馮 偉,張烜明,麻武仁,高媛媛,陳 穎,任美美,宋曉平*
(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院中獸醫(yī)藥研究所,陜西楊凌 712100;2.天津嘉立荷牧業(yè)有限公司,天津?qū)幒?301508)
奶牛子宮內(nèi)膜炎是奶牛產(chǎn)后多發(fā)的生殖系統(tǒng)疾病,是導(dǎo)致奶牛不孕癥的最常見(jiàn)原因,危害也最為嚴(yán)重[1-2]。研究表明,我國(guó)奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率在16.7%~68.3%之間,而60%~90%的不孕癥由子宮內(nèi)膜炎引起[3-4]。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外科研人員一直致力于奶牛子宮內(nèi)膜炎的預(yù)防控制和無(wú)抗治療研究,中藥制劑在子宮內(nèi)膜炎防治方面以其安全性高 、低殘、低毒和不易產(chǎn)生耐藥性等突出優(yōu)點(diǎn)倍受?chē)?guó)內(nèi)外專(zhuān)家關(guān)注[5]。本試驗(yàn)在前期中藥復(fù)方篩選及藥效研究基礎(chǔ)上,對(duì)優(yōu)化的中藥復(fù)方灌注液進(jìn)行奶牛子宮內(nèi)膜炎自然病例進(jìn)行試驗(yàn)性臨床觀(guān)察,旨在為治療奶牛子宮內(nèi)膜炎新中獸藥的進(jìn)一步研發(fā)和應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
1.1.1 試驗(yàn)用藥物 連翹、黃連、丹參、紅花等藥材為西安萬(wàn)壽路藥材批發(fā)市場(chǎng)產(chǎn)品。雙黃連注射液,主要成分為黃芩、金銀花、連翹、梔子等,批號(hào)220486120,規(guī)格10mL/支,由某藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。
1.1.2 試驗(yàn)用動(dòng)物 2014年3月~4月從寶雞某良種奶牛場(chǎng)挑選年齡3歲~5歲,胎次1胎~2胎的產(chǎn)后荷斯坦奶牛48頭,其中確診為急性奶牛子宮內(nèi)膜炎病牛40頭和臨床健康奶牛8頭。
1.1.3 主要儀器設(shè)備 CA-500血細(xì)胞分析儀為上海泰益醫(yī)療設(shè)備有限公司產(chǎn)品;SHB-B95A型循環(huán)水式多用真空泵為鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司產(chǎn)品;SXKW數(shù)顯電熱套為北京中興偉業(yè)儀器有限公司產(chǎn)品;GG-9030A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱為上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司產(chǎn)品;HH-2型電熱恒溫水浴鍋為北京科偉永興儀器有限公司產(chǎn)品;XSP-8C生物顯微鏡為青島富堡精密儀器有限公司產(chǎn)品;TDL-40B低速臺(tái)式大容量離心機(jī)為上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)產(chǎn)品。
1.2.1 中藥復(fù)方灌注液的制備 稱(chēng)取連翹、黃連、丹參、紅花等原料藥各100g,加6 000mL蒸餾水煎煮1h,過(guò)濾,重復(fù)3次,合并煎煮液濃縮至小體積,冰箱靜置沉淀12h,離心,過(guò)濾,收集藥液,減壓濃縮至每毫升含原生藥材1g,灌裝每瓶100mL,流通蒸汽滅菌30min即可。
1.2.2 中藥復(fù)方灌注液的治療試驗(yàn)
