王岳峰，丁昭利

西南交通大學(xué)峨眉校區(qū),四川 峨眉 614202

峨?yún)⒍嗵呛繙y(cè)定與抗氧化作用的研究*

王岳峰，丁昭利

西南交通大學(xué)峨眉校區(qū),四川 峨眉 614202

目的：測(cè)定峨?yún)⑻崛∥镏械亩嗵呛坎⒀芯科淇寡趸饔?。方法：按照硫?蒽酮法，在分光光度計(jì)620 nm處測(cè)定吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線所得回歸方程計(jì)算峨?yún)⒍嗵堑暮?；同時(shí)采用鄰苯三酚在堿性條件下能發(fā)生自氧化的原理，根據(jù)抑制率=［A0-(Ax-Ai0)］/A0×100%，計(jì)算不同濃度的峨?yún)⒍嗵菍?duì)超氧陰離子產(chǎn)生的抑制率來觀察其抗氧化作用。結(jié)果：峨?yún)⑻崛∥镏卸嗵菨舛葹?.389 9 mg/mL，含量為38.99%；且在0.1～1 mg/mL濃度內(nèi)，多糖對(duì)超氧陰離子的抑制率隨多糖濃度的增加而增強(qiáng)，在0.6～1 mg/mL濃度之間，其抑制率明顯增強(qiáng)，最大抑制率達(dá)到31.22%。結(jié)論：峨?yún)⑻崛∥镏械亩嗵呛枯^高，且具良好的體外抗氧化活性，為把峨?yún)⒍嗵亲鳛樘烊豢寡趸瘎╅_發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。

峨?yún)?多糖；含量測(cè)定；抗氧化

峨?yún)閭阈慰贫雲(yún)僦参锒雲(yún)nthriscus sylvestris(L.)Hoffm.，主要含有峨?yún)?nèi)酯，具有殺蟲、抑制癌細(xì)胞增殖，抗病毒、抗癌和抗有絲分裂的作用[1-5]。本文在原有研究的基礎(chǔ)上,對(duì)其多糖的含量進(jìn)行測(cè)定,并對(duì)峨?yún)⒍嗵强寡趸饔眠M(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 峨?yún)⒍嗵歉稍锓勰ㄕn題組自行制備）

1.2 藥品和主要試劑 鄰苯三酚（分析純）,成都金線科技有限公司提供,批號(hào)：20100420；T r i s（分析純），成都金線科技有限公司提供，批號(hào)：20090315；蒽酮（分析純），成都市科龍化工試劑廠提供，批號(hào)：20101105；鹽酸成都市科龍化工試劑廠提供，批號(hào)：20100320；濃硫酸，成都市科龍化工試劑廠提供，批號(hào)：20100320；無水葡萄糖成都市科龍化工試劑廠提供，批號(hào)：20101020。

1.3 主要儀器及設(shè)備 FA2204B型精密天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司提供；電子天平（61872型），上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司提供；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州澳華儀器有限公司提供；T U-1901型雙光束紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司提供。

1.4 多糖的含量測(cè)定

1.4.1 原理 采用硫酸-蒽酮的方法，因?yàn)槎嗵窃跐饬蛩嶙饔孟?，可以水解成單糖分子，并迅速脫水生成糠醛，之后糠醛與蒽酮縮便合成糠醛衍生物，呈藍(lán)綠色，顏色很穩(wěn)定，在620 n m處有特征吸收，可以測(cè)定多糖含量。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 取18支具塞試管，分成3組。每組分別加入0.1m g/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL然后加蒸餾水至1.0mL，沿試管壁緩慢加入0.2%蒽酮-濃硫酸4.0mL，振蕩器混勻，在沸水浴中加熱10分鐘，冷卻10分鐘后，以不加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的試管為對(duì)照，在分光光度計(jì)上測(cè)定620 n m處吸光值。

1.4.3 多糖含量測(cè)定 稱取峨?yún)⒍嗵歉稍锓勰?.100 0 g于100mL容量瓶中，用蒸餾水定容，制成濃度為1m g/mL的峨?yún)⒍嗵侨芤骸Ｒ迫?.5mL峨?yún)⒍嗵且?，按照硫?蒽酮法，在分光光度計(jì)上測(cè)定620 n m處測(cè)定吸光度。按標(biāo)準(zhǔn)曲線所得回歸方程計(jì)算峨?yún)⒍嗵堑暮俊?/p>

1.5 抑制超氧陰離子

1.5.1 原理 采用鄰苯三酚在堿性條件下能發(fā)生自氧化的原理，

1.5.2 實(shí)驗(yàn)操作方法 于9支10mL具塞試管中移取4.5mL 50mmo l/L的T r i s-Acc緩沖溶液（p H=8.2），每支試管加入4.2mL雙蒸水，再分別取1mL濃度為1.0m g/mL、0.8m g/mL、0.6m g/mL、0.4 m g/mL、0.2 m g/mL、0.1 m g/mL、0.05 m g/mL濃度的峨?yún)⒍嗵且河诘?～9支試管中，第1～2支試管用雙蒸水補(bǔ)足。20℃水浴20分鐘后，第2～9支試管中加入濃度為10mmo l/L的鄰苯三酚0.4mL，立即搖勻，準(zhǔn)確反應(yīng)4分鐘，立即加入8 mo l/L H C l 0.1mL終止反應(yīng)，325 n m測(cè)吸光值。

