亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        香蕉MaPIP2—2基因的克隆、亞細(xì)胞定位及表達(dá)分析

        2015-05-30 05:13:09侯曉婉胡偉顏彥徐碧玉金志強(qiáng)
        熱帶作物學(xué)報(bào) 2015年7期
        關(guān)鍵詞:熒光定量PCR香蕉克隆

        侯曉婉 胡偉 顏彥 徐碧玉 金志強(qiáng)

        摘 要 水通道蛋白(AQPs)是細(xì)胞間和細(xì)胞內(nèi)水分運(yùn)輸?shù)闹饕ǖ溃?對(duì)于植物細(xì)胞的水分穩(wěn)態(tài)和脅迫響應(yīng)具有重要作用。本研究從香蕉中克隆了一個(gè)水通道蛋白基因MaPIP2-2。序列分析結(jié)果表明,該基因的開(kāi)放閱讀框(ORF)為846 bp,編碼281個(gè)氨基酸。多序列比對(duì)和進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果表明,該基因編碼的蛋白與其它植物中水通道蛋白具有較高的一致性,并且與擬南芥AtPIP2-2和AtPIP2-3的親緣關(guān)系最近。亞細(xì)胞定位表明該基因定位在細(xì)胞膜上。實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析結(jié)果表明,該基因能夠在轉(zhuǎn)錄水平響應(yīng)甘露醇、低溫、NaCl脅迫和ABA信號(hào)。這些結(jié)果表明MaPIP2-2可能參與了非生物逆境脅迫應(yīng)答,為進(jìn)一步研究MaPIP2-2基因的功能鑒定了基礎(chǔ)。

        關(guān)鍵詞 水通道蛋白;PIP;香蕉;克?。粊喖?xì)胞定位;熒光定量PCR

        中國(guó)分類號(hào) Q344.13 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

        Abstract Water channel protein,(Aquaporins, AQPs), which was the main water transport corridor, plays a major role in maintaining water steady state and the stress response. In the present study, a AQP gene designated MaPIP2-2 from banana was isolated. MaPIP2-2 ORF was 846 bp, encoding 281 amino acids. Comparison of amino acid sequences and phylogenetic analysis indicated that MaPIP2-2 was closely related with AtPIP2-2 and AtPIP2-3. Subcellular localization assays showed that the MaPIP2-2 protein was present in the plasma membrane. Real-time quantitative polymerase chain reaction(QPCR)assay revealed that MaPIP2-2 participated in the response of abiotic stresses at transcriptional level. These results indicated that MaPIP2-2 might be involved in abiotic stress responses. The study would lay a foundation for further investigating the function of MaPIP2-2.

        Key words Aquaporins; PIP; Banana; Cloning; Subcellular localization; Quantitative RT-PCR

        doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2015.07.014

        水是生物體的主要組成部分,對(duì)生命至關(guān)重要。植物體的生長(zhǎng)很大程度上取決于植物對(duì)水分的吸收和運(yùn)輸,然而高鹽、干旱、低溫等環(huán)境脅迫導(dǎo)致植物體內(nèi)水分的缺失,嚴(yán)重影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育[1]。香蕉作為世界第四大糧食作物,因其特有的淺根和需要大量水份維持的永久性綠色樹(shù)冠,對(duì)任何條件引起的水份缺失異常敏感[2],因此研究香蕉如何響應(yīng)非生物脅迫顯得尤為重要。

        水分在植物體不同組織之間的運(yùn)輸主要是通過(guò)質(zhì)外體和共質(zhì)體途徑[3]。水通道蛋白AQPs(Aquaporin, AQP)參與了水分共質(zhì)體途徑的運(yùn)輸,負(fù)責(zé)水分的快速跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),扮演著“細(xì)胞的水管工”,介導(dǎo)植物種子萌發(fā)、細(xì)胞伸長(zhǎng)、氣孔運(yùn)動(dòng)、韌皮部的裝卸及逆境應(yīng)答等多個(gè)生理過(guò)程[4-5]。AQP通過(guò)快速改變植物膜的通透性以應(yīng)對(duì)外界環(huán)境的變化,在植物對(duì)逆境脅迫的應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用[6-7]。已有的報(bào)道表明,來(lái)自于水稻、小麥、擬南芥等多個(gè)物種的AQP家族基因能夠在轉(zhuǎn)錄水平響應(yīng)非生物脅迫及相關(guān)信號(hào)分子,但香蕉中AQP家族基因功能的研究還非常有限。

