潘美慧，陳如圣，何后軍，張祥華，鄔向東，鄧舜洲，王 萍，朱芝秀，陳瑞光

(江西農(nóng)業(yè)大學 動物科學技術學院，江西 南昌 330045)

蟲草菌粉為蝙蝠蛾擬青霉Cs-4菌粉，又稱為發(fā)酵蟲草菌粉，俗稱蟲草粉，蟲草菌粉，蟲草提取物，發(fā)酵蟲草粉等。蝙蝠蛾擬青霉菌粉是從新鮮冬蟲夏草菌(Cordyceps sinensis(Berk)sacc)中分離所得的蟲草菌——蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces hepiali Chen＆Dai)經(jīng)液體深層發(fā)酵培養(yǎng)、過濾、干燥、粉碎制成的產(chǎn)品。蝙蝠蛾擬青霉菌種是江西國藥有限責任公司與中國醫(yī)學科學院藥物研究所衛(wèi)生部天然藥物生物合成重點實驗室經(jīng)過10年時間從青海產(chǎn)天然冬蟲夏草中分離純化而得，該菌種生產(chǎn)的發(fā)酵蟲草菌粉自1989年獲得衛(wèi)生部批準為一類原料藥新藥(文號:［89］衛(wèi)藥準字Z-17號)，在10多年的臨床應用當中，其良好的臨床效果以及可靠的安全性，深獲國內(nèi)外醫(yī)藥專家學者的認可。并于2001年3月23日被國家衛(wèi)生部發(fā)文(衛(wèi)法監(jiān)發(fā)［2001］84號文)，被確認為可用于保健食品的真菌名單。但其研究多為人類醫(yī)學研究，對家畜家禽的影響還未有報道，為此本試驗將蟲草菌粉添加到雛雞飼料中，進而研究其對雛雞免疫器官發(fā)育、細胞免疫和體液免疫功能3個方面的影響，為蟲草菌粉應用于畜禽養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

全價雛雞雞飼料，購自南昌正大集團;雛雞(余干烏雞)，購自江西省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所;綿羊新鮮全血，采自本實驗自養(yǎng)健康綿羊;蟲草菌粉，由江西國藥集團惠贈。Hank’s液、肝素、PHA、特級無菌犢牛血清等，均購自長城生物公司。

1．2 試驗分組

將240羽10日齡健康雛雞隨機分為4組(表1)，每組60羽，NDV疫苗常規(guī)免疫，在飼料中添加不同劑量蟲草菌粉，4個組均以相同南昌正大全價雛雞飼料為基礎日糧。NDV疫苗免疫程序:7日齡首免、21日齡二免;免疫途徑為飲水免疫;疫苗為NDV II系弱毒凍干苗。

表1 試驗分組與蟲草菌粉用量Tab．1 Grouping and the amount of Cordyceps power

1．3 免疫功能評價指標測定

飼喂至第10、20、30天每組分別隨機抽取20羽，先心臟采血供免疫功能檢測，然后處死檢測免疫器官。

1．3．1 對免疫器官發(fā)育的影響 將處死的雛雞剖解摘取中樞免疫器官法氏囊和外周免疫器官脾臟，去除筋膜和雜質(zhì)，于電子天平稱取其質(zhì)量并記錄結(jié)果。

1．3．2 對細胞免疫功能的影響 E-玫瑰花環(huán)試驗參照文獻［1］方法進行操作。先分離淋巴細胞;再采綿羊血，用肝素抗凝，用Hank’s液制備1%SRBC懸液;最后進行E-玫瑰花環(huán)試驗，計算花環(huán)率。

淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗采用PHA形態(tài)學檢查法，參照文獻［1］方法進行操作。

1．3．3 對體液免疫功能的影響(雞新城疫抗體檢測) 對雞NDV免疫抗體檢測，采用血凝試驗(HA)和血凝抑制試驗(HI)。方法參照《新城疫微量紅細胞凝集抑制試驗操作規(guī)程》(SN/T 1109-2002)。

1．4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17．0軟件進行數(shù)據(jù)處理，單因素方差分析比較2組間差異。所有數(shù)值均以“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2．1 對中樞免疫器官法氏囊影響結(jié)果

