袁娟麗，賀中民

中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院藥劑科，陜西 西安 710038

龍星膠囊抗腦缺血作用的實驗研究

袁娟麗，賀中民

中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院藥劑科，陜西 西安 710038

目的：觀察龍星膠囊對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎大鼠腦缺血的保護作用，對小鼠斷頭后存活時間的影響。方法：采用結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動脈以造成腦缺血模型，觀察龍星膠囊的藥理作用。結(jié)果：1)龍星膠囊對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎大鼠腦含水量及腦指數(shù)有顯著影響，龍星膠囊3個劑量組(0.20、0.40、0.80 g/kg)，腦含水量明顯減少，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。組織病理學檢查表明龍星膠囊組的腦組織神經(jīng)細胞濃縮及深染較腦缺血模型組明顯減輕；神經(jīng)膠質(zhì)細胞腫脹及間質(zhì)疏松程度均明顯輕于模型組。2)龍星膠囊3個劑量組(0.20、0.40、0.80 g/kg)均能明顯降低全血黏度值，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；3)龍星膠囊3個劑量組(0.25、0.50、1.00 g/kg)給藥14天，與正常組比較可延長小鼠斷頭喘氣的時間(P＜0.05)。結(jié)論：龍星膠囊對大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈所致腦缺血損傷具有明顯的保護作用。

龍星膠囊；腦缺血；中風；大鼠；小鼠

腦血栓是指由于腦動脈壁病變，尤其是在動脈粥樣硬化的基礎上發(fā)生血流緩慢、血液成分改變或血黏度增高而形成血栓，致使動脈管腔明顯狹窄或閉塞，引起相應部位腦梗死的一種急性缺血性腦血管?。?］，是西北地區(qū)中老年人最常見、發(fā)病率最高的疾病之一。龍星膠囊由地龍、僵蠶、天南星(制)、水蛭等組成，在治療腦血栓引起的肢體麻木，半身不遂及動脈硬化癥等方面，取得了良好的臨床上療效。通過小白鼠病理實驗，研究龍星膠囊對腦組織的藥理影響，進一步驗證其對缺氧大腦的保護作用。

1 材料與方法

1.1 藥品 龍星膠囊藥粉(由第四軍醫(yī)大學藥物研究所提供，批號：20080321)，臨用前用蒸餾水配成不同濃度備用。

1.2 陽性對照藥 消栓通絡片 (湖南三九南開制藥有限公司生產(chǎn)，批號：20080601)。

1.3 試劑 戊巴比妥鈉 (國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，批號：WS20060401)；超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號：20081228)；丙二醛(MDA)試劑盒 (南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，批號：20081229)；乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒(南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，批號：20081230)；肝素鋰(湖北金杏科技有限公司，批號：20081219)。

1.4 儀器 德國Sartorius電子天平(感量10 mg)；TDZ5-WS多管架自動平衡離心機(湖南賽特湘儀離心機儀器有限公司提供)；鉆石牌秒表(上海秒表廠提供)；德國Axioskop40蔡司顯微鏡；日立KY2000型半自動生化分析儀；R4050A6型血流變分析儀(北京中勤世帝有限公司提供)；LG-E＆H-20動態(tài)血沉/壓積測試儀(北京中勤世帝有限公司提供)；CBV-1500A高性能無菌實驗臺，上海瑞仰凈化裝備有限公司。

1.5 動物 二級昆明種小鼠，雄雌各半，體質(zhì)量18～22 g；SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量250～350 g，均由第四軍醫(yī)大學實驗動物研究中心提供，生產(chǎn)合格證號：scxk(軍)字第2002-005號。

