制作用下測得的Km對(duì)甲草胺作圖，得到一條直線Y=0.0002X+0.1508，計(jì)算可知對(duì)CDNB，甲草胺對(duì)溪流搖蚊的抑制常數(shù)(KI)為754 μg·L-1。

2.4.2 以GSH為底物時(shí)甲草胺對(duì)搖蚊GSTs的抑制類型及抑制常數(shù)

對(duì)GSH，甲草胺對(duì)溪流搖蚊GST抑制作用Lineweaver-Burk雙倒數(shù)圖，如圖5所示，為一組縱軸截距不變的直線，測定的數(shù)據(jù)(表2)表明甲草胺不改變酶促反應(yīng)的最大反應(yīng)速度(Vm)，只影響米氏常數(shù)(Km)，其值隨著抑制劑濃度的增大而增大，其抑制機(jī)理表現(xiàn)為競爭性抑制。運(yùn)用二次作圖法以不同濃度甲草胺對(duì)酶抑制作用下測得的Km對(duì)甲草胺作圖，得到一條直線Y=0.0002X+0.1081，計(jì)算可知對(duì)GSH，甲草胺對(duì)溪流搖蚊的抑制常數(shù)(KI)為540.5 μg·L-1。

表2 對(duì)GSH，不同濃度甲草胺作用下溪流 搖蚊GST的Vmax和KmTable 2 Vmax and Km of GST at different concentrations of alachlor against GSH

圖4 甲草胺抑制下底物CDNB濃度和溪流搖蚊GST活性的雙倒數(shù)圖Fig. 4 Lineweaver-Burk plots of CDNB concentration and GST activity under the inhibition of alachlor

對(duì)CDNB和GSH，甲草胺對(duì)溪流搖蚊GST的抑制作用均表現(xiàn)為可逆競爭性抑制作用，表明甲草胺既可以與CDNB競爭酶結(jié)合位點(diǎn)，又可以與GSH競爭酶結(jié)合位點(diǎn)，從而導(dǎo)致酶的活性喪失。

3 討論(Discussion)

甲草胺是水體常見的環(huán)境激素類農(nóng)藥。已有的研究表明甲草胺具有肝臟毒性、腎毒性、內(nèi)分泌干擾毒性等作用和潛在的致癌性，能對(duì)生物體造成生殖及發(fā)育缺陷[34]，因此相關(guān)研究的開展具有重要的意義。本研究顯示甲草胺在活體染毒和離體狀態(tài)下均能對(duì)溪流搖蚊GST產(chǎn)生顯著的抑制影響。這與Ying等[23]和Li等[24]在研究甲草胺污染對(duì)伸展搖蚊(Chironomus tentans)GST活性的影響所得出的結(jié)論一致。此外，甲草胺也能影響尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)多種組織GST活性[35]。持續(xù)低劑量暴露下甲草胺會(huì)對(duì)鯽魚肝臟谷胱甘肽(GSH)、激素代謝關(guān)鍵酶GST和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UDPGT)產(chǎn)生干擾[36]。這些結(jié)果表明甲草胺不僅僅影響多種雙翅目搖蚊科昆蟲的GST活性，也能影響其他水生生物的GST活性。

GST是生物體內(nèi)重要的II相解毒酶，在生物體外源有毒物質(zhì)代謝中和自由基清除中起到非常重要的作用。抑制GST的活性會(huì)降低搖蚊的解毒能力[37]，增加外源有毒物質(zhì)的毒性。有研究表明甲草胺單獨(dú)作用下并不能對(duì)搖蚊產(chǎn)生顯著的毒性，但在聯(lián)合作用下會(huì)顯著增強(qiáng)毒死蜱對(duì)伸展搖蚊幼蟲的毒性[38]。進(jìn)一步的生化酶活測定顯示這種增毒效應(yīng)主要?dú)w因于GST活性受到抑制。此外，搖蚊幼蟲生活的底棲環(huán)境含氧量相對(duì)較少導(dǎo)致其體內(nèi)容易產(chǎn)生較多的自由基，這些自由基和水體沉積物中的重金屬沉積污染及水體中農(nóng)藥殘留污染對(duì)搖蚊幼蟲生長發(fā)育造成不利影響。搖蚊GST活性受到抑制會(huì)降低其解毒能力及自由基清除作用，削弱搖蚊幼蟲在污染環(huán)境中的生存能力，最終影響到整個(gè)水生生態(tài)系統(tǒng)。

