向曉黎等

摘要：[目的]分析研究并改進(jìn)食品中磷的測(cè)定方法。 [方法] 對(duì)鉬藍(lán)分光光度法測(cè)定食品中磷的測(cè)定方法進(jìn)行改進(jìn)，對(duì)消解液酸度的調(diào)節(jié)，顯色劑進(jìn)行了改進(jìn)，并與國(guó)標(biāo)方法鉬藍(lán)分光光度法測(cè)定食品中磷的測(cè)定方法進(jìn)行對(duì)比分析。[結(jié)果]試驗(yàn)表明，該試驗(yàn)改進(jìn)的方法不僅簡(jiǎn)化了操作過程，顯色明顯，而且標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，得到了較好的準(zhǔn)確度，測(cè)定結(jié)果與國(guó)標(biāo)方法的測(cè)定結(jié)果比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。[結(jié)論]研究得出的改進(jìn)的鉬藍(lán)分光光度法可用于食品中磷的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：鉬藍(lán)分光光度法；食品；磷；測(cè)定方法；研究及改進(jìn)

中圖分類號(hào)：S121 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）08-244-02

磷是人體含量較多元素之一，占體重的1%左右。磷是構(gòu)成骨骼和牙齒的重要成分，是構(gòu)成生命物質(zhì)和酶的組成成分，參與能量代謝，體液內(nèi)的磷酸鹽還負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)酸堿平衡[1]，因此檢測(cè)食品中磷的含量有重要意義。實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，GB/T5009.87-2003鉬藍(lán)分光光度法測(cè)定食品中磷含量顯色時(shí)間長(zhǎng)，所用試劑不夠穩(wěn)定，方法不夠靈敏[2]。為此，筆者通過對(duì)消解液酸度的調(diào)節(jié)，并對(duì)顯色劑進(jìn)行了改進(jìn)，不僅簡(jiǎn)化了操作過程，得到了較好的精密度和準(zhǔn)確度，而且避免了有毒試劑對(duì)試驗(yàn)人員的危害及對(duì)環(huán)境的污染。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器。TU-1901紫外可見分光光度計(jì)及可調(diào)式電熱板等實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。

1.1.2 主要試劑。

氫氧化鈉溶液（2 mol/L）：80.0 g氫氧化鈉（分析純）溶于水，用水定容到1 L。

硫酸溶液（4.52 mol/L）：吸取28.0 ml濃硫酸（分析純），緩緩注入水中，并用水定容到1 L。

2，4-二硝基酚（或2，6-二硝基酚）指示劑：溶解0.20 g 2，4-二硝基酚溶于100 ml水中。

鉬銻貯存液：153 ml濃硫酸（分析純，密度1.84 g/ml），緩慢地倒入約400 ml水中，攪拌，冷卻。另取10 g鉬酸銨（分析純），溶解于約60 ℃的300 ml水中，冷卻。然后將硫酸溶液緩緩導(dǎo)入鉬酸銨溶液中，再加入100 ml 0.5%酒石酸銻鉀（分析純）溶液，最后用水稀釋至1 L，避光貯存。此貯存液含1%鉬酸銨、2.75 mol/L硫酸。

鉬銻抗顯色劑：1.50 g 抗壞血酸（C6H8O6，左旋，旋光度+21°～+22°，分析純）溶于100 ml鉬銻貯存液中。此液須隨配隨用。

磷（P）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（100 μg/ml）：精確稱取0.439 0 g在105 ℃烘干2 h的磷酸二氫鉀（優(yōu)級(jí)純），用水溶解后，轉(zhuǎn)入1 L容量瓶中，加入5 ml濃硫酸（防腐，分析純），用水定容到1 L，該溶液1 ml含磷（P）100 μg。此溶液可以長(zhǎng)期保存。

磷（P）標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（5 μg/ml）：吸取100 μg/ml（P）標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液5 ml于100 ml容量瓶中，加水定容，此溶液1 ml含磷（P）5 μg，此溶液不宜久存。

1.2 測(cè)定方法

1.2.1 方法原理。

待測(cè)液在一定酸度和三價(jià)銻離子存在下，其中的正磷酸與鉬酸銨形成銻磷鉬銨混合雜多酸，被抗壞血酸還原成藍(lán)色化合物——磷鉬藍(lán)。藍(lán)色的深淺與磷酸鹽含量成正比，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)700 nm處測(cè)定鉬藍(lán)的吸收光值，以定量分析法磷含量[3]。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。

