趙成國(guó)，秦書芝，2，張 瑤，夏 婷，肖洪彬

1吉林大學(xué)珠海學(xué)院，廣東 珠海 519041；2黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)

鬼箭羽抗心肌缺血作用的實(shí)驗(yàn)研究

趙成國(guó)1，秦書芝1，2，張 瑤1，夏 婷1，肖洪彬2△

1吉林大學(xué)珠海學(xué)院，廣東 珠海 519041；2黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)

目的：探討鬼箭羽抗大鼠急性心肌缺血損傷的作用機(jī)制。方法：將健康Wistar大鼠經(jīng)ECG篩選后隨機(jī)分為鬼箭羽高、中、低劑量組，模型組，假手術(shù)組，陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。采用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法建立大鼠急性心肌缺血模型，檢測(cè)血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、血清丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、一氧化氮(NO)等指標(biāo)。結(jié)果：鬼箭羽高、中劑量組能降低模型大鼠血清CK、CK-MB、AST、LDH和MDA水平，提高模型大鼠血清SOD、NO含量，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：鬼箭羽對(duì)急性心肌缺血大鼠的心肌細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用，有一定防治心肌缺血的作用。

急性心肌缺血；冠狀動(dòng)脈結(jié)扎；鬼箭羽；心肌酶

鬼箭羽為衛(wèi)矛科植物(Euonymusalatus B u c h.)，又名衛(wèi)矛。味苦、辛，性寒，入肝脾經(jīng)，具有活血化瘀、破血、通經(jīng)之功，用于治療癥瘕、閉經(jīng)、產(chǎn)后瘀滯腹痛等癥［1］。主要含有黃酮類、甾體類、多糖等多種化學(xué)成分［2］。具有抗心肌缺血、降血糖及延緩動(dòng)脈粥樣硬化等作用［3-4］。本實(shí)驗(yàn)探討鬼箭羽抗急性心肌缺血的藥理作用及作用機(jī)制，為新藥開(kāi)發(fā)及指導(dǎo)臨床用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)用藥 鬼箭羽水提物(簡(jiǎn)稱鬼箭羽，16.13 g生藥/g)由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供；陽(yáng)性對(duì)照藥為心得安片(常州康普藥業(yè)有限公司，批號(hào)：0509011)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選Wi star大鼠，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：黑動(dòng)字第P00101006號(hào)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 L i sa300全自動(dòng)生化分析儀(法國(guó))；M ed l ab多通道生物信號(hào)分析系統(tǒng)(南京美易科技有限公司)；H X-200動(dòng)物呼吸機(jī)(成都泰盟科技有限公司)；755型分光光度計(jì)(山東高密分析儀器廠)；電子天平(梅特勒－托利多儀器有限公司)；K D C-40離心機(jī)(科大創(chuàng)新有限公司)。

1.4 主要試劑 肌酸激酶(C K)試劑盒(批號(hào)：090061)；肌酸激酶同工酶(C K-M B)試劑盒(批號(hào)：100031)；乳酸脫氫酶(L D H)試劑盒(批號(hào)：130021)；谷草轉(zhuǎn)安酶(A S T)試劑盒(批號(hào)：120032)，以上試劑盒均購(gòu)于中生北控生物科技有限公司。丙二醛(M D A)試劑盒(批號(hào)：20100621)；超氧化物岐化酶(S O D)試劑盒(批號(hào)：20101109)；一氧化氮(N O)試劑盒(批號(hào)：20101217)，均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.5 方法

1.5.1 分組及給藥 將健康Wi star大鼠進(jìn)行E C G篩選，棄去S-T段、T波及心律異常者。將篩選合格大鼠隨機(jī)分為鬼箭羽高、中、低組劑量組，模型組，假手術(shù)組，陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。鬼箭羽高、中、低組給藥劑量分別為12.0、6.0、3.0g/k g。模型組和假手術(shù)給予同體積蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照組劑量為2.8m g/k g。均灌胃給藥。1次/d，給藥7天。

1.5.2 模型制備 大鼠末次給藥2小時(shí)后，戊巴比妥麻醉(30m g/k g)，備毛，分離肌肉層，剪斷第四、五肋骨，氣管插管，連接呼吸機(jī)輔助呼吸(吸呼比為1∶2，頻率為64次/m in，潮氣量為12m L/k g)。鈍性分離心包膜，暴露心臟，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，結(jié)扎后放回心臟，關(guān)閉胸腔，縫合肌肉及皮膚。模型制備過(guò)程中大鼠死亡8只，其中假手術(shù)組2只，模型組1只，鬼箭羽高組2只、中組2只，陽(yáng)性對(duì)照組1只，均為手術(shù)過(guò)程中痰液清理不及時(shí)窒息死亡。

1.5.3 血樣采集與處理 結(jié)扎5小時(shí)后，下腔靜脈取血，離心(3 000轉(zhuǎn)，l0分鐘)取血清，測(cè)定C K-M B、C K、L D H、M D A等指標(biāo)。

