陳金良，劉征，張晶，車鵬程，李海軍，李芳，盧凡，程慶強

（1.中國人民解放軍第281醫(yī)院，河北 秦皇島 066100；2.秦皇島市第一醫(yī)院，河北秦皇島 066101；3.河北聯(lián)合大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河北唐山 063000）

研究報告

麝香保心丸對一次性力竭運動大鼠心肌損傷標(biāo)記物和C反應(yīng)蛋白的影響

陳金良1*，劉征1，張晶2，車鵬程3，李海軍1，李芳1，盧凡1，程慶強1

（1.中國人民解放軍第281醫(yī)院，河北 秦皇島 066100；2.秦皇島市第一醫(yī)院，河北秦皇島 066101；3.河北聯(lián)合大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河北唐山 063000）

目的探討麝香保心丸對一次性力竭運動大鼠心肌損傷標(biāo)記物和C反應(yīng)蛋白的影響。方法選擇雄性Wistar大鼠52只，隨機分成實驗組和對照組，每組26只。兩組大鼠每天自由進食飲水相同，實驗組大鼠每天麝香保心丸2粒（每粒22.5 mg）分2次灌胃，共兩周。兩組均接受力竭游泳運動，制成力竭運動動物模型，分別測定和比較兩組大鼠血清和心肌組織肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白T（TnT）、B型腦鈉肽（BNP）和C反應(yīng)蛋白（CRP）水平。結(jié)果大鼠平均力竭運動游泳時間實驗組較對照組明顯延長（P＜0.01）。實驗組血清和心肌組織CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平均明顯低于對照組（P＜0.05）。結(jié)論麝香保心丸可顯著降低力竭運動大鼠血清和心肌中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平，能夠減輕力竭運動后心肌損傷。

大鼠；力竭運動；麝香保心丸；心肌損傷標(biāo)記物；C反應(yīng)蛋白

力竭運動訓(xùn)練可通過引起心肌代謝和心肌細(xì)胞通透性異常，導(dǎo)致心肌損傷壞死，從而對心肌產(chǎn)生不利影響［1］。因此，如何防治力竭運動對心肌造成的損傷，保護心肌功能和增強運動能力，成為新的研究熱點。本研究通過觀察中成藥麝香保心丸對一次性力竭游泳運動大鼠心肌損傷標(biāo)記物和炎癥因子的影響，探討其對心肌損傷的防治作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選擇11～12周齡清潔級雄性Wistar大鼠52只，體重（200±15）g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供［SCXK（冀）2003-1-003］，實驗在河北聯(lián)合大學(xué)實驗動物中心完成［SYXK（冀）2010-0038］。同次實驗的各組大鼠均為同窩大鼠，分籠飼養(yǎng)，自由進食飲水，飼養(yǎng)室環(huán)境溫度（21±4）℃，相對濕度48%～56%，光照時間每天12 h。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組

隨機分成對照組和實驗組，每組26只。兩組大鼠每天自由進食飲水相同，實驗組大鼠給予麝香保心丸（上海和黃藥業(yè)生產(chǎn)，批號140314；每粒22.5 mg）灌胃，每次1粒，每天2次，共兩周。兩組均接受一次性力竭運動游泳。

1.2.2 動物模型制備

兩組大鼠分別在長100 cm、寬50 cm、高50 cm的玻璃游泳槽中游泳，水深40 cm，水溫（31±1）℃。正式實驗前1 d進行1次適應(yīng)性游泳運動10 min。后將各組大鼠投入游泳槽中，自入水至游泳力竭的時間即游泳持續(xù)時間（短于2 h的大鼠除外）。游泳時尾部負(fù)重自身體重2%的負(fù)荷，力竭標(biāo)準(zhǔn)按Thomas報道的文獻(xiàn)［2］：大鼠游泳動作明顯失調(diào)，且不能再堅持，沉入水下10 s不能自主上浮。短時間內(nèi)力竭的大鼠，撈出休息5 min，繼續(xù)游泳，運動時間不少于2 h。

1.2.3 樣本采集

兩組動物力竭性游泳后即刻，分離穿刺右頸靜脈采血4mL，以3000 r/min離心15min后取上清液ˉ70℃保存?zhèn)錂z。然后將大鼠脫頸椎處死，迅速切取心臟，生理鹽水洗去心腔內(nèi)血液，剔除多余脂肪，剪下左心室肌20 mg剪碎，加2 mL生理鹽水，放入玻璃勻漿管進行勻漿、離心，取上清液ˉ70℃保存?zhèn)錂z。