1.2.2.1 急性子宮內(nèi)膜炎診斷標(biāo)準(zhǔn) ①臨床診斷標(biāo)準(zhǔn):產(chǎn)后奶牛,連續(xù)3d體溫高于39.5℃,精神沉郁。陰道檢查,可見(jiàn)陰道充血腫脹。直腸觸診子宮角增粗,子宮頸口附著濃稠膿性分泌物,子宮收縮反應(yīng)消失,疼痛感明[6];②實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn):采集子宮頸口黏液進(jìn)行涂片、固定、染色,在油鏡下對(duì)100個(gè)視野進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)。白細(xì)胞平均數(shù)少于10個(gè)判為(-),白細(xì)胞平均數(shù)11個(gè)~30個(gè)判為(+),白細(xì)胞平均數(shù)31個(gè)~80個(gè)判為(++),白細(xì)胞平均數(shù)81個(gè)~150個(gè)判為(+++),白細(xì)胞平均數(shù)150個(gè)以上判為(++++)[7]。用血細(xì)胞分析儀測(cè)定試驗(yàn)牛血液中的白細(xì)胞數(shù)量,健康奶牛正常血液白細(xì)胞數(shù)為6×109個(gè)/L~12×109個(gè)/L,奶牛在發(fā)生感染時(shí),白細(xì)胞數(shù)明顯增加可達(dá)15×109個(gè)/L~25×109個(gè)/L,極度增加可超過(guò)25×109個(gè)/L[8]。
1.2.2.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組及處理 將確診患有急性子宮內(nèi)膜炎的病牛40頭,隨機(jī)分為5組(A組~E組),每組8頭,其中E組為疾病對(duì)照組,不給藥;A、B、C組分別為中藥復(fù)方灌注液高、中、低劑量組,分別子宮內(nèi)灌注中藥復(fù)方灌注液150、100、50mL/次,隔天1次,連用3次;D組為陽(yáng)性藥物對(duì)照組,子宮內(nèi)灌注雙黃連注射液100mL/次,隔天1次,連用3次,另選健康奶牛8頭作為健康對(duì)照組(F組)。試驗(yàn)期共計(jì)8d,在試驗(yàn)前1d和試驗(yàn)第7天時(shí),對(duì)試驗(yàn)牛進(jìn)行一般臨床檢查、痊愈率和有效率分析、子宮頸口黏液白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血液白細(xì)胞計(jì)數(shù)。
1.2.2.3 療效判定標(biāo)準(zhǔn) ①痊愈:用藥1個(gè)療程,病牛陰道色澤粉紅鮮亮,直腸檢查子宮角粗細(xì)恢復(fù)正常,子宮分泌物清亮透明,子宮收縮反應(yīng)明顯,無(wú)疼痛感,子宮頸口黏液白細(xì)胞檢查為(-),血液白細(xì)胞檢查回歸正常范圍,視為臨床痊愈;②顯效:用藥1個(gè)療程,病牛陰道色澤粉紅鮮亮、直腸檢查子宮角粗細(xì)恢復(fù)正常、子宮分泌物清亮透明和子宮收縮反應(yīng)明顯無(wú)疼痛感等指標(biāo)僅1項(xiàng)不合格,子宮頸口黏液白細(xì)胞檢查為(+)及以下,血液白細(xì)胞檢查回歸正常范圍,視為臨床顯效,顯效數(shù)為痊愈數(shù)+顯效數(shù);③有效:用藥1個(gè)療程,病牛陰道色澤粉紅鮮亮、直腸檢查子宮角粗細(xì)恢復(fù)正常、子宮分泌物清亮透明和子宮收縮反應(yīng)明顯無(wú)疼痛感等指標(biāo)有2項(xiàng)不合格,子宮頸口黏液白細(xì)胞檢查為(++)及以下,血液白細(xì)胞檢查回歸正常范圍,視為臨床有效,有效數(shù)為痊愈數(shù)+顯效數(shù)+有效數(shù);④無(wú)效:用藥1個(gè)療程,臨床癥狀和陰道直腸檢查陰道子宮均無(wú)明顯好轉(zhuǎn),甚至惡化,子宮頸口黏液白細(xì)胞檢查為(+++)或(++++),血液白細(xì)胞檢查超出正常范圍,視為無(wú)效[9]。
1.2.3 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用(ˉx±SD表示,應(yīng)用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行鄧肯氏新復(fù)極差檢驗(yàn)法和卡方檢驗(yàn),分析組間差異顯著性。
用藥治療后第7天,中藥復(fù)方灌注液高、中劑量組大部分奶牛陰道黏膜粉紅鮮亮,子宮角粗細(xì)恢復(fù)正常,子宮收縮反應(yīng)明顯無(wú)疼痛感,分泌物較清亮透明,與健康組檢查結(jié)果一致。中藥復(fù)方灌注液低劑量組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組,部分牛陰道腫脹消退,子宮角粗細(xì)有所恢復(fù),子宮收縮反應(yīng)明顯,疼痛感消失。