本文研究顯示甲草胺對(duì)GST的特異底物CDNB和GSH均表現(xiàn)為可逆性競爭抑制，對(duì)CDNB，甲草胺對(duì)溪流搖蚊的抑制常數(shù)(KI)為754 μg·L-1；對(duì)GSH，甲草胺對(duì)溪流搖蚊的抑制常數(shù)(KI)為540.5 μg·L-1。CDNB和GSH都是GST的經(jīng)典底物，CDNB代表外源性有毒物質(zhì)，而GSH為生物體內(nèi)源性物質(zhì)，兩者與GST結(jié)合部位不同，甲草胺與兩者具有相同的抑制作用說明甲草胺不僅僅與GSH競爭結(jié)合位點(diǎn)，也與CDNB競爭結(jié)合位點(diǎn)，從而導(dǎo)致酶活性的喪失。此外甲草胺對(duì)GSH的抑制常數(shù)低于對(duì)CDNB的抑制常數(shù)，說明甲草胺更易于與GSH競爭結(jié)合位點(diǎn)。同時(shí)正是由于對(duì)底物的競爭性抑制，甲草胺才可以對(duì)不同生物的GST造成類似的抑制作用。

本文以CDNB和GSH為底物，采用酶標(biāo)儀微量法研究了甲草胺對(duì)溪流搖蚊GST的影響。結(jié)果顯示甲草胺在72 h活體染毒和離體狀態(tài)下均能顯著抑制溪流搖蚊GST的活性。酶動(dòng)力學(xué)分析揭示甲草胺對(duì)GST的特異底物CDNB和GSH均表現(xiàn)為可逆性競爭抑制，且甲草胺更易于與GSH競爭結(jié)合位點(diǎn)。

致謝：感謝沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)李彥博士在文章修改中給予的幫助。

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◆

Inhibition Effect of Alachlor on GlutathioneS-transferase ofChironomusriparius(Diptera: Chironomidae)

Li Xiuwei*, Xiao Xinlei, Liang Yaping, Zhang Chunping, Zhang Shulan, Gu Zumin#, Qi Zhiqiu

College of Plant Protection, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110866, China

19 November 2014 accepted 14 January 2015

Glutathione S-transferases (GST) is an important detoxification enzyme of the organisms. To investigate the inhibition effect and the mechanism of the environmental hormone pesticide alachlor against GST of Chironomus riparius, the inhibition activity and inhibition type of alachlor against fourth-instar larvae of C. riparius were determined by microtitration assay. The results showed that alachlor significantly inhibited GST activities both in vivo 72 h exposure and in vitro, and the inhibition degree increased in an alachlor concentration-dependent manner. The inhibition reaction of alachlor on GST was reversible. Further analysis of enzyme kinetics revealed that the inhibition was competitive with specific substrate of 1-chloro-2,4- dinitrobenzene (CDNB) and reduced Glutathione (GSH), that was to say that alachlor did not change the Vmvalue of enzymatic reaction, but affected the michaelis constant (Km). These results suggested that the GST activities of aquatic midge could be significantly affected by the pesticide residue of alachlor, while the inhibition mechanism of alachlor on GST was reversible and competitive.

alachlor; Chironomus riparius; glutathione S-transferase; inhibitory kinetics

國家自然科學(xué)基金(31101675)

李修偉(1978-)，男，博士，研究方向?yàn)槎纠韺W(xué)，E-mail: xiuwei001@syau.edu.cn；

# 共同通訊作者(Co-corresponding author)， E-mail: guzumin1212@163.com

10.7524/AJE.1673-5897.20141119004

2014-11-19 錄用日期：2015-01-14

1673-5897(2015)2-243-08

X171.5

A

李修偉(1978—)，男，農(nóng)藥學(xué)博士，講師，主要研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物農(nóng)藥，農(nóng)藥毒理學(xué)和生態(tài)毒理學(xué)，在國內(nèi)外學(xué)術(shù)期刊發(fā)表學(xué)術(shù)論文10余篇。

谷祖敏(1973—)，女，農(nóng)藥學(xué)博士，副教授，主要研究方向?yàn)槲⑸镛r(nóng)藥，農(nóng)藥環(huán)境毒理學(xué)，在國內(nèi)外學(xué)術(shù)期刊發(fā)表學(xué)術(shù)論文30余篇。

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