1.6 方法 龍星膠囊對腦缺血大鼠的保護作用，SD大鼠60只，隨機分為假手術(shù)組、腦缺血模型組、陽性組、龍星膠囊0.20、0.40、0.80g/kg劑量組，每組10只，共6組。連續(xù)灌胃給藥10天，末次給藥1小時后，大鼠1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)行腹腔麻醉，暴露雙側(cè)頸總動脈并結(jié)扎，形成急性不完全腦缺血模型，假手術(shù)組暴露雙側(cè)頸總動脈后不結(jié)扎。手術(shù)結(jié)束后繼續(xù)灌胃2天，末次給藥30分鐘，腹主靜脈取血5～6 mL，靜置，待血凝后離心(2 500 r/min，15分鐘)，取上清液，按試劑盒標示方法用日立KY2000型半自動生化分析儀測定血清中SOD、MDA含量和LDH活力。斷頭取腦，稱重，計算腦指數(shù)(腦指數(shù)=腦濕重×100/體質(zhì)量)，取左側(cè)后2/3大腦半球，稱濕重，置110℃烤箱中烤至恒重(24小時)，得干腦重量，計算腦含水量%=(濕重-干重)/濕重×100%。每組隨機取兩例固定于10%甲醛液中，流水沖洗，經(jīng)各級酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟包埋，切片，HE染色，封片，光鏡觀察其顯微結(jié)構(gòu)［1-2］。

2 結(jié)果

2.1 龍星膠囊對腦含水量及腦指數(shù)的影響 腦缺血模型組腦含水量及腦指數(shù)較假手術(shù)組明顯增高，2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；而龍星膠囊0.20、0.40、0.80 g/kg組腦含水量明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義((P＜0.05)；腦指數(shù)改善不明顯。見表1。

表1 龍星膠囊對腦含水量及腦指數(shù)的影響(χ±s)

表1 龍星膠囊對腦含水量及腦指數(shù)的影響(χ±s)

注:b表示與假手術(shù)組比較，P＜0.01；d表示與模型組比較，P＜0.01。

組別 例數(shù) 劑量/(g·kg-1) 腦含水量/% 腦指數(shù)假手術(shù)組 10 - 70.27±1.60 0.63±0.05模型組 10 - 79.16±3.11b0.78±0.12b小劑量組 10 0.20 72.30±2.62d0.76±0.05b中劑量組 10 0.40 70.61±5.12d0.77±0.07b大劑量組 10 0.80 72.64±3.67d0.77±0.05b陽性組 10 0.80 72.99±1.77bd0.75±0.04b

2.2 龍星膠囊對腦缺血大鼠血清中SO D、M D A、LD H的影響 與假手術(shù)組比較，模型組血清中MDA、LDH含量顯著升高，SOD含量顯著降低(P＜0.05)。龍星膠囊0.20、0.40、0.80 g/kg給藥組均能明顯減少血清中MDA、LDH含量，而血清中SOD含量明顯增加，與模型組比較差異明顯(P＜0.05)。見表2—3。

表2 龍星膠囊對腦缺血大鼠血清SO D、M D A含量的影響(±s)

表2 龍星膠囊對腦缺血大鼠血清SO D、M D A含量的影響(±s)

注：與假手術(shù)組比較，a表示P＜0.05，b表示P＜0.01；與模型組比較，c表示P＜0.05，d表示P＜0.01。

組別 例數(shù) 劑量/(g·kg-1) SO D/(U·m L-1) M D A/(nm ol·m L-1)假手術(shù)組 10 - 149.27±6.76 2.87±0.48模型組 10 - 116.69±16.15b3.76±0.97a小劑量組 10 0.20 142.08±13.05d2.50±0.63d中劑量組 10 0.40 140.43±11.49d2.53±0.65d大劑量組 10 0.80 148.46±7.40d2.84±0.84c陽性組 10 0.80 137.49±9.24bd2.65±0.94c

表3 龍星膠囊對腦缺血大鼠血清LD H含量的影響(±s)

表3 龍星膠囊對腦缺血大鼠血清LD H含量的影響(±s)

注：b表示與假手術(shù)組比較，P＜0.01；d表示與模型組比較，P＜0.01。

組別 例數(shù) 劑量/(g·kg-1) LD H/(U·L-1)假手術(shù)組 10 - 3247.93±1318.24模型組 10 - 6299.54±1084.97b小劑量組 10 0.20 5500.48±1210.64b中劑量組 10 0.40 3608.26±1914.79d大劑量組 10 0.80 3537.33±1239.02d陽性組 10 0.80 4140.11±1430.85d