1.5.4 梗死面積計(jì)算 取血后迅速剪下心臟，生理鹽水沖洗，清除血管及脂肪組織，吸去水分，全心稱重。將心臟置于冰箱中速凍，取出后由心尖至心底切成等厚5片，放入新配制的1%氯化三苯基四氮唑(TT C)溶液中，37℃恒溫水浴，染色15分鐘。染色后流水沖洗去除多余染料，梗死區(qū)不染色，未梗死區(qū)呈紅色。切取梗死區(qū)稱重，計(jì)算梗死面積(%)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用S P SS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)量資料以(±s)表示，采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死面積的影響 與模型組比較，各給藥組心肌梗死面積均減少，其中以鬼箭羽高、中組作用顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 對(duì)急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死面積的影響(±s)

表1 對(duì)急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死面積的影響(±s)

注：同模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別 例數(shù) 劑量/(g·kg-1) 梗死面積/%假手術(shù)組 8 - 0模型組 9 - 11.76±2.49鬼箭羽高組 8 12.0 8.39±1.95**鬼箭羽中組 8 6.0 9.46±2.21*鬼箭羽低組 10 3.0 9.97±1.78陽(yáng)性對(duì)照組 9 0.0028 8.26±2.50**

2.2 對(duì)急性心肌缺血模型大鼠血清心肌酶CK、CK-MB、LDH及AST的影響 與模型組比較，假手術(shù)組血清C K、C K-M B、L D H、A S T含量均降低(P＜0.01)；鬼箭羽高、中組血清C K、C K-M B、L D H、A S T含量降低(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 對(duì)急性心肌缺血模型大鼠血清CK、CK-MB、LDH及AST的影響(±s)

表2 對(duì)急性心肌缺血模型大鼠血清CK、CK-MB、LDH及AST的影響(±s)

注：與模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別 例數(shù) 劑量/(g·kg-1) 肌酸激酶/(U·L-1)肌酸激酶同工酶/(U·L-1)乳酸脫氫酶/(U·L-1)谷草轉(zhuǎn)氨酶/(U·L-1)假手術(shù)組 8 - 43.30±9.48**28.3±5.09**89.9±12.4**212.2±21.3**模型組 9 - 75.10±18.00 44.0±9.83 158.7±22.8 333.3±43.5鬼箭羽高組 8 12.0 52.80±11.90**30.5±7.31**123.3±17.3**270.6±34.2**鬼箭羽中組 8 6.0 58.10±13.80*34.1±9.44 133.8±17.4*282.7±36.0*鬼箭羽低組10 3.0 65.60±16.60 37.8±7.45 142.3±20.2 298.7±38.7陽(yáng)性對(duì)照組 9 0.0028 51.30±11.60**35.1±8.14**109.0±17.3**285.4±39.5**

2.3 對(duì)急性心肌缺血模型大鼠血清MDA、SOD、NO的影響 同模型組比較，假手術(shù)組M D A升高(P＜0.01)，S O D、N O均下降(P＜0.01)；鬼箭羽高、中組血清M D A含量降低(P＜0.05)，S O D、N O升高(P＜0.05)，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表3。

表3 對(duì)急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD及NO的影響(±s)

表3 對(duì)急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD及NO的影響(±s)

注：與模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

?

3 討論

冠心病是一種由冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或痙攣導(dǎo)致其狹窄或堵塞引發(fā)的心肌缺血缺氧性病變［5-9］。近年來(lái)，隨著人民生活水平的提高，冠心病的發(fā)病率逐年上升，作為高發(fā)病率、高危險(xiǎn)性、高死亡率的重大疾病嚴(yán)重威脅著人類的健康［10-12］。心肌缺血缺氧使心肌細(xì)胞受損，導(dǎo)致多種酶體大量釋放進(jìn)入血液。因此，檢測(cè)血中相關(guān)酶的活性變化可反映心肌壞死的演變過(guò)程，這些酶學(xué)指標(biāo)有L D H、A S T、C K等［13］。M D A是脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，可作為脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)強(qiáng)弱的指標(biāo)，所以檢測(cè)M D A的含量可間接反映細(xì)胞損傷的程度［14-15］；超氧化物歧化酶(S O D)的活力可反映機(jī)體清除氧自由基的能力，可對(duì)缺血的心肌起保護(hù)作用［16-17］；N O具有減弱心肌收縮力的作用，使心肌耗氧量減少［18］。

本研究表明，鬼箭羽能夠縮小冠狀動(dòng)脈結(jié)扎引起的模型大鼠心肌梗死面積，能降低模型大鼠血清C K、C K-M B、A S T、L D H、M D A的含量，提高模型大鼠血清N O、S O D含量，說(shuō)明鬼箭羽可通過(guò)不同途徑對(duì)心肌細(xì)胞起保護(hù)作用，具有一定的抗心肌缺血作用。

［1］ 田代華.實(shí)用中藥辭典［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1426-1429.

［2］ 陳云華，龔慕辛，盧旭然，等.鬼箭羽的降糖有效部位的化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(7)：42-43.