        水通道蛋白(AQP)屬于膜內(nèi)嵌蛋白MIP(a class of major intrinsic proteins,MIP)的一個(gè)大的亞家族,是由四聚體組成的沙漏狀結(jié)構(gòu)。由5個(gè)短環(huán)(A-E 環(huán))連接的6個(gè)跨膜a-螺旋組成,其中B、D 環(huán)各有一段高度保守的天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸(Asn-Pro-Ala,NPA)元件,它們與其他跨膜區(qū)域共同形成通道[3,8-9]。根據(jù)結(jié)構(gòu)和定位,AQP被分為4類,分別為質(zhì)膜內(nèi)嵌蛋白(the plasma membrane intrinsic proteins,PIPs)、液泡膜內(nèi)嵌蛋白(the tonoplast intrinsic proteins,TIPs)、小分子堿性膜內(nèi)嵌蛋白(the recently characterized small basic intrinsic proteins,SIPs)和類NOD 26膜內(nèi)嵌蛋白(the NOD-26-like intrinsic proteins,NIPs)[10-13]。

        本研究從香蕉中克隆了一個(gè)MaPIP2-2基因,并對(duì)其在逆境脅迫以及ABA處理下的表達(dá)模式進(jìn)行了研究。研究結(jié)果表明,克隆得到的MaPIP2-2基因編碼的蛋白具有AQP家族蛋白的基本特征;MaPIP2-2基因的表達(dá)能夠響應(yīng)非生物逆境脅迫及ABA信號(hào)。本研究的結(jié)果為進(jìn)一步研究MaPIP2-2基因的功能奠定了基礎(chǔ)。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 植物材料 生長(zhǎng)正常的五葉一心巴西蕉(Musa AAA Cavendish cv. Brazilian)幼苗取自中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院儋州組培中心。

        1.1.2 主要試劑 PEG6000、NaCl、ABA、AS、MES等生化試劑購(gòu)自上海生工生物工程有限公司;氯仿、異戊醇等各種分析純?cè)噭┵?gòu)自廣州化學(xué)試劑公司;限制性內(nèi)切酶、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司;T4連接酶購(gòu)自BioLab試劑公司,膠回收試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒購(gòu)自O(shè)MEGA試劑生物公司,PCR試劑購(gòu)自康為試劑生物公司。

        1.2 方法

        1.2.1 目的基因的獲得 從香蕉A基因組測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)中得到一個(gè)AQP家族基因,根據(jù)ORF序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(5'- CATGCCATGGCGATGTCGAAGGA

        GGTCAGTGA-3';5'-GGACTAGTGTTGGTGGGGTT

        GCTCCG-3')擴(kuò)增MaPIP2-2 cDNA全長(zhǎng)序列。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋鹤冃裕?4 ℃,40 s;退火,55 ℃,40 s;延伸,72 ℃,1 min 30 s;共35個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增體系為20 μL體系:Mix,10 μL;Primer F,1 μL;Primer R,1 μL;cDNA,1 μL;ddH2O,7 μL。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物回收、連接、轉(zhuǎn)化后,挑取單克隆在LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)并進(jìn)行PCR鑒定。對(duì)已鑒定的陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序分析。

        1.2.2 生物信息學(xué)分析 在NCBI中利用BLASTX進(jìn)行序列同源性分析,從中選取相似性較高的同源序列用DNAMAN軟件進(jìn)行氨基酸序列的多重比對(duì)。另外,為了確認(rèn)與其他物種中同源基因的親緣關(guān)系,利用MEGA軟件對(duì)擬南芥AQP基因家族和克隆出的MaPIP2-2基因一起構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

        1.2.3 MaPIP2-2亞細(xì)胞定位分析 (1)瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建。根據(jù)目的基因MaPIP2-2序列設(shè)計(jì)帶有酶切位點(diǎn)NcoⅡ/SpeⅠ和不含終止子的載體引物:5'-CATGCCATGGCGATGTCGAAGGAGGTCAGTGA-3';5'-GGACTAGTGTTGGTGGGGTTGCTCCG-3'。擴(kuò)增產(chǎn)物回收后連接到克隆載體pMD18-T上,獲得重組質(zhì)粒,陽(yáng)性克隆測(cè)序正確后,用NcoⅡ/SpeⅠ進(jìn)行雙酶切并回收目的片段。同時(shí),利用NcoⅡ/SpeⅠ雙酶切并回收的pCAMBIA1302載體大片段。利用T4連接酶將目的片段和載體片段進(jìn)行連接,將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α后,挑取單克隆擴(kuò)大培養(yǎng),經(jīng)PCR和質(zhì)粒雙酶切驗(yàn)證后,進(jìn)行測(cè)序分析,從而成功構(gòu)建植物表達(dá)載體pCAMBIA1302-MaPIP2-2-GFP。將測(cè)序正確的陽(yáng)性克隆的質(zhì)粒以及pCAMBIA1302空載體質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌LBA4404中。

