劉彬果，張新萍（解放軍254醫(yī)院，天津300142）

高效液相色譜法測(cè)定氣管炎顆粒中黃芩苷的含量

劉彬果，張新萍（解放軍254醫(yī)院，天津300142）

目的建立高效液相色譜法測(cè)定氣管炎顆粒中黃芩苷的含量。方法采用HPLC法，色譜柱：ZORBAX SB-C18柱（4．6 mm×150 mm，5μm），以甲醇-0．1%磷酸（47∶53）為流動(dòng)相，流速為1 m l／m in，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。結(jié)果黃芩苷在6．63～210μg／m l范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r＝0.999 8，n＝6），平均加樣回收率為98.16%，RSD為1．89%。結(jié)論本法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，結(jié)果可靠，可有效地控制氣管炎顆粒的質(zhì)量。

氣管炎顆粒；黃芩苷；高效液相色譜法

氣管炎顆粒為解放軍254醫(yī)院多年的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由生梔子、黃芩、瓜蔞等9味中藥組成，具有清熱解毒、止咳化痰的功效，臨床適用于急、慢性氣管炎，咳嗽多痰等癥狀。其現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有中藥定性鑒別的方法，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目。黃芩為方中君藥，其活性成分為黃芩苷，是抗菌消炎的主要藥效物質(zhì)。為了更好地控制氣管炎顆粒的質(zhì)量，確保該制劑的療效，我們以黃芩苷作為定量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，無(wú)干擾，可用于評(píng)價(jià)氣管炎顆粒的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 1260），Open-LAB CDS色譜工作站（美國(guó)Agilent公司），ZORBAX SB-C18（4．6 mm×150 mm，5μm）色譜柱（美國(guó)Agilent公司）；黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），氣管炎顆粒（本院制劑室）；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1色譜條件 流動(dòng)相：甲醇-0．1%磷酸溶液（47∶53）；流速：1．0 m l／min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣量：10μl。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于3 000。

2．2溶液制備

2．2．1 對(duì)照品溶液 精密稱取105℃干燥的黃芩苷對(duì)照品10．5 mg，置50 m l量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液（0．21 mg／m l）。

2．2．2 供試品溶液 取裝量差異下的氣管炎顆粒（10 g／袋），研細(xì)，精密稱定約0．5 g，置50 m l量瓶中，加入50%甲醇適量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）20 m in使溶解，放冷，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得［1，2］。

2．2．3 陰性對(duì)照液 按照處方組成比例，制備不含黃芩藥材的陰性樣品。按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照液，并按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果在與黃芩苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處無(wú)色譜峰，說(shuō)明本品中的其他成分對(duì)黃芩苷的測(cè)定無(wú)干擾。

分別精密吸取上述對(duì)照品、供試品和缺黃芩藥材的陰性對(duì)照溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。

2．3線性關(guān)系的考察 精密稱取黃芩苷對(duì)照品制成濃度為6．63、13．1、26．2、52．5、105、210μg／m l的溶液。按2．1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以黃芩苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程：A＝16．70 C－9．951（r＝0．999 8），結(jié)果表明，黃芩苷在6．63～210μg／m l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 HPLC色譜圖

2．4重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品6份（批號(hào)：14090137），按供試品溶液制備方法制得，依法測(cè)定，結(jié)果RSD為0．88%（n＝6）。

2．5加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批號(hào)的樣品5份，研細(xì)，并精密加入定量的黃芩苷對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備，并按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

2．6穩(wěn)定性試驗(yàn) 供試品溶液在室溫下放置不同時(shí)間（0、1、4、8、10、12、24 h），測(cè)定，其峰面積RSD為1．76%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2．7樣品測(cè)定 取樣品3批，按上述方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測(cè)定，分別精密吸取對(duì)照品溶液（52．5μg／m l）和樣品溶液，外標(biāo)法定量。結(jié)果見表2。

表2 氣管炎顆粒中黃芩苷含量的測(cè)定結(jié)果（n＝2）

3 討論

關(guān)于中藥制劑中黃芩苷的含量測(cè)定方法已有相關(guān)報(bào)道［2，3］，氣管炎顆粒的處方藥材品種較多，化學(xué)成分復(fù)雜，色譜分離條件需要摸索。本研究對(duì)氣管炎顆粒中黃芩苷的含量測(cè)定色譜條件進(jìn)行了考察，經(jīng)過對(duì)黃芩苷對(duì)照品溶液的紫外吸收光譜測(cè)定，樣品和對(duì)照品溶液均在280 nm處有最大吸收，故選擇280 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。同時(shí)考察了不同流動(dòng)相時(shí)的色譜行為，采用乙腈-水-磷酸體系，發(fā)現(xiàn)峰形對(duì)稱性不好，采用藥典方法，甲醇-水-磷酸體系為流動(dòng)相時(shí)，可有效改善峰形，達(dá)到很好分離效果。經(jīng)考察我們確定色譜條件為甲醇-0．1%磷酸（47∶53）為流動(dòng)相，流速為1 m l／m in，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。方法學(xué)考察的結(jié)果表明，本方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，空白無(wú)干擾，可作為氣管炎顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定的方法。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部［S］．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：282-283．

［2］ 于天杰，張玲昂．HPLC法測(cè)定退燒顆粒中黃芩苷的含量［J］．中國(guó)藥師，2010，13（1）：143-144．

［3］ 沈雪梅，何 偉，李 勇．RP-HPLC法測(cè)定清熱和胃顆粒中黃芩苷的含量［J］．廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，22（3）：268-169．

Determ ination of the content of baicalin in Qiguanyan granules by HPLC

LIU Binguo，ZHANG Xinping（No．254 Hospital of PLA，Tianjin 300142，China）

ObjectiveTo establish amethod of HPLC for the determination of baicalin in Qiguanyan granules．MethodsHPLC was performed on ZORBAX SB-C18（4．6 mm×150 mm，5μm）column w ith mobile phase consisted ofmethanol-0.1% phosphoric acid（47∶53）at ambient temperature．The flow rate was 1．0 m l／min．The detection wavelength was 280 nm．ResultsBaicalin showed a good linearity in the range of 6．63-210μg／m l（r＝0.999 8，n＝6），and the average recovery was 98.16%（RSD＝1.89%）．ConclusionThismethods was simple，accurate，sensitive，reproducible and reliable，which was suitable for the content control of Qiguanyan granules．

Qiguanyan granules；baicalin；HPLC

R927

A

1006-0111（2015）05-0451-02

10．3969／j．issn．1006-0111．2015．05．019

2014-07-04

2014-11-27

［本文編輯］ 顧文華

劉彬果，博士，主管藥師．研究方向：藥物分析學(xué)．Tel：13682066620；E-mail：lbg991227＠163．com