2.3 組織病理學檢查 鏡下所見假手術(shù)組大鼠腦組織正常結(jié)構(gòu)存在，神經(jīng)細胞核膜清楚、可見核仁；神經(jīng)膠質(zhì)細胞核仁清晰，胞漿淡染，細胞膜和核膜清晰，毛細血管或小血管管腔較小。腦缺血模型對照組的大鼠腦組織正常結(jié)構(gòu)紊亂，神經(jīng)細胞核膜不清、細胞核染色較給藥組深，核仁不清晰；神經(jīng)膠質(zhì)細胞核仁不明顯，胞漿疏松、染色較給藥組深，細胞膜和核膜尚清晰，小血管管腔擴張明顯。龍星膠囊小劑量給藥組腦組織正常結(jié)構(gòu)輕度紊亂，神經(jīng)細胞核膜不清、細胞核染色較中劑量組深，核仁不清晰；神經(jīng)膠質(zhì)細胞核仁不明顯，胞漿染色較中劑量組深，細胞膜和核膜尚清晰，小血管管腔擴張較中劑量組明顯。龍星膠囊中劑量給藥組腦組織正常結(jié)構(gòu)尚存，神經(jīng)細胞核膜尚清、細胞核染色較大劑量組深，核仁可見，不清晰；神經(jīng)膠質(zhì)細胞核仁不明顯，胞漿染色較小劑量組深，細胞膜和核膜尚清晰，小血管管腔擴張較明顯。龍星膠囊大劑量給藥組腦組織正常結(jié)構(gòu)尚存，神經(jīng)細胞核膜清楚、細胞核染色較假手術(shù)組深，核仁可見；神經(jīng)膠質(zhì)細胞核仁清晰，胞漿染色較假手術(shù)組深，細胞膜和核膜清晰，小血管管腔輕度擴張。陽性組腦組織正常結(jié)構(gòu)輕度紊亂，神經(jīng)細胞核膜不清、細胞核染色介于中劑量組與缺血模型對照組，核仁不清晰；神經(jīng)膠質(zhì)細胞核仁不明顯，胞漿疏松、染色較深，細胞膜和核膜尚清晰，小血管管腔擴張較明顯。見圖1—6。

圖1 假手術(shù)組(H E 200×)

圖2 大劑量組(H E 200×)

圖3 中劑量組(H E 200×)

圖4 小劑量組(H E 200×)

圖5 模型組(H E 200×)

圖6 陽性對照組(H E 200×)

2.4 龍星膠囊對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎的大鼠血液流變學的影響 SD大鼠60只，隨機分為假手術(shù)組，腦缺血模型組，陽性組，龍星膠囊0.20 g/kg、0.40 g/kg、0.80 g/kg劑量組，每組10只，共6組。連續(xù)灌胃給藥10天，末次給藥24小時后1%戊巴比妥鈉ip(30 mg/kg)麻醉，腹主靜脈取血，分別抽取1 mL和1.5 mL打入肝素鋰管中抗凝。一份測血流變指標，另一份測定血沉和紅細胞壓積變化。結(jié)果與假手術(shù)組比較，模型組全血黏度值切變率1、5、30、200 mPa/s顯著增大，龍星膠囊0.20、0.40、0.80 g/kg給藥組均能明顯降低全血黏度值，與模型組比較有明顯差異(P＜0.05)；與假手術(shù)組比較，模型組ESR血沉(mm/h)及紅細胞壓積無明顯差異，龍星膠囊組與之比較也無明顯差異。見表4—5。