2 結(jié)果

2.1 超氧陰離子的抑制率 根據(jù)抑制率=［A0-(A x-A i0)］/A0×100%，計(jì)算不同濃度多糖對(duì)超氧陰離子產(chǎn)生的抑制率。見表1。

表 1 多糖超氧陰離子抑制率

2.2 峨?yún)⒍嗵堑暮?以回歸方程y=5.575x+ 0.119 1，計(jì)算峨?yún)⒍嗵菨舛葹?.389 9m g/mL，含量為38.99%。見表2。

表 2 葡萄糖不同濃度的吸光度值

3 討論

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果顯示，所得的回歸方程為y=5.575x+0.119 1，R=0.999 6，說明采用硫酸-蒽酮法測(cè)定多糖含量，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好。多糖抑制超氧陰離子量效關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在0.1～1m g/mL濃度內(nèi)，多糖對(duì)超氧陰離子的抑制率隨多糖濃度的增加而增強(qiáng)。0.6～1m g/mL濃度之間，其抑制率明顯增強(qiáng)，最大抑制率達(dá)31.22%。

人體內(nèi)抗自由基損傷體系是一個(gè)復(fù)雜而完善的機(jī)能的體系，主要包括抗氧化酶和抗氧化劑兩類［6-7］。在自由基產(chǎn)生過多或者自由基消除功能降低時(shí)，自由基對(duì)身體的損傷就會(huì)顯現(xiàn)出來［8］。這時(shí)就需要依靠外力來幫助消除體內(nèi)過量的自由基，以防止疾病的發(fā)生。研究抗氧化作用的藥物對(duì)于預(yù)防和治療因自由基過剩引起的疾病有重要意義。本研究初次探索研究峨?yún)⒍嗵堑目寡趸饔茫ㄟ^峨?yún)⒍嗵菍?duì)超氧陰離子的抑制效果證實(shí)峨?yún)⒍嗵蔷哂辛己玫捏w外抗氧化活性。這將為今后開發(fā)峨?yún)⒍嗵菫樘烊豢寡趸瘎┨峁┝丝茖W(xué)依據(jù)。

[1] 王鳳岐，吳大真.峨眉神效驗(yàn)方[M].北京：科學(xué)普及出版社，1982：42.

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[4] 丁昭利，王岳峰，劉苡菡.峨?yún)⑻崛」に嚨膬?yōu)化研究[J].安微農(nóng)業(yè)科學(xué).2009，37（31）：15424-15425.

[5] 王岳峰，劉苡菡，耿耘，等.HPLC法測(cè)定峨?yún)⒅卸雲(yún)?nèi)酯[J].中成藥.2011，33（9）：1565-1567.

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[7] 涂顯琴，馬超英，耿耘，等.峨?yún)⑻崛∥飳?duì)肺癌細(xì)胞A549和H460的增殖抑制作用的初步觀察[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30（1）：60-62.

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Study on Content Determ ination and Antioxidant Activity of Polysaccharide in EShen

WANG Yuefeng,DING Zhaoli
Emei Branch of Xi'an Jiaotong University,Emei614202,China

Objective:To study on determination and antioxidant activity of polysaccharides in EShen[Anthriscus sylvestris (L.)Hoffm]extracts.Methods:According to the anthrone-sulfuric acid method,the contents of polysaccharides in EShen extractswere calculated by regression equation obtained from the standard curveand the absorbance wasmeasured under 620nm w ith spectrophotometer;simultaneously,w ith the principle of pyrogallic acid happening auto-oxidation in alkaline situation,the inhibition ratesof differentconcentrationsof polysaccharideson superoxide anion were calculated to observe its antioxidantactivity in the lightof inhibition rate=[A0-(Ax-Ai0)]/AO× 100%.Results:The concentrations of polysaccharides in EShe n extractswere 0.389 9mg/m L and 38.99%;the inhibition rate of polysaccharides in EShen extracts on superoxide anion increased as the concentrations of polysaccharides raised in the concentrations between 0.1 and 1mg/m L,the inhibition rates enhanced obviously in the concentrations between 0.6 and 1mg/ML,maximum inhibition rate reached 31.22%.Conclusion:Polysaccharides in EShen extracts are in high contents,which show better antioxidantactivity in vitro,itwould provide scientific basis for the developmentof polysaccharides in EShen extractsasa naturalantioxidant.

EShen;polysaccharide;contentdetermination;antioxidantactivity

R284.2

A

1004-6852(2015)08-0021-02

2014-10-25

四川省應(yīng)用基礎(chǔ)項(xiàng)目（編號(hào)：05JY029-099-1）。

王岳峰（1957—）男，副教授。研究方向：中藥學(xué)。