方 麗陳培英童夏生王恩智

呼吸道感染患兒血清Toll樣受體9檢測及意義

方 麗1陳培英1童夏生2王恩智3

兒童；呼吸道感染；模式識別受體；Toll樣受體9

模式識別受體能有效識別一些病原體中高度保守結(jié)構(gòu)，并能產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)，在機體清除病原體的過程中起著重要的作用。Toll樣受體（toll like receptor，TLR）是固有免疫細胞膜上最重要的模式識別受體，是在識別病原體過程中進化而來的保守受體復(fù)合物，每一種亞型因不同系列的病原體相關(guān)分子結(jié)構(gòu)而被識別，表達于多種免疫細胞，受病原體入侵影響后，TLR誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，涉及到Thl/ Th2失衡，并傾向于Thl反應(yīng)[1]。目前研究發(fā)現(xiàn)，TLR參與了呼吸道感染的炎癥機制，我們先前的研究也發(fā)現(xiàn)TLR2與呼吸道感染相關(guān)[2]。本研究通過觀察呼吸道感染患兒血清TLR9的表達水平變化，旨在探討TLR9在呼吸道感染發(fā)病機制中的作用，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2013年11月—2014年9月本院住院患兒90例，急性上呼吸道感染組30例，男15例，女15例，年齡0.5～6.3歲，平均2.8歲；毛細支氣管炎組30例，男16例，女14例，年齡0.6～4.1歲，平均2.0歲；肺炎組30例，年齡男18例，女12例，年齡0.5～4.2歲，平均2.5歲；健康對照組30名來自門診健康體檢者，男18名，女12名，年齡0.6～5.2歲，平均2.5歲。各組性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。急性上呼吸道感染組入選標(biāo)準(zhǔn)[3]：病程＜2天，體溫≥38.5℃，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、流涕。毛細支氣管炎組入選標(biāo)準(zhǔn)[3]：病程＜3天，臨床表現(xiàn)為咳嗽、喘息、氣促、發(fā)熱，肺部可聞及喘鳴音，X線胸片呈支氣管周圍炎征象。肺炎組入選標(biāo)準(zhǔn)[3]：病程＜3天，臨床表現(xiàn)為咳嗽、氣促、發(fā)熱，肺部可聞及痰嗚音和細小濕性啰音，X線胸片呈片狀陰影。三組患兒均無其他伴發(fā)疾病。

1.2 試劑和方法 采集患兒入院當(dāng)時和恢復(fù)期靜脈血，各2mL，離心（3000轉(zhuǎn)/10min）后取血清置于-80℃冰箱中，集中檢測。TLR9試劑盒購自上海研吉生物科技有限公司（批號201311），酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測血清TLR9蛋白濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s） 表示，各組間均數(shù)比較采用方差分析，方差齊性者采用LSD法，方差不齊者采用Tamhane’s T2檢驗，組內(nèi)治療前、后比較采用配對資料的t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

治療前血清TLR9蛋白濃度肺炎組＞急性上呼吸道感染組、毛細支氣管炎組＞健康對照組（P均＜0.01）；急性上呼吸道感染組、毛細支氣管炎組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后急性上呼吸道感染組、毛細支氣管炎組、肺炎組血清TLR9蛋白濃度均顯著低于治療前（P均＜0.01），且均顯著高于健康對照組（P均＜0.01），見表1。

表1 血清TLR9蛋白濃度（ng/mL，±s）

表1 血清TLR9蛋白濃度（ng/mL，±s）

注：與健康對照組比較，▲P＜0.01；與急性上呼吸道感染組、毛細支氣管炎組比較，*P＜0.01；與治療前比較，△P＜0.01

組別健康對照組急性上呼吸道感染組毛細支氣管炎組肺炎組例數(shù)30 30 30 30治療前5.8±2.1 10.9±3.1▲13.5±4.1▲20.9±6.7▲*治療后 7.8±2.5△▲11.6±2.9△▲16.8±4.3△▲

3 討論

天然免疫系統(tǒng)通過模式識別受體識別入侵機體的病原體，在這些模式識別受體中，已顯示出TLR3、7/8、9和RIG樣受體具有識別病毒的功能[4]。TLR9是一種表達于細胞膜的膜結(jié)合受體，屬于Ⅰ型跨膜蛋白，廣泛表達于多種細胞，具有重要的生理和病理作用，參與感染、免疫等的發(fā)病機制。最近研究證實，TLR9與多種呼吸系統(tǒng)疾病有關(guān)，在抗病毒及細菌的感染中起了重要作用。