        (2)農(nóng)桿菌法介導(dǎo)的亞細(xì)胞定位。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化法將pCAMBIA1302-MaPIP2-2-GFP和空載體(pCAMBIA1302-GFP)導(dǎo)入洋蔥表皮細(xì)胞中[14]。隨后將洋蔥表皮放在鋪有濾紙的MS固體培養(yǎng)基上,25 ℃暗培養(yǎng)16~24 h,然后制作裝片,通過(guò)FluoViewTM FV1000激光掃描共聚焦顯微鏡觀察熒光信號(hào)。

        1.2.4 基因表達(dá)分析 將生長(zhǎng)一致的五葉一心巴西蕉分成4組,將第1組用300 mmol甘露醇(Mannitol)處理7、10、15、17 d;第2組用300 mmol NaCl處理8、12、24、32 d;第3組在8 ℃冷害下培養(yǎng)10、22、47 h,之后將處理47 h的幼苗置于人工氣候培養(yǎng)箱中恢復(fù)一周;第4組用100 μmol的ABA處理2、6、12、24 h。參照淦國(guó)英[15]改良的CTAB法提取每個(gè)處理時(shí)間點(diǎn)的香蕉葉片RNA,用自帶DNA消化酶的cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)成cDNA。以反轉(zhuǎn)錄的cDNA第一鏈為模板,用TaRaKa公司的實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒中的SYBR Green、ROX染料進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增,反應(yīng)在吉泰生物科技有限公司Mx3005P熒光定量PCR儀上進(jìn)行。以香蕉RPS2基因?yàn)閮?nèi)參。定量方法為2-△△CT法:ΔΔCT=(CT, Target-CT, Actin)Timex-(CT, Target-CT, Actin)Time0[16]。設(shè)計(jì)引物參考TaKaRa實(shí)時(shí)熒光定量標(biāo)準(zhǔn)說(shuō)明書。為了保證引物的特異性,引物設(shè)計(jì)在非翻譯區(qū),PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度維持在300 bp以內(nèi),并進(jìn)行了測(cè)序分析。設(shè)計(jì)引物完成后(MaPIP2-2-3F:5'-TCGGCTTTGCTGTGTTCA-3';MaPIP2-6-3R:5'-TCAGTTGGTGGGGTTGCT-3';MuRPS2F:5'-TAGGGATTCCGACGATTTGTTT-3';MuRPS2 R:5'-TAGCGTCATCATTGGCTGGGA-3'),送上海生工生物工程有限公司合成。熒光定量PCR的反應(yīng)程序如下:95 ℃預(yù)變性3 min;95 ℃變性10 s,50 ℃退火15 s,72 ℃延伸30 s,循環(huán)40次。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 MaPIP2-2基因的克隆及生物信息學(xué)分析

        根據(jù)香蕉A基因組測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)中的信息,從香蕉栽培品種巴西蕉中克隆到一個(gè)AQP家族基因,其ORF為846 bp,編碼281個(gè)氨基酸。從GenBank中選擇擬南芥的全部35個(gè)AQP家族成員及筆者所克隆的香蕉AQP基因的氨基酸序列,利用MEGA5.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖1),結(jié)果表明本研究克隆得到的AQP基因所編碼的氨基酸序列與AtPIP2-2和AtPIP2-3具有較近的親緣關(guān)系,蛋白序列比對(duì)表明它們之間的相似度分別為74.39%和73.68%,故將該基因命名為MaPIP2-2。BLASTX分析表明,MaPIP2-2編碼的氨基酸序列與姜花的HcPIP2(AEF32110.1)、海棗PdPIP2-6(XP_008809438.1)、桑樹(shù)MnPIP2-7(XP010107654.1)、可可TcPIP2-8(XP007041804.1)的氨基酸序列具有較高的一致性,分別為93%、89%、88%和88%(圖2)。多序列比對(duì)分析表明,MaPIP2-2具有PIP亞家族蛋白的基本特征,其氨基酸序列有6個(gè)保守的跨膜螺旋,5個(gè)短環(huán),1個(gè)高度保守的氨基酸序列‘HINPAVTFG和2個(gè)‘NPA元件。這些結(jié)果表明本研究克隆的MaPIP2-2為香蕉PIP亞家族的成員(圖2)。

