宋小俊，李玉琴，雷 立，李惠民，高吉仁

商洛職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西 商洛 726000

商洛不同產(chǎn)地連翹中連翹苷含量比較*

宋小俊，李玉琴，雷 立，李惠民，高吉仁

商洛職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西 商洛 726000

目的：比較商洛不同產(chǎn)地連翹果實(shí)中有效成份連翹苷(C27H34Ol l)的含量。方法：采用高效液相色譜法對不同區(qū)縣連翹中連翹苷含量進(jìn)行檢測。結(jié)果：不同產(chǎn)地連翹果實(shí)中連翹苷含量相差較大，山陽石頭梁所采樣品連翹苷含量最高，山陽趙川所采樣品連翹苷含量較高，洛南靈口所采樣品連翹苷含量最低。結(jié)論：不同產(chǎn)地連翹中連翹苷含量有明顯差異；主要由連翹生產(chǎn)地生態(tài)環(huán)境因子及生產(chǎn)管理措施不同導(dǎo)致。

高效液相色譜法；連翹苷；含量；商洛

連翹為木犀科植物連翹屬連翹 Forsythia suspensa(T h un b.)V a h l的干燥果實(shí)，因采收季節(jié)不同分為青翹和老翹，青翹指秋季連翹果實(shí)初熟呈綠色時(shí)采收所得，老翹指秋季果實(shí)完全成熟后采收而得。連翹在我國已有兩千多年的藥用歷史，是最常見的中藥材之一，性味苦，微寒，歸心、肺、脾經(jīng)［1］，具有清熱解毒、散結(jié)消腫之功效，用于風(fēng)熱感冒、溫病初起、溫?zé)崛霠I、熱淋尿閉［2］、丹毒、斑疹等［3-4］的治療，被視為瘡家要藥［5］。近年來，對連翹藥理學(xué)作用的報(bào)道不斷增多，連翹有效成份有連翹酚、揮發(fā)油類［6-7］、連翹酯苷、連翹苷、黃酮類［8-9］、熊果酸等［10］，其中連翹苷是連翹抗菌和抗病毒作用的活性成分［11］。連翹的果實(shí)和葉子均可入藥，連翹葉在我國河北等地被制成茶葉作為保健飲料，有較好的保健價(jià)值［12］；以連翹為主要原料的中成藥也較多，如連翹敗毒丸、連翹敗毒膏、雙黃連口服液、銀翹解毒片、雙黃連膠囊等。

商洛是我國大宗藥材連翹的主要產(chǎn)區(qū)，連翹也是商洛市確定的五大商藥之一，蘊(yùn)藏量大，分布區(qū)域廣。本課題組在商洛連翹主要產(chǎn)區(qū)采樣，確定商洛五個(gè)縣區(qū)的14個(gè)樣方點(diǎn)，根據(jù)朱壽東、周紅敏等［13-14]研究報(bào)道，結(jié)合實(shí)際，按照(4×10)m2確定樣方。以連翹苷含量為指標(biāo)，按照藥典標(biāo)準(zhǔn)，采用高效液相色譜法對不同區(qū)縣連翹中連翹苷含量進(jìn)行比較，明確商洛連翹優(yōu)質(zhì)產(chǎn)區(qū)與主要群落分布區(qū)域。為商洛連翹藥用資源開發(fā)利用和進(jìn)一步規(guī)范化種植提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 藥材與試劑 青翹采自商洛5個(gè)縣區(qū)14個(gè)樣方點(diǎn)，確定樣方時(shí)間為2011年3月，采集藥材時(shí)間為2011年7月，經(jīng)西北農(nóng)林科技大學(xué)梁宗鎖教授鑒定為正品。將所采青翹蒸熟、曬干，備用；連翹苷標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品鑒定所)；甲醇、乙腈等化學(xué)試劑均為色譜純；純凈水。藥材分析試驗(yàn)地點(diǎn)為商洛學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程系分析實(shí)驗(yàn)室，試驗(yàn)時(shí)間為2012年6月。

1.2 主要儀器 L C-10A T島津高效液相色譜儀；S P D-10A紫外-可見檢測器；浙江大學(xué)N2000色譜工作站；高速中藥粉碎機(jī)(青州市精誠機(jī)械有限公司，W K-1000A型)；萬分之一電子天平(S A R T OO-R I U S公司，A U W220型)；超聲波清洗儀器(昆山市超聲儀器有限公司，K Q5200B型)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(無錫市星海王生化設(shè)備有限公司，R501B型)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市科析儀器有限公司，HH-4型)；電熱恒溫鼓風(fēng)真空干燥箱 (上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，D GG-9203A D型)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 參照中國藥典方法［2］，并適當(dāng)調(diào)整。色譜柱：C18(250mm×46mm，10μm)；流動(dòng)相：乙腈∶水=30∶70；檢測波長：277 n m；流速：1.0m L/m in；柱溫：室溫，見圖1。