急性上呼吸道感染和毛細支氣管炎常由流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒等引起，是嬰幼兒時期常見疾病。有學(xué)者[5]研究發(fā)現(xiàn)，滅活的呼吸道合胞病毒疫苗，在添加了TLR9和NOD2的特異性配體后,能增強機體黏膜對呼吸道合胞病毒的免疫力。本研究發(fā)現(xiàn)，治療前急性上呼吸道感染組、毛細支氣管炎組血TLR9蛋白濃度高于健康對照組（P＜0.01），提示TLR9可能參與了呼吸道病毒感染過程；而急性上呼吸道感染組與毛細支氣管炎組之間沒有差別，表明TLR9對病毒的反應(yīng)可能沒有選擇特異性；同時還發(fā)現(xiàn)，恢復(fù)期急性上呼吸道感染組、毛細支氣管炎組血清TLR9蛋白濃度降低，且高于對照組（P＜0.01），提示隨著機體炎癥減輕TLR9的水平也隨之下降，表明它能反應(yīng)疾病的炎癥狀態(tài)。

除了上述病毒感染性疾病，TLR9還參與肺炎的免疫反應(yīng)。在急性細菌性肺炎患者的血類漿細胞樹突狀細胞上TLR9的表達增加，上調(diào)了分子對病原體相關(guān)分子模式和受調(diào)理素作用抗原的識別能力[6]。在G-細菌性肺炎中，TLR9還可與TLR4一起共同起到促進白細胞介素23和17表達的作用[7]。在A型流感病毒感染的肺炎中，TLR9也可與TLR2/6聯(lián)合起到清除病毒的作用[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，肺炎組血清TLR9蛋白的濃度高于急性上呼吸道感染組及毛細支氣管炎組（P＜0.01），提示肺炎患者TLR9的免疫反應(yīng)強烈，其濃度處于較高水平；恢復(fù)期肺炎組血清TLR9蛋白濃度明顯下降但仍高于對照組，提示TLR9對炎癥反應(yīng)將持續(xù)一段時間才能恢復(fù)正常水平。

綜上所述，呼吸道感染后TLR9蛋白濃度升高，表明TLR9參與了呼吸道感染的天然免疫應(yīng)答機制，可以作為評價病情的免疫指標(biāo)。

［1］Klaassen EM，Thonissen BE，van Eys G，et al.A systematic review of CD14 and toll-like receptors in relation to asthma in Caucasian children［J］.Allergy Asthma Clin Immunol，2013，9（1）：10.

［2］羅麗丹，王鑫華，童夏生，等.呼吸道感染患兒血清Toll樣受體、Dectin及CD14測定臨床意義［J］.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，24（7）：620-622.

［3］胡亞美，江載芳.實用兒科學(xué)［M］.第7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1167-1215.

［4］Sathe A，Reddy KV.TLR9 and RIG-I signaling in human endocervical epithelial cells modulates inflammatory responses of macrophages and dendritic cells in vitro［J］.PLoS One，2014，9（1）：e83882.

［5］Shafique M，Wilschut J，de Haan A.Induction of mucosal and systemic immunity against respiratory syncytial virus by inactivated virus supplemented with TLR9 and NOD2 ligands［J］.Vaccine，2012，30（3）：597-606.

［6］Dreschler K，Bratke K，Petermann S，et al.Altered phenotype of blood dendritic cells in patients with acute pneumonia［J］.Respiration，2012，83（3）：209-217.

［7］Bhan U，Ballinger MN，Zeng X，et al.Cooperative interactions between TLR4 and TLR9 regulate interleukin 23 and 17 production in a murine model of gram negative bacterial pneumonia［J］.PLoS One，2010，5（3）：e9896.

［8］Tuvim MJ，Gilbert BE，Dickey BF，et al.Synergistic TLR2/6 and TLR9 activation protects mice against lethal influenza pneumonia［J］.PLoS One，2012，7（1）：e30596.

（收稿：2014-12-26 修回：2015-05-06）

1浙江省諸暨市人民醫(yī)院兒科（諸暨 311800）；2浙江省臺州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院兒科（溫嶺 317523）；3浙江省臺州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗科（溫嶺 317523）

方麗，Tel：15356308779