分別移取磷標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（1 ml相當(dāng)于5 μg磷）0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml，置于50 ml容量瓶中，加水至15～20 ml，依次加入2，4-二硝基酚指示劑2滴，用稀氫氧化鈉溶液和稀硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至溶液剛呈微黃色，以標(biāo)準(zhǔn)曲線零管為參照。加入鉬銻抗顯色劑5 ml，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，靜止30 min后，在分光光度計(jì)波長(zhǎng)700 nm處用2 cm光徑比色皿，以零管溶液作參比調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)，進(jìn)行比色，測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 樣品測(cè)定。

準(zhǔn)確稱取均勻樣品0.3 g（精確至0.000 1 g）于三角瓶中，用少量蒸餾水潤(rùn)濕，加入5 ml濃硫酸，靜置0.5 h及以上，有促進(jìn)樣品有機(jī)物炭化，于電熱板上加熱至冒白煙取下，放至室溫，加入高氯酸5～7滴，繼續(xù)置于電熱板加熱消化至溶液無色即成，冷卻后，用蒸餾水分?jǐn)?shù)次將消化液完全洗入100 ml容量瓶中，并用水稀釋至刻度，搖勻，過濾（如無沉淀則不須過濾）。取濾液5 ml（視磷量多少定）置于50 ml容量瓶中，以空白試驗(yàn)溶液作參比調(diào)零，以下同標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。

同時(shí)做樣品空白試驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系 用該試驗(yàn)方法即改進(jìn)的鉬藍(lán)分光光度法和國(guó)標(biāo)法同時(shí)做磷標(biāo)準(zhǔn)曲線系列，其比對(duì)測(cè)定結(jié)果見表1。

由表1可以發(fā)現(xiàn)，國(guó)標(biāo)法磷含量在磷0～10 μg的標(biāo)準(zhǔn)系列得到的吸光值低，而且不時(shí)出現(xiàn)“跳管”現(xiàn)象，線性關(guān)系差，不能滿足測(cè)量需要[4-5]；改進(jìn)的鉬藍(lán)分光光度法磷含量在0～30 μg范圍時(shí)符合比爾定律，具有良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)r=0.999 7，回歸方程為改進(jìn)后的方法標(biāo)準(zhǔn)曲線顯色明顯，吸光度大，靈敏度高。

2.2 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 分別稱取國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)大米（GWB10010）、蘋果（GWB10019），按照改進(jìn)的鉬藍(lán)分光光度法進(jìn)行樣品檢測(cè)，6次測(cè)定的平均值均與標(biāo)準(zhǔn)參考值相符，結(jié)果見表2。

由表2可以看出，用改進(jìn)的鉬藍(lán)分光光度法測(cè)定食品中磷的含量[6]，2種國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測(cè)定平均值均在其標(biāo)準(zhǔn)參考值范圍內(nèi)，測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.36%～2.89%。表明改進(jìn)的鉬藍(lán)分光光度法具有良好的準(zhǔn)確度，樣品分析結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

2.3 加標(biāo)回收試驗(yàn) 選擇上述2個(gè)已知本底的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為樣品，每份樣品中添加低、高2個(gè)不同含量的磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，按改進(jìn)的鉬藍(lán)分光光度法分別測(cè)定2次其含量并計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。由表3看出，平均回收率在95%～97%，符合分析方法要求。

3 結(jié)論

改進(jìn)后的鉬藍(lán)比色法具有可在顯色前預(yù)先調(diào)節(jié)消解液酸度，加入較穩(wěn)定顯色劑和曲線線性較好的優(yōu)點(diǎn)，與國(guó)標(biāo)法（鉬藍(lán)比色法）相比，操作方便，重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度較好，儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，普通實(shí)驗(yàn)室均能配置，故而適用于食品中磷的測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

[1] 吳坤.營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：39-41.

[2] 衛(wèi)敏，劉鐘棟.食品中磷的檢測(cè)方法[J].中國(guó)科學(xué)：化學(xué)，2010，40（7）：914-921.

[3] 向曉黎，羅力力，李紅敏.肉及肉制品中復(fù)合磷酸鹽檢測(cè)方法的研究及改進(jìn)[J].生命科學(xué)儀器，2009，7（4）：51-53.

[4] 陳澍，向仕學(xué)，宋建莉.食物中磷測(cè)定方法的改進(jìn)[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2004，31（5）：796-797.

[5] 羅頌華.分光光度法測(cè)定食品中磷酸鹽的標(biāo)準(zhǔn)曲線選擇[J].計(jì)量與測(cè)試技術(shù)，2007，34（10）：54-55.

[6] 王光亞，曲寧，涂曉明，等.GB/T5009.87-2003食品中磷的測(cè)定[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004.