        2.2 MaPIP2-2蛋白的亞細(xì)胞定位分析

        以構(gòu)建的MaPIP2-2基因的植物表達(dá)載體pCAMBIA1302-MaPIP2-2-GFP,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化法將其和空載體(pCAMBIA1302-GFP)導(dǎo)入洋蔥表皮細(xì)胞中,對(duì)MaPIP2-2蛋白在植物亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的分布進(jìn)行研究。激光共聚焦顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白信號(hào)在細(xì)胞內(nèi)的分布,結(jié)果顯示35S∶GFP綠色熒光蛋白在洋蔥表皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核和細(xì)胞膜上均有表達(dá),35S∶MaPIP2-2-GFP在洋蔥表皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上表達(dá)(圖3)。這一結(jié)果表明MaPIP2-2蛋白定位在細(xì)胞膜上。

        2.3 MaPIP2-2基因在非生物逆境脅迫及ABA處理下的表達(dá)分析

        利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)MaPIP2-2基因在NaCl、甘露醇(Mannitol)、低溫、ABA處理下的表達(dá)模式分析的結(jié)果表明,在NaCl處理下,與對(duì)照相比較,MaPIP2-2基因的表達(dá)在處理8~24 d顯著被誘導(dǎo)了1.3~2.3倍(圖4-A)。在甘露醇處理下,與對(duì)照相比較,MaPIP2-2基因的表達(dá)在處理7~17 d被抑制(圖4-B)。在低溫處理下,與對(duì)照相比較,MaPIP2-2基因的表達(dá)在處理10 h被顯著誘導(dǎo)了2倍,達(dá)到最大值2.076 68,隨后逐漸下降(圖4-C)。在ABA處理下,MaPIP2-2基因的表達(dá)在處理2 h時(shí)被顯著誘導(dǎo),隨后在處理6 h時(shí)卻又下降到1.127 14,而在處理6~24 h時(shí)逐漸升高并達(dá)到最大值3.759 61,與對(duì)照相比較,ABA處理下,MaPIP2-2基因整體呈顯著誘導(dǎo)趨勢(shì)(圖4-D)。

        3 討論與結(jié)論

        近年來(lái)水通道蛋白(AQP)家族基因的功能已經(jīng)廣泛被報(bào)道,但是關(guān)于香蕉中水通道蛋白(AQP)家族基因的研究非常有限。本研究從香蕉中克隆了一個(gè)AQP基因(MaPIP2-2),該基因編碼的氨基酸序列具有AQP家族蛋白的基本特征,與其它物種中AQP家族成員具有較高的一致性,與擬南芥AtPIP2-2和AtPIP2-3具有較近的進(jìn)化關(guān)系。亞細(xì)胞定位分析表明,MaPIP2-2定位于細(xì)胞膜上,與MaPIP1;1和TaAQP7等AQP基因的細(xì)胞定位結(jié)果一致[1,18],進(jìn)一步說(shuō)明了MaPIP2-2具有PIP蛋白的特征。因此,可以推測(cè)本研究所克隆的基因是AQP家族中PIP亞類中的一個(gè)成員。

        大量的研究表明AQP家族基因能夠調(diào)節(jié)植物體內(nèi)水分的平衡,保持植物細(xì)胞水分穩(wěn)態(tài),并且能夠快速響應(yīng)環(huán)境脅迫,在植物對(duì)逆境脅迫的應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用。因此,本研究運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法研究了香蕉MaPIP2-2基因在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)甘露醇、低溫、高鹽和ABA信號(hào)的應(yīng)答。結(jié)果表明,在高鹽和ABA處理下,MaPIP2-2基因的表達(dá)趨勢(shì)基本一致,均被顯著誘導(dǎo)。這一結(jié)果與在高鹽處理下香蕉MaPIP1;1、小麥TaNIP和TaAQP8基因的表達(dá)趨勢(shì)一致,同時(shí)小麥TaNIP、TaAQP8被證實(shí)能夠增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因植株對(duì)干旱、高鹽和低溫脅迫的耐受性[1,18-19];而在ABA處理下的表達(dá)趨勢(shì)與水稻OsPIP1-1、OsPIP1-2、OsPIP2-1、OsPIP2-3、OsPIP2-4和OsPIP2-5的一致,同時(shí)水稻OsPIP1-1被證明能夠顯著提高植物對(duì)高鹽和干旱的耐受性[20]。這些結(jié)果表明一些水通道蛋白家族成員在高鹽和ABA處理下發(fā)揮著正向調(diào)控作用。因此,MaPIP2-2基因可能在植物響應(yīng)高鹽脅迫和ABA信號(hào)過(guò)程中起著重要作用。

