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        分光光度法測定葛根葉中總黃酮的含量

        2015-05-30 10:48:04王翰華陸元勛胡夢月周松青金雯
        科技創(chuàng)新與應(yīng)用 2015年12期
        關(guān)鍵詞:分光光度法總黃酮含量測定

        王翰華 陸元勛 胡夢月 周松青 金雯

        摘 要:目的:建立葛根葉中總黃酮含量的測定方法。方法:以蘆丁為對照品,選擇510nm為測定波長,采用分光光度法測定葛根葉中總黃酮的含量。結(jié)果:蘆丁在0.01208mg/mL-0.07248mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9996),平均回收率為98.72%,RSD為2.6%。結(jié)論:分光光度法精密度高,重復(fù)性好,可用于葛根葉中總黃酮含量的測定。

        關(guān)鍵詞:葛根葉;總黃酮;含量測定;分光光度法

        中藥葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd) Ohwi或甘葛藤Pueraria thomsonii Benth的干燥根。在我國具有悠久的歷史,在《本經(jīng)》、《別錄》等均有記載。味甘、辛、涼,歸脾、胃經(jīng),具有解肌退熱、生津、透疹、升陽止瀉之功效。由于葛根具有抗炎解熱、擴(kuò)張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量及降低血壓等作用[1,2],含有多糖及多種微量元素[3],現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于保健食品中,是我國衛(wèi)生部批準(zhǔn)的第一批藥食同源的植物[4,5]。臨床上主要用于冠心病、高血壓、心絞痛、高黏血癥、腦梗死、椎-基底動脈供血不足等多種疾病的治療。[6]目前,未見有葛根葉的相關(guān)研究報道。為了擴(kuò)大葛根的藥用部位,文章采用分光光度法測定葛根葉中總黃酮含量,為葛根葉的后續(xù)研究和開發(fā)打下基礎(chǔ)。

        1 實驗材料

        1.1 儀器

        TU-1818型紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);BS124S型電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司];KQ-100B型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

        1.2 藥材與試劑

        葛根葉藥材購于安徽省亳州市藥材市場。蘆丁對照品(中國生物制品檢定所,批號:100080-200707)。所用試劑均為分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 對照品溶液的制備

        精密稱取蘆丁對照品15.1mg,置于50mL容量瓶中,加入60%乙醇適量,溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。

        2.2 供試品溶液的制備。取葛根葉粉末5g,精密稱定,置錐形瓶中,加入60%乙醇50mL,稱重,超聲30min,60%乙醇補足失重,濾紙過濾,取續(xù)濾液,即得。

        2.3 測定波長的選擇

        精密吸取對照品溶液和供試品溶液各1.0mL,置25mL容量瓶中,先加入5%的亞硝酸鈉溶液1.0mL,搖勻,放置5min,再加入10%的硝酸鋁溶液1.0mL,搖勻,放置5min,再加入4%的氫氧化鈉溶液10.0mL,加60%的乙醇至刻度,混勻,靜置l5min。以上述不加蘆丁對照品液的混合液為空白參照,在200nm-800nm波長范圍內(nèi)掃描,確定最大吸收波長為510nm。

        2.4 方法學(xué)考察

        2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密吸取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL,分別置于25mL容量瓶中,照“2.3”項下方法,自“加入5%亞硝酸鈉溶液”起依法測定各個標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度,以吸光度A為縱坐標(biāo),濃度C為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程A=0.1529C-0.0023,r=0.9996,表明蘆丁在0.01208mg/mL-0.07248mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

        2.4.2 精密度試驗。精密吸取對照品溶液3.0mL,共6份,分別置于25mL容量瓶中,照“2.3”項下方法操作,測定吸光度,結(jié)果吸光度的RSD為0.98%,表明本方法精密度良好。

        2.4.3 重復(fù)性試驗。取葛根葉粉末6份,按“2.2”項的方法制備供試品溶液,精密量取供試品溶液1mL,置25mL容量瓶中,按“2.3”項下的方法操作,測定吸光度,計算葛根葉中總黃酮含量的RSD值為1.3%,表明本方法重復(fù)性良好。

        2.4.4 穩(wěn)定性試驗。精密吸取葛根葉供試品溶液1.0mL,按“2.3”項下方法操作,在0min、5min、10min、15min、20min、30min時依法測定吸光度,RSD值為1.6%,表明本法在30min內(nèi)測定是穩(wěn)定的。

        2.4.5 加樣回收率。精密稱取已知總黃酮含量的葛根葉,分別精密加入高、中、低濃度蘆丁對照品適量,照“2.3”項下方法操作,每個濃度平行三份,測定吸光度,以計算的檢測量減去本底,比上加入量算得回收率,結(jié)果見表1。

        2.5 樣品的測定

        取葛根葉6份,按照“2.2”項下的方法制備供試品溶液,依法測定吸光度,計算得總黃酮含量9.08mg/g,RSD=1.9%。

        3 討論

        目前關(guān)于總黃酮含量的測定方法有比色法、紫外分光光度法、薄層色譜法等,其中以比色法最常用,且多以蘆丁為對照品。該法操作簡便,穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好,因此本實驗選擇以蘆丁為對照品的比色法為測定方法。

        在供試品的提取過程中,比較了回流提取和超聲提取兩種方法,結(jié)果表明回流提取效率高。同時考察了不同比例的乙醇溶劑,發(fā)現(xiàn)60%乙醇提取效率高。

        葛根因含葛根素,大豆苷及大豆苷元,金雀異黃素和芒柄花黃素等異黃酮類成分,近年來葛根在防治骨質(zhì)疏松癥方面的作用得到廣泛關(guān)注。[7,8]綜合國內(nèi)外數(shù)據(jù)庫檢索的結(jié)果,未見有葛根葉的相關(guān)報道?;谕曛参锖邢嗤瘜W(xué)成分的原理,對葛根葉的研究開發(fā),有利于擴(kuò)大葛根的藥用部分,有利于葛根的深入開發(fā)和研究,有利于推進(jìn)抗骨質(zhì)疏松藥物的研究。

        參考文獻(xiàn)

        [1]姚丹,丁選勝.葛根素藥理作用機(jī)制探討及臨床應(yīng)用[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2008,13(4):468-472.

        [2]白東義,佟春玲,韓慧,等.葛根素的藥理作用及其臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].江蘇中醫(yī)藥,2009,41(3):76-78.

        [3]易紅,楊華.葛根的品種產(chǎn)地和提取工藝研究進(jìn)展概況[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2006(11):601.

        [4]李悅,李艷菊.國內(nèi)外葛根功能食品研究進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā),2007,28(12):174-177.

        [5]李玉山.葛根的綜合開發(fā)和利用[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2009,29(6):109-114.

        [6]楊杰忠.葛根素的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥指南,2012,10(21):465-466.

        [7]姚紅,黃少華,蘇子仁.葛根總黃酮對去卵巢大鼠骨密度及骨鈣影響的實驗研究[J].新中醫(yī),2005,37(2):92-93.

        [8]Wong R,Rabie B.Efect of puerarin on bone formation[J].Osteoarthritis Cartilage,2007,15(8):894-899.

        作者簡介:王翰華(1982-),男,浙江寧波人,碩士,浙江醫(yī)藥高等專科學(xué)校講師,從事中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和中藥相關(guān)課程教學(xué)。

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