肖鳳春 張春麗 方 蓉 毛玉萍 倪桂寶

P-STAT3和FHIT在卵巢上皮性腫瘤的表達及相關(guān)性研究

肖鳳春 張春麗 方 蓉 毛玉萍 倪桂寶

卵巢上皮性腫瘤；P-STAT3；FHIT；表達

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducer and activator of transcription，STATs）蛋白最早是20世紀90年代初在干擾素誘導(dǎo)的胞內(nèi)信號傳導(dǎo)過程研究中發(fā)現(xiàn)，隨著研究的不斷進展發(fā)現(xiàn)STATs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。而STAT3是STATs蛋白家族中最重要的成員，實體腫瘤中多表現(xiàn)STAT3的異常活化，p-STAT3是其磷酸活化形式，已有大量實驗[1]證實p-STAT3與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腫瘤、心血管系統(tǒng)等多種疾病的病理生理過程有著密切的關(guān)系。脆性組氨酸三聯(lián)體基因（fragile histidine triad，F(xiàn)HIT）是近年發(fā)現(xiàn)的一個抑癌基因，研究[2]顯示，F(xiàn)HIT基因能夠抑制部分腫瘤細胞的活性。本實驗使用免疫組織化學(xué)方法檢測卵巢上皮性腫瘤組織中p-STAT3和FHIT的表達，分析兩種蛋白的表達情況與卵巢上皮腫瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系及兩者的相關(guān)性，以探討它們在卵巢上皮性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中所起到的作用。

1 材料與方法

1.1 病例和組織標本選取 選取2004年1月—2014年6月初次手術(shù)且有完整的臨床及病理資料的卵巢上皮性腫瘤患者的存檔石蠟塊，患者術(shù)前均未行化療、放療或生物治療。所有標本均重新切片由病理醫(yī)生HE染色確診；卵巢癌組織學(xué)分型參照WHO分型標準[3]，確診為卵巢上皮性腫瘤，其中卵巢癌40例，卵巢交界性腫瘤20例，卵巢良性腫瘤20例。卵巢癌根據(jù)組織學(xué)分化程度[3]，分為高分化12例和低分化28例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例。

1.2 免疫組織化學(xué)方法檢測 p-STAT3和FHIT的表達采用過氧化酶標記的鏈霉卵白素（S-P）免疫組織化學(xué)方法，經(jīng)脫蠟、水化，抗原修復(fù)，滴加過氧化物酶阻斷試劑，滴加第一抗體，滴加生物素標記的二抗，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水、透明、封固等。

1.3 免疫組化染色結(jié)果半定量分析[4]染色結(jié)果判斷p-STAT3定位于惡性腫瘤細胞和部分血管內(nèi)皮細胞的胞核，F(xiàn)HIT定位于細胞的胞漿。染色強度：無著色是0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。高倍鏡下每個視野計數(shù)100個細胞的陽性細胞數(shù)作為陽性程度的判斷標準：10%以下0分，10%～50%為1分，50%～75%為2分，75%以上為3分。綜合評定結(jié)果為染色強度和染色陽性細胞的乘積，＜3分陰性，≥3分陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，采用Spearman等級相關(guān)分析p-STAT3和FHIT表達的相關(guān)性，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

p-STAT3在上皮性卵巢癌中的陽性表達率為80%，高于交界性腫瘤的60%及良性腫瘤的10%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。FHIT在上皮性卵巢癌中的陽性表達率為32.5%，低于交界性腫瘤的50%及良性腫瘤的75%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 三組卵巢組織p-STAT3和FHIT表達比較［例（%）］

p-STAT3在低分化卵巢癌患者的陽性表達率為89.3%，高于高分化卵巢癌患者的58.3%，在卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的陽性表達率為90.3%，高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的44.4%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。FHIT在低分化卵巢癌患者陽性表達率為17.9%，低于高分化卵巢癌患者的66.7%，在卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的陽性表達率為19.4%，低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的77.8%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 卵巢癌組織p-STAT3和FHIT陽性表達與臨床病理特征的關(guān)系［例（%）］

p-STAT3和FHIT蛋白在卵巢癌中的表達存在顯著負相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

表3 卵巢癌組織p-STAT3和FHIT表達的相關(guān)性

3 討論

卵巢癌早期癥狀無特異性，并且易于轉(zhuǎn)移和廣泛播散，是威脅女性生命的常見婦科惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率呈上升趨勢。癌癥是一種與基因相關(guān)的疾病，致癌基因的激活和抑癌基因的失活，可使細胞生長和分化的調(diào)節(jié)失控，導(dǎo)致細胞基因突變，細胞異常增生而發(fā)生癌變[4]。因此，研究上皮性卵巢癌發(fā)生的分子機制，對早期診斷卵巢癌及尋找新的有效的治療靶點有重大的現(xiàn)實意義。

STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路存在于不同類型的細胞和組織中，參與細胞的生長、凋亡、惡變等過程的調(diào)控。激活后的p-STAT3以同源或異源二聚體形式移位到胞漿，在靶基因的啟動區(qū)與特定的DNA元件結(jié)合，發(fā)揮其生物學(xué)活性[5]。研究[1]表明，細胞內(nèi)外的刺激均可以激活STAT3，在生理情況下，p-STAT3信號通路的激活是暫時性的，并處于嚴密調(diào)控之中。在各種致瘤信號的刺激下，p-STAT3被持續(xù)活化、恒定表達，將來自各種途徑的腫瘤性酪氨酸激酶信號進行整合，調(diào)控目標靶基因的轉(zhuǎn)錄，參與細胞的惡性轉(zhuǎn)化，促進腫瘤的增殖和浸潤轉(zhuǎn)移，因此，p-STAT3被認為是一種致癌基因，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。目前已發(fā)現(xiàn)多種腫瘤細胞系及人的癌變組織中存在著STAT3的組成性激活，因此通過阻斷STAT3信號通路可以抑制腫瘤細胞生長并且誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，從而為惡性腫瘤的基因治療提供了一個理想的候選靶目標[6-7]。本研究發(fā)現(xiàn)，p-STAT3在卵巢癌表達高達80%，在低分化卵巢癌患者和卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達率分別為89.3%、90.3%，均明顯高于良性腫瘤及交界性腫瘤組的表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與文獻報道的結(jié)果一致。提示p-STAT3在卵巢癌組織中呈高活化，同時p-STAT3的表達與腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。

抑癌基因的失活也與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切有關(guān)，F(xiàn)HIT是近年來分離出的一種重要的脆性位點抑癌基因，在正常上皮細胞如卵巢、肺等中可檢測到高水平的FHIT mRNA及FHIT蛋白的表達，F(xiàn)HIT基因敲除小鼠的淋巴組織、肝臟、睪丸、胃及小腸均出現(xiàn)了腫瘤，證實了該基因具有抑制多個系統(tǒng)腫瘤形成的功能[8]。綜合目前的研究，F(xiàn)HIT基因在人類大部分的上皮性腫瘤組織中（如肺癌、宮頸癌、乳腺癌等）表達降低或缺失，且與多種腫瘤預(yù)后、復(fù)發(fā)相關(guān)，希望為卵巢癌的發(fā)病機理研究、預(yù)后判斷提供新的指標[4，9-10]。Ozaki等[11]分析44例卵巢癌、19例卵巢交界性腫瘤和16例良性腺瘤的FHIT蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)14%的卵巢癌有FHIT蛋白表達缺失或顯著減少，而在卵巢交界性癌和良性腺瘤中未發(fā)現(xiàn)減少，并且FHIT蛋白表達異常大多在低分化的卵巢癌中。本研究顯示FHIT在卵巢癌組患者表達僅32.5%，且在低分化卵巢癌患者（17.9%）和卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（19.4%）的表達率降低，均明顯低于良性患者及交界性腫瘤患者的表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示FHIT在卵巢癌組織中呈低表達，同時隨著卵巢癌分化程度的降低或出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時，F(xiàn)HIT表達呈顯著下降趨勢。

STAT3和FHIT均參與了卵巢癌細胞周期調(diào)控和細胞凋亡，而兩者生物學(xué)效應(yīng)相反，本研究中發(fā)現(xiàn)，p-STAT3和FHIT在腫瘤中的表達存在顯著負相關(guān)（P＜0.05），推測兩者可能在作用機制上存在某種聯(lián)系，并且隨著腫瘤惡性程度的增加，p-STAT3表達增高，而FHIT表達減低。綜上可見p-STAT3和FHIT在卵巢腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，運用免疫組化法聯(lián)合檢測p-STAT3和FHIT蛋白的表達簡單易行，有助于提高上皮性卵巢癌早期診斷的準確性和客觀性，對上皮性卵巢癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及早期預(yù)后評估有一定指導(dǎo)意義。

［1］Avalle L，Pensa S，Regis G，et al.STAT1 and STAT3 in tumorigenesis：A matter of balance［J］.Jakstat，2012，1（2）：65-72.

［2］Miyawaki Y，Kawachi H，Ooi A，et al.Genomic copy-num ber alterations of MYC and FHIT genes are associated with survival in esophageal squamous-cell carcinoma［J］.Cancer Sci，2012，103（8）：1558-1566.

［3］Kurman RJ，Carcangiu ML，Herrington CS，et al.WHO classification of tumours of female reproductive organs［M］.4th Edition，Lyon：IARC，2014：12-40.

［4］吳春，郭慶，劉琦，等.卵巢漿液性腺癌中FHIT的表達及意義［J］.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2013，29（3）：261-264.

［5］Cai L，Zhang G，Tong X，etal.Growth inhibition of human ovarian cancer cells by blocking STAT3 activation with small interfering RNA［J］.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2010，148（1）：73-80.

［6］Min H，Wei-hong Z.Constitutive activation of signal transducer and activator of transcription 3 in epithelial ovarian carcinoma［J］.J Obstet Gynaecol Res，2009，35（5）：918-925.

［7］Ji T，Gong D，Han Z，et al.Abrogation of constitutive Stat3 activity circumvents cisplatin resistant ovarian cancer［J］. Cancer Lett，2013，341（2）：231-239.

［8］Fujishita T，Doi Y，Sonoshita M，etal.Developmentof spontaneous tumours and intestinal lesions in Fhit gene knockout mice［J］.Br JCancer，2004，91（8）：1571-1574.

［9］Kujan O，Tarakji B，Thakker N，etal.The expression of FHIT in salivary carcinoma ex pleomorphic adenoma［J］.Anticancer Res，2012，32（8）：3147-3152.

［10］張爽，王艷，劉靜蕾，等.FHIT和Livin在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義［J］.實用腫瘤學(xué)雜志，2011，25（2）：136-140.

［11］Ozaki K，Enomoto T，Yoshino K，et al.Impaired FHIT expression characterizes serous ovarian carcinoma［J］.Br J Cancer，2001，85（2）：247-254.

（收稿：2015-03-31 修回：2015-05-11）

浙江省中醫(yī)藥大學(xué)校級課題項目（No.201111）

浙江省中醫(yī)院病理科（杭州 310006）

肖鳳春，E-mail：longrch@163.com