1.2.4 血清和心肌組織實驗指標(biāo)檢測方法

以下列方法檢測兩組大鼠血清和心肌組織的肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白T（troponin T，TnT）、腦鈉肽（brain natriuretic peptide，BNP）和 C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）。CK、CK-MB用免疫抑制法檢測，TnT應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（Cusabio型酶聯(lián)免疫測定儀），BNP由Triage快速定量監(jiān)測儀測定，CRP應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法（羅氏601測定儀）測定。試劑盒由南京建成生物工程公司提供。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠力竭游泳運動時間

兩組大鼠均完成力竭游泳運動，對照組大鼠平均力竭游泳運動時間為（4.16±1.04）h，實驗組為（5.26±1.12）h，兩組在運動時間方面差異有顯著性（P＜0.05）。游泳運動前喂養(yǎng)麝香保心丸的大鼠耐受游泳運動時間相對延長，運動耐力增強。

2.2 兩組大鼠血清中CK、CK-M B、TnT、BNP和CRP水平

表1顯示，實驗組力竭運動心肌損傷各項指標(biāo)和CRP水平均低于對照組（P均＜0.05），說明麝香保心丸能夠有效地減輕力竭運動對大鼠心肌造成的損傷。

表1 對照組和實驗組力竭運動后血清CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.1 The changes of serum CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

表1 對照組和實驗組力竭運動后血清CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.1 The changes of serum CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

注：*P＜0.05，與對照組比較。Note.*P＜0.05，compared with the control group.

2.3 兩組大鼠心肌中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平

表2顯示，實驗組大鼠在力竭運動后心肌組織中CK等各項指標(biāo)和CRP的活性均明顯低于對照組（P＜0.05，P＜0.05）。由于力竭運動可造成心肌損傷，心肌細(xì)胞內(nèi)這些酶大量釋放，致使心肌中酶的活性升高，而應(yīng)用麝香保心丸后可使心肌細(xì)胞內(nèi)心肌酶和CRP釋放減少，進一步說明其可減輕力竭運動對大鼠心肌造成的損傷，對心肌可以起到保護作用。

表2 對照組和實驗組力竭運動后心肌組織CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.2 The changes ofmyocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

表2 對照組和實驗組力竭運動后心肌組織CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.2 The changes ofmyocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

注：*P＜0.05，與對照組比較。Note.*P＜0.05，compared with the control group.

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3 討論

已有研究［3ˉ5］證明，力竭運動或強負(fù)荷軍事訓(xùn)練后可導(dǎo)致機體血清CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平增高。動物實驗也表明［6，7］，大鼠力竭游泳運動后血CK及CK-MB增高，心肌細(xì)胞凋亡增多，血CK及CK-MB與心肌細(xì)胞凋亡呈平行的動態(tài)變化，可以反映早期心肌細(xì)胞凋亡情況。臨床上也已應(yīng)用CK、CK-MB、肌鈣蛋白（T和I）H和BNP做為判定心肌損傷的特異性指標(biāo)，近年來發(fā)現(xiàn)CRP與心肌損傷有關(guān)［4，5］。因此可以將血CK、CK-MB、TnT、BNP做為心肌損傷標(biāo)記物和CRP做為間接反應(yīng)或幫助觀察藥物防治心肌損傷的效果指標(biāo)。

本實驗結(jié)果顯示，應(yīng)用麝香保心丸的大鼠一次性力竭游泳運動后血清和心肌組織中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP等濃度明顯低于對照組的大鼠。就力竭運動引起血清和心肌CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP活性增高的機制而言，可能系力竭運動導(dǎo)致心肌細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物的積累和滲透壓增高，激素分泌加強；長時間運動使心肌缺氧，致使心肌細(xì)胞能量代謝障礙，導(dǎo)致亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)對高能磷酸化合物的競爭，使心肌細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)變化造成心肌細(xì)胞膜通透性損傷性改變，最終出現(xiàn)心肌細(xì)胞內(nèi)酶釋放入血液增多［6ˉ8］。許思毛等［9］應(yīng)用電鏡觀察了大負(fù)荷跑臺運動對大鼠心肌細(xì)胞膜Na+-K+泵、Ca2+泵與肌質(zhì)網(wǎng)Ca2+泵活性的影響及其與心肌超微結(jié)構(gòu)變化的關(guān)系。結(jié)果顯示，運動后24 h肌質(zhì)網(wǎng)Ca2+泵活性顯著減低，線粒體和肌原纖維結(jié)構(gòu)明顯損傷，肌細(xì)胞及肌質(zhì)網(wǎng)腫脹，說明高強度運動可導(dǎo)致心肌微結(jié)構(gòu)損傷。Smith研究［10］發(fā)現(xiàn)，力竭運動后即刻和24 h，心肌由于缺血缺氧致使與心肌損傷的相關(guān)炎性因子分泌增多，與本實驗中大鼠力竭運動后CRP顯著升高意義相似。