圖1 連翹苷標(biāo)準(zhǔn)品及供試品的HPLC圖譜

2.2 對照品溶液與供試品溶液的制備 精密稱取連翹苷標(biāo)準(zhǔn)品4.66 m g加少量甲醇，于10 m L容量瓶中精確定容至刻度線，得0.466 m g/m L連翹苷對照品溶液，備用；供試品溶液的制備：精密稱取采自不同產(chǎn)地的連翹果實(shí)干燥粉末(過5號(hào)篩)各1.000g，至50m L錐形瓶中，加70%甲醇20m L，過夜，超聲波提取30分鐘，搖勻，濾過，靜置，取上清液移入10m L容量瓶中，稀釋至刻度，待測。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取0.466m g/m L連翹苷對照品溶液，加甲醇稀釋成0.023 3、0.031 1、0.0466、0.0923、0.186 4 m g/m L的連翹苷對照品溶液，依次吸取上述溶液10μL，注入H P L C色譜儀，記錄峰面積，以峰面積(A)為橫坐標(biāo)，濃度(C)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸處理得回歸方程：

表明連翹苷含量和峰面積之間有良好的線性關(guān)系。

2.4 藥材供試品含量的測定 精密吸取藥材供試品溶液10μL進(jìn)樣，采用外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果顯示不同產(chǎn)地連翹苷平均含量高低順序?yàn)椋荷疥柺^梁＞山陽趙川＞商南＞商州＞洛南石門＞丹鳳＞洛南靈口。其中山陽石頭梁所采樣品連翹苷含量最高，均值達(dá)0.862%，其次是山陽趙川所采樣品連翹苷含量為0.782%，洛南靈口所采樣品連翹苷含量最低，為0.175%，RS D值均小于1.5%，說明山陽石頭梁所選樣方生理、生態(tài)環(huán)境最適宜連翹藥材生長，見表1。

表1 不同產(chǎn)地青翹中連翹苷含量測定結(jié)果(n=3)

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取連翹苷對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，根據(jù)中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，結(jié)果均大于0.9；相對峰面積比值RS D均小于1.624%。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取連翹藥材樣品適量，精密稱定，制備供試品溶液，分別靜置0、2、4、8、16、24小時(shí)，各吸取10μL注入色譜柱，記錄色譜峰面積，連翹苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RS D=1.0%，說明樣品在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取連翹藥材樣品制備供試品溶液6份，依次進(jìn)樣，記錄峰面積，各主要色譜峰相對保留時(shí)間RS D均小于0.20%，相對峰面積比值的RS D均小于1.20%。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取樣品1.000 g，加入連翹苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，按照“2.2”項(xiàng)下方法測定，計(jì)算回收率平均值，結(jié)果RS D=1.38%。

2.9 生態(tài)環(huán)境因子 不同產(chǎn)地連翹苷含量差異較大，可能與各地生態(tài)環(huán)境因素及生產(chǎn)管理措施不同有關(guān)，山陽樣方溫度適宜，光照充足，植物光合作用較強(qiáng)，連翹植株株高、單株產(chǎn)量較高；而洛南地處中國秦嶺-淮河南北地理氣候分界線秦嶺東段，橫跨黃河、長江兩大流域，氣候涼、爽、潤，尤其作為華山之南的陽坡是一張?zhí)熨n“避暑涼床”，縣域平均溫度低于商州2～3℃，也遠(yuǎn)低于其余各縣，見表2。

表2 不同產(chǎn)地生態(tài)環(huán)境因子比較

3 結(jié)論

本研究所采樣品連翹苷含量均大于中國藥典規(guī)定的0.15%［2］，且最高含量達(dá)中國藥典規(guī)定近6倍。本研究通過商洛連翹主產(chǎn)區(qū)不同區(qū)縣所采連翹果實(shí)的連翹苷含量比較，明確了山陽石頭梁所選樣方為商洛連翹優(yōu)質(zhì)產(chǎn)區(qū)與主要群落分布區(qū)域。

本研究采用H P L C-R P B P CF法對連翹藥材的主成份連翹苷含量進(jìn)行了測定，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量計(jì)算，并進(jìn)行了精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和回收率實(shí)驗(yàn)，RS D值均小于2.0%，說明藥材穩(wěn)定性好，精密度、重現(xiàn)性和回收率良好。

連翹的藥用成份較多，關(guān)于研究方法的報(bào)道也逐年增加。崔洋等［15］對連翹進(jìn)行了高效液相色譜指紋圖譜研究；袁敏等［16］利用氣相色譜對連翹藥材進(jìn)行了指紋圖譜研究，連翹藥材的主成份連翹苷的含量能夠反映連翹藥材的基本質(zhì)量，是評(píng)價(jià)連翹藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)［17-18］；朱小強(qiáng)等［19-20］對商洛連翹G A P栽培技術(shù)和增產(chǎn)效果進(jìn)行了研究，有力推動(dòng)了商洛連翹的規(guī)范化種植。本研究按照中國藥典，采用科學(xué)分析方法，明確商洛連翹優(yōu)質(zhì)產(chǎn)區(qū)與主要群落分布區(qū)域。然而，商洛連翹藥材主成份連翹苷優(yōu)質(zhì)產(chǎn)區(qū)的土壤養(yǎng)分等相關(guān)影響因素研究及連翹其他藥用成份對比研究有待進(jìn)一步展開。

［1］ 常明榮，萬素蘭.常用植物連翹的本草考證［J］.山東醫(yī)藥工業(yè)，1998，17(5)：26-27.