表4 龍星膠囊對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎的大鼠血流變指標的影響

表4 龍星膠囊對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎的大鼠血流變指標的影響

注：與假手術(shù)組比較，a表示P＜0.05，b表示P＜0.01；與模型組比較，c表示P＜0.05，d表示P＜0.01。

組別 只數(shù) 劑量/(g·kg-1) 全血黏度值切變率(m Pa·s) 200 30 5 1假手術(shù)組 10 - 2.92±0.23 3.83±0.37 6.47±0.86 14.23±2.49模型組 10 - 4.47±0.42b7.74±2.43a15.98±2.89b43.08±2.43b小劑量組 10 0.20 3.92±0.09b5.79±1.06a9.51±0.07bc21.54±0.93bd中劑量組 10 0.40 3.84±0.76ac5.97±1.01ac9.05±0.88bd20.32±1.39bd大劑量組 10 0.80 3.62±0.11bd4.83±0.10bc8.20±0.22bd18.45±0.47bd陽性組 10 0.80 3.77±0.45bd5.08±1.01a8.97±2.47ac20.64±3.07bc

表5 龍星膠囊對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎的大鼠血沉及紅細胞壓積影響(χ±s)

表5 龍星膠囊對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎的大鼠血沉及紅細胞壓積影響(χ±s)

注：與假手術(shù)組比較，a表示P＜0.05，表示P＜0.01；與模型組比較c表示P＜0.05，d表示P＜0.01。

組別 只數(shù) 劑量/(g·kg-1) ESR血沉/(m m·h-1) 紅細胞壓積/(L·L-1)假手術(shù)組 10 - 1.67±0.58 0.42±0.01模型組 10 - 1.00±0.20 0.47±0.02a小劑量組 10 0.20 2.50±1.29 0.46±0.03中劑量組 10 0.40 1.25±1.17 0.46±0.01a大劑量組 10 0.80 2.33±0.58 0.45±0.03陽性組 10 0.80 1.50±0.71 0.43±0.06

2.5 龍星膠囊對小鼠斷頭后存活時間的影響 小鼠60只，雌雄各半，隨機分為正常、陽性、消栓通0.25 g/kg、0.50 g/kg、1.00 g/kg 5組，連續(xù)灌胃14天，于末次給藥1小時后斷頭，觀察、記錄小鼠斷頭后張嘴喘氣時間［3］。結(jié)果與正常組相比，龍星膠囊0.25、0.50、1.00 g/kg劑量組均可顯著延長小鼠斷頭喘氣時間(P＜0.05)。見表6。

表6 龍星膠囊對小鼠斷頭后存活時間的影響(±s)

表6 龍星膠囊對小鼠斷頭后存活時間的影響(±s)

注:與正常對照組比較，a表示P＜0.05，b表示P＜0.01。

組別 例數(shù) 劑量/(g·kg-1) 斷頭喘氣時間/s正常組 12 - 14.50±5.23小劑量組 12 0.25 18.40±1.96a中劑量組 12 0.50 21.00±5.35b大劑量組 12 1.00 21.55±2.51b陽性組 12 1.00 20.36±1.21b

3 討論

中風是由腦部血管形成栓塞導致腦供血不足或局部無血液供應所致，因此活血化瘀、通經(jīng)活絡是其主要的治療原則。龍星膠囊由地龍、僵蠶、天南星(制)、水蛭等組成，具有活血化瘀，溫經(jīng)通絡，祛風定驚，散結(jié)止痛的功效，用于治療腦血栓引起的精神呆滯、舌質(zhì)發(fā)硬、言語遲澀、發(fā)音不清、口眼歪斜、肢體麻木、半身不遂及動脈硬化癥。臨床上取得了良好的療效。