結(jié)果見表2，可知在飼喂20 d時，高劑量組與空白對照組法氏囊質(zhì)量差異顯著(P＜0．05)，飼喂30 d時，中、高劑量組與空白對照組法氏囊質(zhì)量差異顯著(P＜0．05)，且高劑量組與空白對照組差異極顯著(P＜0．01)。

表2 雛雞飼喂蟲草菌粉10、20、30 d，各組法氏囊質(zhì)量Tab．2 The weight of the bursa in each group after feeding Cordyceps for 10，20 or 30 days

2．2 對外周免疫器官脾臟影響

結(jié)果見表3，可知在飼喂20 d時，中、高劑量組與空白對照組脾臟質(zhì)量差異顯著(P＜0．05)，且高劑量組與空白對照組差異極顯著(P＜0．01)，飼喂30 d時，試驗組與對照組相比脾臟質(zhì)量略有增加。

表3 雛雞飼喂蟲草菌粉10、20、30 d，各組脾臟質(zhì)量Tab．3 The weight of spleen in each group after feeding Cordyceps for 10，20 or 30 days

可見在飼喂20 d后，試驗組與空白對照組對相比可明顯增加中樞免疫器官法氏囊與外周免疫器官脾臟的質(zhì)量，而且該作用與劑量相關，隨劑量增加，促進免疫器官發(fā)育作用越強。

2．3 細胞免疫功能檢測

結(jié)果見表4，可知在飼喂10 d時，低劑量組E-玫瑰花環(huán)率低于空白對照組，飼喂20 d時，中劑量組、高劑量組與空白對照組差異顯著(P＜0．05);由表5可知，在飼喂10 d時，中劑量組、高劑量組與空白對照組淋巴細胞轉(zhuǎn)化率差異極顯著(P＜0．01)，當飼喂20、30 d時，低、中、高劑量組與空白對照組差異皆顯著(P＜0．05)。結(jié)果表明，飼喂10 d時，低劑量組E-玫瑰花環(huán)陽性率偏低，而飼喂20 d時，中、高劑量蟲草菌粉可提高陽性E-玫瑰花環(huán)率，增強T細胞活性;在飼喂10 d時，中、高劑量蟲草菌粉對淋巴細胞轉(zhuǎn)化作用已經(jīng)表現(xiàn)出來，飼喂20 d后，低、中、高3個劑量皆能夠顯著提高淋巴細胞轉(zhuǎn)化率，增強細胞的免疫水平。

表4 蟲草菌粉對E-玫瑰花環(huán)率的影響Tab．4 The effect of Cordyceps power on E-rosette rates

表5 蟲草菌粉對淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響Tab．5 The effect of Cordyceps power on lym phocyte transformation rates

2．4 體液免疫功能檢測

結(jié)果由表6可知，在飼喂蟲草菌粉20 d時，中、高劑量組與空白對照組NDV抗體水平差異顯著(P＜0．05)，且高劑量組與空白對照組NDV抗體水平差異極顯著(P＜0．01);在飼喂蟲草菌粉30 d時，雖然試驗組與對照組無差異，但同時可見試驗組與對照組NDV抗體水平均已經(jīng)達最高水平。結(jié)果說明，飼喂蟲草菌粉可以顯著促進抗體產(chǎn)生，在20 d時中劑量組比對照組抗體水平提高1∶22．1，高劑量組比對照組提高1∶22．53，能使特異性抗體提前達到高水平。

表6 雛雞飼喂蟲草菌粉10、20、30 d，各組NDV抗體檢測結(jié)果Tab．6 NDV antibody test results in each group after feeding Cordyceps power for 10，20 or 30 days

3 小結(jié)與討論

(1)本試驗發(fā)現(xiàn)蟲草菌粉能夠加快雛雞免疫器官的發(fā)育，提高T淋巴細胞活性，具有增強雛雞細胞免疫功能;在飼喂蟲草菌粉20 d時中劑量組比對照組抗體水平提高1∶22．1，高劑量組比對照組提高1∶22．53，使特異性抗體提前達到高水平，說明蟲草菌粉亦可以提高體液免疫水平。

