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        針對(duì)測(cè)定長白楤木種子中總酚含量的優(yōu)選方法研究

        2015-05-30 18:58:46何芳張寧
        科技創(chuàng)新與應(yīng)用 2015年25期
        關(guān)鍵詞:種子休眠長白

        何芳 張寧

        摘 要:長白 木(Aralia continentalis Kitagwa)種子具有休眠的特性[1],在自然條件下萌發(fā)困難,本論文主要研究篩選測(cè)定長白 木種子中總酚含量的適宜方法。試驗(yàn)結(jié)果表明,用50%丙酮溶液做提取劑,單寧酸做標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定長白 木種子中總酚含量效果較好。

        關(guān)鍵詞:長白 木;種子休眠;總酚含量

        種子休眠是具有正?;盍Φ姆N子在適宜的環(huán)境條件(光照、溫度、水分和氧氣等)下仍不能萌發(fā)的現(xiàn)象。對(duì)植物本身來說是一種有益的生物學(xué)適應(yīng)性,具有重要的生態(tài)學(xué)意義,但是卻給我們的苗木生產(chǎn)帶來一定的困難。本論文主要研究篩選出對(duì)長白 木種子中酚類物質(zhì)含量測(cè)定的適宜方法,為尋找長白 木種子休眠解除過程中,酚類物質(zhì)含量的變化規(guī)律,生產(chǎn)上使用破眠技術(shù)提供理論上支持[2]。因此,本研究具有重大的理論和實(shí)踐意義。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        試驗(yàn)采用2008年8月采收的長白 木成熟飽滿的種子。

        1.2 方法

        本次試驗(yàn)采用Folin-Ciocalteu方法測(cè)定長白 木種子中總酚含量,主要原理是依據(jù)多酚類化合物及含有極易氧化羥基的還原性物質(zhì)在堿性環(huán)境條件下與福林試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色的化合物,并在可見光范圍內(nèi)具有穩(wěn)定的強(qiáng)烈吸收,一定條件下服從朗伯-比爾定律,利用此現(xiàn)象選擇合適的基準(zhǔn)物質(zhì)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從而測(cè)定多酚類化合物的總含量。

        1.2.1 有機(jī)溶劑的篩選及標(biāo)準(zhǔn)品的篩選

        樣品的粉碎:用高速粉碎機(jī)將長白 木種子粉碎樣品溶液的制備:分別用乙醇和丙酮提取,處理濃度分別為30%、50%、70%。

        (1)乙醇溶劑的提取:精確稱取3份磨碎的長白 木種子1.0g,放在3個(gè)50ml錐形瓶中,分別加入不同濃度的乙醇10ml,聲波提取30min,收集上清液,濾渣再提取兩次,合并提取液,然后將上清液在4℃離心10min,用移液槍精確量取上清液5ml于25ml的容量瓶中,用蒸餾水定容。

        (2)丙酮溶劑的提?。壕_稱取3份磨碎的長白 木種子1.0 g,放在3個(gè)50ml錐形瓶中,分別加入不同濃度的丙酮10ml,聲波提取30min,收集上清液,濾渣再提取兩次,合并提取液,然后將上清液在4℃離心10min,用移液槍精確量取上清液5ml于25ml的容量瓶中,用蒸餾水定容。

        標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:

        (1)單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:分別準(zhǔn)確量取單寧酸標(biāo)準(zhǔn)液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml于試管中,各加6ml水,搖勻,再加0.5ml福林試劑,充分搖勻。1min之后,加入20%碳酸鈉溶液1.5ml,混勻定容。在75℃反應(yīng)10min,于298nm波長下比色,測(cè)定吸光度,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

        (2)沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:分別準(zhǔn)確量沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:分別準(zhǔn)確量取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml于試管中,各加6ml水,搖勻,再加0.5ml福林試劑,充分搖勻。1min之后,加入20%碳酸鈉溶液1.5ml,混勻定容。在75℃反應(yīng)10min,于265nm波長下比色,測(cè)定吸光度,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

        (3)香草醛標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:分別準(zhǔn)確量取香草醛標(biāo)準(zhǔn)液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于試管中,各加6ml水,搖勻,再加0.5ml福林試劑,充分搖勻。1min之后,加入20%碳酸鈉溶液1.5ml,混勻定容。在75℃反應(yīng)10min,于299nm波長下比色,測(cè)定吸光度,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