［3］ 陳云華，龔慕辛，盧旭然，等.鬼箭羽及同屬植物主要藥理作用及有效成分研究進(jìn)展［J］.北京中醫(yī)藥，2010，29(2)：143-147.

［4］ 王萍.鬼箭羽抗心肌缺血作用及化學(xué)成分研究［D］.哈爾濱：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2004.

［5］ 張慧玲.芪參益氣滴丸對(duì)改善冠心病心肌缺血狀態(tài)的療效觀察［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23(10)：2642-2643.

［6］ 王瑞福.調(diào)脂湯對(duì)冠心病PCI木后血液流變學(xué)及血脂的影響［J］.西部中醫(yī)藥，2013，26(12)：71-72.

［7］ 劉瑞，馬超慧.優(yōu)質(zhì)護(hù)理對(duì)冠心病患者滿意率的影響［J］.西部中醫(yī)藥，2013，26(9)：116-117.

［8］ 王志廣，陳炳偉，呂納強(qiáng)，等.冠心病患者應(yīng)用他汀對(duì)動(dòng)脈僵硬度的影響［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10(15):31-33.

［9］ 李鳳榮.丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液與紅花注射液治療冠心病療效對(duì)比［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2010，48(30):38.

［10］劉慧，何松林，呂湛，等.中老年冠心病患者介入治療170例臨床分析［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2010，(26):142-143.

［11］覃仁安，李楚源，臧忠良，等.腦心清片對(duì)犬急性心肌缺血的影響［J］.中藥藥理與臨床，2013，29(1)：126-129.

［12］Andrew M，Gu DF，Zhao D，et al.Future cardiovascular disease in China［J］.Circulation，2010，10(3)：243-252.

［13］李鑫輝，張炳填.溫陽(yáng)化痰法對(duì)急性心肌缺血大鼠心肌酶及心肌病理形態(tài)學(xué)的影響［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2009，27(8)：1657-1660.

［14］Gawel S，Wardas M，Niedworok E，et a1.Malondialdehyde (MDA)as a lipid peroxidation marker［J］.Wiad Lek，2004，57(9-10)：453-455.

［15］龍梅，王瓊，閆玉仙，等.三七總皂苷對(duì)缺血再灌注損傷后大鼠腦組織的MDA、GSH-PX表達(dá)的影響［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，13(12)：2257-2260.

［16］吳艷春.芪參護(hù)心湯對(duì)急性心肌缺血再灌注損傷大鼠MDA及SOD的影響［D］.哈爾濱：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2009.

［17］孫娟.趙啟韜，黃臻輝，等.瓜蔞皮對(duì)急性心肌缺血大鼠的保護(hù)作用［J］.中藥藥理與臨床，2013，29(3)：114-116.

［18］金文濤，朱衛(wèi)金，薛宏峰.冠心病患者治療前后血清NO/NOS和PGMP檢測(cè)的臨床意義［J］.放射免疫學(xué)雜志，2007，20(6)：528-529.

Experim entalStudieson the Anti-ischem ic Function of GuiJianYu

ZHAO Chengguo1,QIN Shuzhi1，2,ZHANG Yao1,XIA Ting1,XIAO Hongbin2△
1 ZhuhaiCollege of Jilin University,Zhuhai519041,China; 2 Heilongjiang University of Chinese Medicine

Objective:To evaluate themechanism of GuiJianYu fighting against the impairment induced by acutemyocardial ischem ia(AM I)in rats.Methods:A fter performed ECG screening,the healthyW istar ratswere random ly divided into the high,middle and low dose groups of GuiJianYu,themodelgroup,the sham group aswellas the positive control group w ith 10 cases in each.The AM Imodelswere established by coronary artery ligation and the levelsof serum creatine kinase(CK),creatine kinase MBmass(CK-MB),aspartate am inotransferase(AST),lactate dehydrogenase(LDH),serum malondialdehyde(MDA),superoxide dismutase(SOD)and nitric oxide(NO) were detected in differentgroups.Results:The levelsof ratsserum CK,CK-MB,AST,LDH and MDAmarkedly decreased in the high and m iddle dose groups of GuiJianYu and the serum SOD and NO significantly increased,and the differences in comparing these groupsw ith themodelgroup had statisticalmeaning(P＜0.05).Conclusion:Gui－JianYu has certain protective function for the themyocardial cells of the AM Irats and can prevent AM Ioccurrence in a certain degree.

acutemyocardial ischem ia AM I;coronary artery ligation;GuiJianYu(euonymusalatus); myocardium enzyme

R285.5

A

1004-6852(2015)03-0019-03

2014-02-10

趙成國(guó)(1978—)，男，碩士學(xué)位，講師。研究方向：中藥分析及藥理學(xué)。

△通訊作者：肖洪彬(1957—)，男，博士后合作導(dǎo)師，博士研究生導(dǎo)師，教授。研究方向：方劑配伍規(guī)律及方劑療效客觀化的研究。