(2)法氏囊和脾臟的質(zhì)量可用于評價雛雞的免疫狀況，本試驗證實了蟲草菌粉有促進動物免疫器官的發(fā)育;活性E-玫瑰花環(huán)試驗，能敏感地反映機體的免疫水平和動態(tài)的變化［2］。淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗可以反映機體免疫狀態(tài)，是細胞免疫的一個測定指標［3］，本試驗證實了蟲草菌粉可以提高T細胞的免疫活性。說明蟲草菌粉具有促進機體免疫力的功能，這與以往的報道相符［4-16］。

(3)NDV弱毒疫苗免疫雛雞，雛雞產(chǎn)生相應的抗體，將蟲草菌粉加入飼料飼喂，發(fā)現(xiàn)試驗組明顯加快了NDV疫苗抗體的產(chǎn)生，在20 d即達到高水平，說明蟲草菌粉可以促進抗體的產(chǎn)生。這與林繼和［6］2011年的報道類似。

本次試驗結(jié)果說明，中劑量蟲草菌粉可發(fā)揮較好的免疫增強作用。據(jù)悉，市場上蟲草菌粉價格約為196元/kg，按照肉雜雞日采食量等于日齡×2．2 g，日糧中添加蟲草菌粉0．6 g/kg，對雛雞1～30日齡飼喂30 d計算，一只雞大約增加飼養(yǎng)成本0．12元，不影響蟲草菌粉在實踐中的推廣，在畜牧業(yè)中有很好的應用前景。

［1］何昭陽，胡桂學，王春風．動物免疫學試驗技術［M］．長春:吉林科學技術出版社，2002．

［2］谷新利，陳韓英，李炳奇，等．中藥方劑中提取的多糖對家兔免疫功能的影響［J］．畜牧與獸醫(yī)，2005，37(12):17-20．

［3］劉彥威，劉娜，劉利強．冬蟲夏草有效成分的研究進展［J］．動物醫(yī)學進展，2004，25(3):51-53．

［4］Yu L，Zhang B，Ruan，et al．Effects of different components of C sinensis polysaccharide on immune function［J］．Journal of Zhejiang College of Traditional Chinese Medicine，2004，28(1):49-50．

［5］付海田，鄧超，王敏，等．蟲草發(fā)酵多糖的提取，結(jié)構(gòu)分析及生物活性研究［J］．天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014(1):111-116．

［6］林繼和，姚中磊，王世杰，等．復方中藥對免疫新城疫和禽流感疫苗三黃雞抗體產(chǎn)生的影響［J］．中國家禽，2011，33(9):64-65．

［7］劉勇．蟲草菌粉對日本沼蝦免疫功能的影響［J］．河北漁業(yè)，2007(1):11-13．

［8］馬玲，劉春光，姚小曼．蟲草多糖對小鼠免疫功能的影響［J］．衛(wèi)生毒理學雜志，1995，9(3):162-176．

［9］陳愛葵，龍曉鳳，張樹地，等．冬蟲夏草精粉對小白鼠免疫功能的影響研究［J］．中醫(yī)藥學刊，2004(9):1756-1757．

［10］彭日煌．蟲草菌粉活性物質(zhì)與營養(yǎng)成分研究［D］．南昌:南昌大學，2005．

［11］李星艷，谷新利．中藥多糖免疫增強劑的研究概況［J］．畜牧獸醫(yī)雜志，2008，27(5):40-42．

［12］吳友良，貢成良．關于冬蟲夏草對乙型肝炎療效及免疫性肝損傷保護作用的研究［J］．常熟高專學報，2002，16(4):39-42．

［13］陳曉燕．冬蟲夏草的藥理與臨床研究進展［J］．中醫(yī)藥導報，2009，15(2):91-93．

［14］YalinWu．Effectof various extracts and a polysaccharide from the ediblemycelia of Cordyceps sinensis on cellular and humoral immune response against Ovalbumin inmice［J］．Phytotherapy Research，2006，20(8):646-652．

［15］Ng T B，Wang H X．Pharmacological actions of Cordyceps，a prized folk medicine［J］．Journal of Pharmacy and Pharmacology，2005，57(12):1509-1519．

［16］吳垠．蟲草菌粉有效部位的主要藥效學及作用機制研究［D］．杭州:浙江中醫(yī)藥大學，2006．