結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 中藥復(fù)方灌注液的痊愈率和有效率Table 1 The cure and efficiency rate of Chinese herbal compound perfusate
結(jié)果見(jiàn)表2。在治療第7天時(shí),中藥復(fù)方灌注液高、中劑量組(A,B組)與健康對(duì)照組(F組)差異不顯著(P>0.05),且效果極顯著優(yōu)于低劑量組(C組)和陽(yáng)性對(duì)照組(D)組(P<0.01)(表2)。說(shuō)明中藥復(fù)方灌注液高、中劑量組可顯著降低子宮頸口黏液白細(xì)胞數(shù),且效果優(yōu)于陽(yáng)性藥物對(duì)照組。
表2 治療前后子宮頸口黏液白細(xì)胞數(shù)量和等級(jí)Table 2 The number of leukocytes and grade level in the cervix mucus before and after the treatment
結(jié)果見(jiàn)表3。在治療第7天時(shí),中藥復(fù)方灌注液各劑量組(A,B,C組)和陽(yáng)性對(duì)照組(D組)血液白細(xì)胞數(shù)極顯著低于疾病對(duì)照組(E組)(P<0.01)且與健康對(duì)照組(F組)差異均不顯著(P>0.05)。說(shuō)明中藥復(fù)方灌注液在低劑量時(shí)即可極顯著降低血液白細(xì)胞數(shù)量。
表3 治療前后血液中的白細(xì)胞數(shù)量Table 3 The number of leukocytes in the blood before and after treatment 109個(gè)/L
奶牛急性子宮內(nèi)膜炎臨床檢查主要包括精神狀態(tài),陰道色澤、分泌物,子宮體狀態(tài)、子宮黏液白細(xì)胞數(shù)等,其中陰道色澤、分泌物及子宮狀態(tài)為主要指標(biāo)。本試驗(yàn)應(yīng)用中藥復(fù)方灌注液治療第7天時(shí),高、中劑量組大部分牛陰道和子宮臨床癥狀改善明顯,子宮分泌物清亮透明、子宮頸口黏液及血液白細(xì)胞數(shù)明顯減少,說(shuō)明中藥復(fù)方灌注液具有顯著抗炎作用,能顯著改善急性子宮內(nèi)膜炎主要臨床癥狀。該中藥復(fù)方灌注液主要由連翹、黃連、丹參、紅花等中藥組成。方中連翹具有清熱解毒、散結(jié)消腫之功效[10]。連翹及其主要成分對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、無(wú)乳鏈球菌均有較好抑菌作用[11-12];黃連清熱解毒,其抗菌譜較廣,對(duì)革蘭陰性菌和陽(yáng)性菌及病毒和真菌均有抑制作用[13];丹參對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、變形桿菌、乙型鏈球菌有較好抑菌作用[14],而大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型鏈球菌又是奶牛子宮內(nèi)膜炎的常見(jiàn)菌;紅花屬于活血化淤藥,具有顯著擴(kuò)張血管、增加血流量、改善血液循環(huán)等作用[15]。前期試驗(yàn)結(jié)果表明,該中藥復(fù)方灌注液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、鏈球菌等奶牛子宮內(nèi)膜炎常見(jiàn)致病菌具有顯著的體外抑菌作用,對(duì)小鼠試驗(yàn)性炎癥模型具有顯著的抗炎作用[16]。本試驗(yàn)結(jié)果表明,該中藥復(fù)方灌注液按劑量100mL/次子宮灌注,隔天1次,連用3次,對(duì)臨床奶牛急性子宮內(nèi)膜炎具有較好治療效果,這為防治奶牛子宮內(nèi)膜炎新中獸藥研發(fā)提供了重要參考資料。
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