        樣品的測(cè)定:

        用移液槍精確量取1ml樣品溶液于試管中,加入6ml蒸餾水,0.5ml福林試劑和1.5ml20%碳酸鈉溶液,用蒸餾水定容至刻度,混勻,75℃水浴10min,冷卻,在標(biāo)準(zhǔn)液的最大吸收值處測(cè)定吸光度。實(shí)驗(yàn)做三次重復(fù)。

        1.2.2 長白 木種子內(nèi)總酚含量的測(cè)定

        樣品溶液的制備:

        精確稱取磨碎的長白 木種子1.0g,放在50ml錐形瓶中,加入50%的丙酮10ml,聲波提取30min,收集上清液,濾渣再提取兩次,合并提取液,然后將上清液在4℃離心10min,用移液槍精確量取上清液5ml于25ml的容量瓶中,用蒸餾水定容。

        標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:

        單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:

        分別準(zhǔn)確量取單寧酸標(biāo)準(zhǔn)液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml于試管中,各加6ml水,搖勻,再加0.5ml福林試劑,充分搖勻。1min之后,加入20%碳酸鈉溶液1.5ml,混勻定容。在75℃反應(yīng)10min,于298nm波長下比色,測(cè)定吸光度,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

        樣品的測(cè)定:

        用移液槍精確量取1ml樣品溶液于試管中,加入6ml蒸餾水,0.5ml福林試劑和1.5ml20%碳酸鈉溶液,用蒸餾水定容至刻度,混勻,75℃水浴10min,冷卻,在標(biāo)準(zhǔn)液的最大吸收值處測(cè)定吸光度。實(shí)驗(yàn)做三次重復(fù)。

        總酚含量(%)=×100%

        2 結(jié)果與分析

        2.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品篩選

        總酚的檢測(cè)方法中常用到的標(biāo)準(zhǔn)品因作物不同而不同,因此實(shí)驗(yàn)采用單寧酸、沒食子酸和香草醛為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行總酚含量的檢測(cè),實(shí)驗(yàn)采用50%丙酮提取種子內(nèi)的總酚,單寧酸、沒食子酸、香草醛做標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定總酚含量進(jìn)行顯著性分析,單寧酸做為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定總酚含量極顯著高于其它兩種標(biāo)準(zhǔn)品種。

        2.2 不同溶劑、不同濃度對(duì)種子內(nèi)總酚提取效果研究

        不同溶劑、不同濃度提取測(cè)定長白 木種子內(nèi)總酚含量,丙酮的提取液中總酚含量均極顯著的高于乙醇提取液中總酚含量,用30%丙酮和50%丙酮提取總酚含量極顯著的高于70%丙酮處理,且30%丙酮提取與50%丙酮提取二者之間達(dá)到顯著性差異,未達(dá)到極顯著性差異。由此可以看出本試驗(yàn)提取總酚的適宜有機(jī)溶劑為丙酮,適宜濃度為50%。不同標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果比較可以看出,丙酮對(duì)種子中總酚的提取效果均好于乙醇提取效果,且以50%丙酮提取效果較好。

        3 結(jié)論與討論

        以50%丙酮做提取劑,單寧酸做標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)長白 木種子內(nèi)總酚含量為優(yōu)選方法。通過文章研究可知,單寧酸做為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定種內(nèi)總酚含量極顯著高于香草醛、沒食子酸做標(biāo)準(zhǔn)品。50%丙酮對(duì)長白 木種子進(jìn)行提取,測(cè)得種子內(nèi)總酚含量最高。因此,用50%丙酮溶液做提取劑,以單寧酸做標(biāo)準(zhǔn)樣品檢測(cè)的靈敏度較高,是本次實(shí)驗(yàn)測(cè)定長白 木種內(nèi)總酚含量的優(yōu)選方法。

        參考文獻(xiàn)

        [1]方志榮,蘇智先,胡進(jìn)耀,等.珙桐種子幾種呼吸代謝酶活性及果實(shí)不同組織總酚含量測(cè)定[J].綿陽師范學(xué)院學(xué)報(bào),2008,27(5):70-73.

        [2]楊曉玲,張培玉,郭明軍.山楂種子酚類物質(zhì)含量與休眠的關(guān)系[J].園藝學(xué)報(bào),1997,24(4):393-394.

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