［2］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部［M］.北京.中國醫(yī)藥科技出版社，2010：319.

［3］ 周改蓮，辛寧，張守平，等.連翹不同部位及不同炮制方法的活性成分比較［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2008，15(增刊): 30-31.

［4］ 段文錄，呂本蓮.豫產(chǎn)連翹揮發(fā)油化學(xué)成分研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(19)：7963-7964.

［5］ 康文藝，王金梅，張麗.河南產(chǎn)連翹葉抑制α-糖苷酶活性成分研究［J］.中國中藥雜志，2010.35(9)：1156-1159.

［6］ Nishibe S，Okabe K，Tsukamoto H，et al.Studies on the Chinese crude drug"Forsythiae Fructus"VI［J］.Charm Bul l，1982，30(12)：4548-4553.

［7］ Endo K，Hikino H.St ructures of rengyol，rengyoxide and rengyolone，new cyclohexylethane，derivatives f rom Forsythia suspensa［J］.Can J.Chem，1984，62(10)：2011-2014.

［8］ Tsukamoto H，Hisada S.，Nishibe S.Studies on the l ignans f rom oleaceae plant［J］.Tennen YukiKagobutsu Toronkai Koen Yoshishu，1983，26：181-188.

［9］ Naghski J，Porter WL.Isolation of rutin f rom two varieties of forsythia intermedia［J］.J Am Chem Soc，1947，69：572.

［10］孫紅祥.連翹去心研究［J］.中國藥學(xué)雜志，1992，27(11)：683-685.

［11］趙詠梅，李發(fā)榮，楊建雄，等.連翹苷降血脂及抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2005，17(2)：157-159.

［12］李發(fā)榮，段飛，楊建雄.中藥連翹及連翹葉中連翹苷含量的比較研究［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2004，24(4)：725-727.

［13］朱壽東，劉慧平，黃璐琦，等.栽培藥材川續(xù)斷地上部分體積估算的最優(yōu)樣方選擇［J］.植物生態(tài)學(xué)報(bào)，2012，36(2)：151-158.

［14］周紅敏，惠剛盈，趙中華，等.森林結(jié)構(gòu)調(diào)查中最適樣方面積和數(shù)量的研究［J］.林業(yè)科學(xué)研究，2009.22(4)：482-485.

［15］崔洋，王巧，張?zhí)m桐，等.河北道地藥材連翹的高效液相色譜指紋圖譜研究［J］.中草藥，2010，41(2)：297-301.

［16］袁敏，曾志，宋力飛，等.氣相色譜指紋圖譜用于連翹的質(zhì)量控制［J］.分析化學(xué)，2003，31(4)：455-458.

［17］鄭尚永，顧櫻花，楊俊旺.不同產(chǎn)地連翹中連翹苷含量差異比較［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39(26)：15971-15972.

［18］黃九林.陜南連翹的綜合開發(fā)利用［J］.河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，13(6)：66-67.

［19］朱小強(qiáng)，魏歌龍，黃霞.連翹GAP栽培技術(shù)研究［J］.陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004(4)：80-82.

［20］朱小強(qiáng)，王斌.施肥對連翹增產(chǎn)效果的試驗(yàn)研究［J］.林業(yè)科技，2005，30(5)：56-57.

Com parison of Phillyrin Contents in LianQiao from D ifferent Areasof Shangluo

SONG Xiaojun,LIYuqin,LEILi,LIHuimin,GAO Jiren
Shangluo Vocational and Technological College,Shangluo 726000,China

Objective:To compare the effective contents of phillyrin(C27H34Oll)in LianQiao(forsythia suspensa vahl)of differentplaces in Shangluo.Method:High Performance Liquid Chromatography(HPLC)wasused to detect the phillyrin contents in Lianqiao from different producing areas.Results:The phillyrin contents in LianQiao fruits of differentareas varied sharply;the contents in the samplesof Shitouliang in Shanyang county were the highest,in the samplesof Zhaochuan in Shanyang countywere the higherand in the samplesof Lingkou in Luonan countywere the least.Conclusion:Thegreatdifferencesare presented in thephillyrin contentsof LianQiao of differentareas,induced by ecologicalenvironment factorsof LianQiao's different producing placesand the differentproducing managementmeasurement.

HPLC;phillyrin;content;Shangluo

R284.1

A

1004-6852(2015)03-0029-03

2014-04-02

陜西省商洛市科技局科技項(xiàng)目(編號(hào)SKJ2010-07)。

宋小俊(1966—)，女，碩士學(xué)位，副教授。研究方向：中草藥有效成分提取、分離、鑒定及分析。