本研究中，在力竭游泳運動前喂養(yǎng)麝香保心丸的大鼠，之后血液和心肌組織的酶學(xué)標(biāo)記物和炎性因子CRP明顯低于對照組（P均＜0.05），說明麝香保心丸可減低力竭運動大鼠的心肌酶和炎性因子活性。麝香保心丸由人工麝香、人參提取物、肉桂、蘇和香、蟾酥、冰片、人工牛黃組成，藥理作用是多方面的［11］：①麝香具有強心作用，能夠?qū)巩惐I上腺素興奮心臟的作用，通過抑制心肌細(xì)胞的自律性使心率減慢，因而減少心肌氧耗；②人參提取物人參莖葉總皂甙對心肌有直接保護作用，并具有保護心肌毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及減輕線粒體損傷的作用；③肉桂有擴張冠脈、降低血管阻力，其成分桂皮醛具有抗血小板藥和抗凝血酶作用，因此可促進心肌微循環(huán)，保障心肌血供；④動物實驗發(fā)現(xiàn)蘇合香有增強心肌耐缺氧能力的作用，對狗實驗性心肌梗塞有減慢心率、增加冠脈血流和降低心肌耗氧作用，對兔、大鼠血小板聚集有顯著抑制作用；⑤蟾酥成分蟾毒配基類通過抑制心肌細(xì)胞膜上的Na+-K+-ATP酶，使心肌細(xì)胞內(nèi)Na+增高，Ga2+通過Na+-Ca2+交換進入細(xì)胞內(nèi)，從而使心肌收縮力增強；⑥另外兩種成分牛黃具有強心和鎮(zhèn)靜作用；冰片可防止冠脈痙攣，能夠減輕缺血所致的心肌損傷。中醫(yī)認(rèn)為此組方具有補氣、芳香開竅、益氣溫陽和理氣止痛功效，對應(yīng)西醫(yī)為擴張冠狀動脈改善冠脈供血，增加心輸出量；改善缺血心肌的代謝，減慢心率降低心肌耗氧；抑制心肌纖維化，減輕心肌和血管炎性反應(yīng)［12］；在改善心功能同時，降低血漿BNP濃度。麝香保心丸還可通過抑制纖維蛋白原，有效抑制動脈壁炎癥反應(yīng)，使CRP及P-選擇素水平降低，降低冠狀動脈的炎癥損害進而保護血管內(nèi)皮功能［13，14］，減少心血管事件發(fā)生。許多基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用研究證明麝香保心丸是安全有效的［15］。

總之，本研究結(jié)果進一步表明，麝香保心丸可明顯降低大鼠力竭運動時血清和心肌中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP的水平，對力竭運動時具有防治心肌損傷和保護心臟功能作用。

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Influence of Shexiangbaoxinwan on m yocardial injury markers and C-reactive protein after a single bout of exhaustive exercise in rats

CHEN Jin-liang1，LIU Zheng1，ZHANG Jing2，CHE Peng-cheng3，LIHai-jun1，LIFang1，LU Fan1，CHENG Qing-qiang1
（1.Department of Cardiology，No.281 Hospital of PLA，Qinhuangdao 066100，China；2.Department of Cardiology，People’s Hospital of Qinhuangdao City，Qinhuangdao，Hebei066000；3.Hebei University School of Medicine，Tangshan City，Hebei063000）

ObjectiveTo observe the influence of a Chinese traditionalmedicine，Shexiangbaoxinwan，on myocardial injurymarkers and C-reactive protein in exhaustively exercised rats.M ethodsA total of 52 male 11-12 week old Wistar ratswere divided randomly into two groups：the experimental（n=26）and controlgroups（n=26）.The two groups of rats took food and water freely.The experimental group of rats was given Shexiangbaoxinwan（2 capsules per day）for twoweeks.Following a single boutofexhaustive swimming（≥2 hrs），the serum andmyocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP in both groups were determined and compared.ResultsCompared with the control group，the exhaustive swimming time of the experimental group was significantly prolonged（P＜0.01）.The levels of serum andmyocardial CK，CKMB，TnT，BNP and CRP in the experimental group were significantly lower than those in the control group（P＜0.05 for all）.ConclusionsThe Chinese traditionalmedicine Shexiangbaoxinwan can significantly decrease the levels of rat serum and myocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after a single boutof exhaustive swimming，and car alleviatemyocardial injury.

Chinese medicine，Shexiangbaoxinwan；Rat；Exhaustive swimming；Myocardium injury，markers；C-reactive protein

Q95-33

A

1005-4847（2015）05-0509-04

10.3969/j.issn.1005ˉ4847.2015.05.013

2015-04-13

河北省科學(xué)技術(shù)發(fā)展計劃項目（編號：112761169）。

陳金良（1965ˉ），男，主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士。研究方向：冠心病治療。E-mail：cjl281yy@163.com