通過結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動脈造成腦缺血模型，結(jié)果顯示腦缺血模型組腦含水量及腦指數(shù)較假手術(shù)組明顯增高，2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；而龍星膠囊0.20、0.40、0.80 g/kg組腦含水量明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與假手術(shù)組比較，模型組血清中MDA、LDH含量顯著升高，SOD含量顯著降低。龍星膠囊0.20、0.40、0.80 g/kg給藥組均能明顯減少血清中MDA、LDH含量，而血清中SOD含量明顯增加，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。提示龍星膠囊可保護腦缺血大鼠血管內(nèi)皮細胞功能、基膜的完整性，改善微循環(huán)，降低腦組織含水量，減輕腦水腫程度。氧自由基介導的自由基連鎖反應是急性腦梗死神經(jīng)元損傷的重要原因。組織損傷誘發(fā)自由基產(chǎn)生，自由基損傷細胞膜結(jié)構(gòu)，生成大量脂質(zhì)過氧化物，脂質(zhì)過氧化物的最終產(chǎn)物是丙二醛(MDA)，同時，機體需氧細胞也開始調(diào)動其自身抗氧化防御機制，如產(chǎn)生超氧化物歧化酶(SOD)，以防止或修復自由基損傷。實驗結(jié)果反映，龍星膠囊具有抗氧化作用。病理結(jié)果提示，龍星膠囊對腦組織有保護作用。與假手術(shù)組比較，模型組全血黏度值切變率1、5、30、200 mPa/s顯著增大，龍星膠囊0.20、0.40、0.80 g/kg給藥組均能明顯降低全血黏度值，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

小鼠斷頭后存活時間結(jié)果顯示龍星膠囊0.25、0.50、1.00 g/kg劑量組與正常組相比，均可顯著延長小鼠斷頭喘氣時間(P＜0.05)。小鼠斷頭后，腦供血中斷造成全腦缺血模型，由于腦組織內(nèi)尚存在一定的營養(yǎng)物質(zhì)，其功能仍保持一定時間，這反映在小鼠有規(guī)律的喘氣上。給藥后能延長喘氣維持時間，龍星膠囊對腦缺氧具有一定的保護作用。

［1］ 汪寧，劉青云，彭代銀，等.通竅活血湯對腦缺血大鼠的保護作用及機制研究［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2004，11(5)：407-409.

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［3］ 程體娟，魏舒暢，楊軍英，等.復方沙棘顆粒對腦缺氧及能量代謝的影響［J］.中藥藥理與臨床，2005，21(1)：39-41.

Experimental Study on LongXing Capsules Fighting Against Cerebral Ischemia

YUAN Juanli,HE Zhongmin
Pharmacy Department of Tangdu Hospital of the Fourth Military Medical University,Xi'an 710038,China

Objective:To observe the effects of LongXing capsules fighting against cerebral ischemia of rats induced by bilateral cephalic artery ligation;and its influence on survival time of the mice after the heads were cut off. Methods:Rat with cerebral ischemia was prepared by ligating cephalic artery bilaterally to observe pharmacological functions of LongXing capsules.Results:1)LongXing capsules showed great influence on cerebral water capacity and cerebral index of the rats undergoing bilateral cephalic artery ligation,cerebral water capacity decreased obviously in three doses groups of LongXing capsules(0.20g/kg,0.40g/kg and 0.80g/kg),it had significant differences compared with the model group (P＜0.05).Histopathological inspection manifested that the concentrations and anachromasis of the nerve cells in the brain tissue in LongXing capsules groups relieved slightly compared with the model group of cerebral ischemia;lighter than the model group in the swelling and interstitial loosening of neuroepithelial cells obviously.2)Three doses groups of LongXing capsules(0.20 g/kg,0.40 g/kg and 0.80 g/kg)could decrease whole blood viscosity remarkably,it had significant difference compared with the model group (P＜0.05).3)LongXing capsules could prolong the breathing time of the mice after they were cut off when three doses groups of LongXing capsules (0.25g/kg,0.50g/kg and 1.00g/kg)after medicated for 14 days were compared with the normal group (P＜0.05). Conclusion:LongXing capsules could protect cerebral ischemia injury of the rats with bilateral cephalic artery ligation.

LongXing capsules;cerebral ischemia;apoplexy;rat;mice

R285.5

A

1004-6852(2015)10-0032-05

2013-02-27

袁娟麗(1983—)，女，主管藥師。研究方向：藥事管理。