        在甘露醇處理下,MaPIP2-2基因的表達(dá)被顯著抑制。這一結(jié)果與Guo等[20]報(bào)道的PEG6000處理下水稻葉片中OsPIP2-4和根系中OsPIP1-2,OsPIP1-3,OsPIP2-2的表達(dá)趨勢(shì)一致。在低溫處理下,MaPIP2-2基因的表達(dá)被早期誘導(dǎo),表明巴西蕉對(duì)低溫脅迫的響應(yīng)較為敏感,在處理初期就能達(dá)到最大值。這一結(jié)果與Huang等[21]研究的TaAQP7在低溫脅迫下的研究結(jié)果一致,而TaAQP7在煙草中過(guò)表達(dá)增強(qiáng)了轉(zhuǎn)基因植株對(duì)干旱、高鹽和低溫脅迫的耐受性[17]。因此,MaPIP2-2基因可能參與了植物對(duì)低溫和甘露醇的耐受過(guò)程。

        綜上所述,MaPIP2-2基因編碼的蛋白具備PIP亞家族蛋白的基本結(jié)構(gòu)特征,是AQP家族中PIP亞類的一個(gè)成員。MaPIP2-2基因能夠在轉(zhuǎn)錄水平響應(yīng)甘露醇、低溫、NaCl和ABA信號(hào),這些結(jié)果表明MaPIP2-2能夠參與非生物逆境脅迫應(yīng)答,并在其中發(fā)揮重要作用。為進(jìn)一步研究MaPIP2-2基因的功能奠定了基礎(chǔ)。

        參考文獻(xiàn)

        [1] Xu Y, Hu W, Liu J H, et al. A banana aquaporin gene, MaPIP1;1, is involved in tolerance to drought and salt stresses[J]. BMC Plant Biology, 2014, 14(1): 59.

        [2] Van Asten P, Fermont A, Taulya G. Drought is a major yield loss factor for rainfed East African highland banana[J]. Agric Water Manage, 2011, 98(4): 541-552.

        [3] Sreedharan S, Upendra K S S, Ganpathi T. Transgenic banana plants overexpressing a native plasma membrane aquaporin MusaPIP1;2 display high tolerance levels to different abiotic stresses[J]. Plant Biotechnology Journal, 2013, 11(3): 948.

        [4] 劉迪秋, 王繼磊, 葛 鋒, 等. 植物水通道蛋白生理功能的研究進(jìn)展[J]. 生物學(xué)雜志, 2009, 26(5): 63-66.

        [5] 朱美君, 康 蘊(yùn), 陳 珈, 等. 植物水通道蛋白及其活性調(diào)節(jié)[J]. 植物學(xué)通報(bào), 1999, 16(1): 44-50.

        [6] Vera-Estrella R, Barkla B, Bohnert H J, et al. Novel regulation of aquaporins during osmotic stress[J]. Plant Physiol, 2004, 135(4): 2 318-2 329.

        [7] Maurel C, Verdoucq L, Luu D.-T, et al. Plant aquaporins: membrane channels with multiple integrated functions[J]. Annu Rev Plant Biol, 2008(59): 595-624.

        [8] 李 軍, 乙 引 植物水通道蛋白的運(yùn)輸和調(diào)節(jié)[J]. 植物生理學(xué)通訊, 2010, 46(5): 493-498.

        [9] Chaumont F, Barrieu F, Wojcik E, et al. Aquaporins constitute a large and highly divergent protein family in maize[J]. Plant Physiology, 2001(12): 1 206-1 215.

        [10] Johansson U, Karlsson M, Johansson I, et al. The complete set of genes encoding major intrinsic proteins in Arabidopsis provides a framework for a new nomenclature for major intrinsic proteins in plants[J]. Plant Physiology, 2001, 126(4): 1 358-1 369.

        [11] Johansson U, Karlsson M, Johansson I, et al. The role of aquaporins in cellular and whole plant water balance[J]. BBA-Biomembranes, 2000, 1 465(1-2): 324-342.

        [12] Maurel C. Aquaporins and water permeability of plant membranes[J]. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology, 1997(48): 399-429.

        [13] Rivers R L, Dean R M, Chandy G, et al. Functional analysis of nodulin 26, an aquaporin in soybean root nodule symbiosomes[J]. Journal of Biological Chemistry, 1997, 272(26): 16 256-16 261.

        [14] 邢文婷. 香蕉MaMYB基因克隆及抗旱功能研究[D]. ??冢?海南大學(xué), 2014.

        [15] 淦國(guó)英, 漆艷香, 蒲金基, 等. 改良CTAB 法提取高質(zhì)量香蕉葉片總RNA[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009(7): 192-195.

        [16] Liva K J, Schmittgen T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCt method[J]. Method, 2001, 25(4): 402-408.

        [17] Zhou S Y, Hu W, Deng X M, et al. Overexpression of the wheat aquaporin gene, TaAQP7, enhances drought tolerance in transgenic tobacco[J]. Plos One, 2012(7): 1-14.

        [18] Gao Z X, He X L, Zhao B C, et al. Overexpressing a putative aquaporin gene from wheat, TaNIP, enhances salt tolerance in transgenic Arabidopsis[J]. Plant Cell Physiol, 2010, 51(5): 767-775.

        [19] Hu W, Yuan Q Q, Wang Y, et al. Overexpression of a wheat aquaporin gene, TaAQP8, enhances salt stress tolerance in transgenic tobacco[J]. Plant Cell Physiol, 2012, 53(12): 2 127-2 141.

        [20] Guo L, Wang Z Y, Lin H, et al. Expression and functional analysis of the rice plasma-membrane intrinsic protein gene family[J]. Cell Research, 2006, 16(3): 277-286.

        [21] Huang C, Zhou S, Hu W, et al The wheat aquaporin gene TaAQP7 confers tolerance to cold stress in transgenic tobacco[J]. Zeitschrift Für Naturforschung Section C-A Journal of Biosciences, 2014, 69(3-4): 142-148.

        猜你喜歡
        熒光定量PCR香蕉克隆
        克隆狼
        浙江:誕生首批體細(xì)胞克隆豬
        快手香蕉餅
        摘香蕉
        瓶里有香蕉
        香蕉
        弗氏檸檬酸桿菌SYBRGreenⅠ熒光定量PCR診斷方法的建立及耐藥性分析
        實(shí)時(shí)熒光定量PCR在手足口病原體檢測(cè)中的應(yīng)用探討
        今日健康(2016年12期)2016-11-17 19:21:34
        抗BP5-KLH多克隆抗體的制備及鑒定
        熒光定量PCR在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用
        精品一区二区久久久久久久网站| 日本一区二区三区人妻| 欧美激情肉欲高潮视频| 午夜不卡av免费| 欧美三级超在线视频| 国产一区二区三区再现| 男人吃奶摸下挵进去啪啪软件 | 91热久久免费精品99| 97精品一区二区视频在线观看| 久操视频新免费伊人| 国产最新AV在线播放不卡| 日本视频一区二区二区| 亚洲一区二区在线观看免费视频| 又色又爽又黄还免费毛片96下载| 亚洲精品中文字幕无乱码麻豆| 在线观看av国产自拍| 91精品国产综合久久国产| 日韩国产人妻一区二区三区| 夫妇交换刺激做爰视频| 亚洲AV日韩Av无码久久| 亚洲日本一区二区在线| 美女脱了内裤张开腿让男人桶网站| 亚洲日韩精品无码专区网站| 无码精品一区二区免费AV| 日本中文字幕人妻精品| 绝顶高潮合集videos| 99久久亚洲精品无码毛片| 久久99精品久久久久九色| 在线观看一区二区蜜桃| 扒开腿狂躁女人爽出白浆| 国内精品久久久久影院一蜜桃| 伊人久久亚洲综合影院首页 | 男女射精视频在线观看网站| 爱性久久久久久久久| 国产a级网站| 国产激情在线观看视频网址| 日韩欧美在线综合网另类 | 在线观看免费视频发布白白色| 热99re久久精品这里都是精品免费 | 国产人妻人伦精品1国产盗摄| 亚洲av日韩片在线观看|