石鋒

胸腺瘤是常見的縱隔腫瘤，一般位于前上縱隔，被認(rèn)為是胸腺上皮腫瘤。胸腺瘤具有局部浸潤(rùn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等特性，但其屬于低度惡性或者潛在惡性腫瘤[1]。由于其發(fā)病率低且經(jīng)常伴隨自身免疫疾病以及其他系統(tǒng)病變，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，故在其病因、病理分類、臨床分期、治療方案等諸多方面一直存在爭(zhēng)議。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法探討癌基因c-myc及抑癌基因PTEN在胸腺瘤組織中的表達(dá)，結(jié)合Masaoka分期以及WHO分型，研究其在胸腺瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用、其與胸腺瘤臨床病理學(xué)特征的關(guān)系以及二者在胸腺瘤組織中表達(dá)的相關(guān)性，期望為臨床診斷和治療胸腺瘤提供理論依據(jù)，現(xiàn)具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2001年1月-2012年1月本院45例患者的胸腺瘤切除標(biāo)本存檔蠟塊作為研究材料，所選患者中男26例，女l9例，年齡20~72歲，平均43.4歲。非侵襲性胸腺瘤（I期）17例（非侵襲性組）；侵襲性胸腺瘤28例（侵襲性組），其中Ⅱ期11例，Ⅲ期14例，Ⅳ期3例。良性或低度惡性胸腺瘤14例（良性組），其中A型5例，AB型9例；惡性胸腺瘤31例（惡性組），其中B1型8例，B2型11例，B3型12例。取同期16例非腫瘤胸腺組織作為對(duì)照組。

1.2 分期及分型標(biāo)準(zhǔn) 按Masaoka臨床分期標(biāo)準(zhǔn)[2]，非侵襲性胸腺瘤為Masaoka臨床分期I期，侵襲性胸腺瘤為Masaoka臨床分期Ⅱ~Ⅳ期。按世界衛(wèi)生組織（WHO）病歷分型標(biāo)準(zhǔn)[3]，A型、AB型為WHO分型之良性或低度惡性胸腺瘤，B1~B3為WHO分型之惡性胸腺瘤。

1.3 方法 全部標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，所有蠟塊制成4 μm厚的連續(xù)切片3張，2張行免疫組化染色，1張行HE染色復(fù)核診斷。試驗(yàn)用鼠抗人c-myc單克隆抗體、SP試劑盒均購(gòu)買于福州邁新公司。鼠抗人PTEN單克隆抗體購(gòu)買于北京中山公司。應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法，檢測(cè)c-myc及PTEN基因在胸腺瘤中的表達(dá)。

1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 c-myc基因 光鏡分析，在排除非特異性染色等干擾的前提下，細(xì)胞核或細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕褐色、棕黃色、黃色顆粒的標(biāo)記為陽(yáng)性。在400倍視野下連續(xù)選擇10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞無陽(yáng)性反應(yīng)為（-），陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占1%~25%為（+），26%~50%為（++），>50%為（+++）。

1.4.2 PTEN基因 陽(yáng)性染色指在排除非特異性染色等干擾的前提下，光鏡下觀察細(xì)胞核或細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕褐色、棕黃色、黃色顆粒，而且背景清晰。PTEN蛋白定位于細(xì)胞核或細(xì)胞漿。每張切片在400倍視野下連續(xù)選擇10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。根據(jù)Wang等[4]和Simmons等[5]的方法，規(guī)定無明確陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞百分比<10%為陰性（-），陽(yáng)性細(xì)胞百分比在10%~25%為弱陽(yáng)性（+），陽(yáng)性細(xì)胞百分比在26%~50%為陽(yáng)性（++），陽(yáng)性細(xì)胞百分比>50%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胸腺瘤組與對(duì)照組c-myc及PTEN基因表達(dá)比較 胸腺瘤組c-myc基因陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組，PTEN基因陽(yáng)性表達(dá)率低于對(duì)照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見表1。

表1 胸腺瘤組與對(duì)照組c-myc及PTEN基因表達(dá)比較

2.2 不同惡性程度胸腺瘤c-myc及PTEN基因表達(dá)比較 惡性組c-myc基因陽(yáng)性表達(dá)率高于良性組，PTEN基因陽(yáng)性表達(dá)率低于良性組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 不同惡性程度胸腺瘤c-myc及PTEN基因表達(dá)比較

2.3 不同侵襲性胸腺瘤c-myc及PTEN基因表達(dá)比較 侵襲性組c-myc基因陽(yáng)性表達(dá)率高于非侵襲性組，PTEN基因陽(yáng)性表達(dá)率低于非侵襲性組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見表3。

表3 不同侵襲性胸腺瘤c-myc及PTEN基因表達(dá)比較

2.4 PTEN表達(dá)與c-myc表達(dá)的關(guān)系 c-myc與PTEN 關(guān) 聯(lián) 性 檢 驗(yàn) 字2=8.562，P=0.003<0.01， 顯 示PTEN基因表達(dá)與c-myc表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，Pearson列聯(lián)系數(shù)P=-0.436，見表4。

表4 PTEN表達(dá)與c-myc表達(dá)的關(guān)系 例

3 討論

c-myc于1982年首先被發(fā)現(xiàn)，是髓細(xì)胞性白血病病毒癌基因V-myc的細(xì)胞同系物，隨后被發(fā)現(xiàn)它的“癌基因化”在人類Burkit's淋巴瘤及多種動(dòng)物和人類腫瘤中起著關(guān)鍵作用[6]。人類c-myc基因定位于染色體8q24（8號(hào)染色體長(zhǎng)臂的2區(qū)4帶），由3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子組成。c-myc是一個(gè)重要的癌基因，與細(xì)胞的持續(xù)增殖關(guān)系密切，在腫瘤發(fā)生過程中起重要作用，近來研究表明，c-myc基因作為一個(gè)經(jīng)典的促癌蛋白參與細(xì)胞增殖、分化、衰老、凋亡和轉(zhuǎn)化[7]。胡茜等[8]研究發(fā)現(xiàn)c-myc蛋白在宮頸癌組織中的陽(yáng)性率56.9%，而在正常宮頸組織中的陽(yáng)性率為25.0%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Hirano等[9]用鼠白血病病毒A8感染小鼠7周，發(fā)現(xiàn)小鼠被誘導(dǎo)形成胸腺瘤，采用DNA印跡的方法檢測(cè)出小鼠體內(nèi)存在過表達(dá)的c-myc mRNA，說明上調(diào)的c-myc在胸腺瘤的形成中發(fā)揮重要作用。c-myc在人胸腺瘤中的表達(dá)國(guó)內(nèi)已有報(bào)道：黃壯士等[10]研究顯示c-myc在胸腺瘤中表達(dá)的陽(yáng)性率為63.4%，而在非瘤胸腺組織中的表達(dá)16.7%，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。本研究顯示，c-myc在胸腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為68.9%（31/45），而在對(duì)照組中的表達(dá)率為18.8%（3/16），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），結(jié)果表明過表達(dá)的c-myc基因參與了胸腺瘤的發(fā)生、發(fā)展。c-myc在Masaoka Ⅰ期胸腺瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為41.2%（7/17），而在具有侵襲性的Ⅱ~Ⅳ期胸腺瘤組織中的表達(dá)率為85.7%（24/28），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明c-myc的表達(dá)與胸腺瘤的侵襲性有關(guān)。c-myc在惡性胸腺瘤中陽(yáng)性表達(dá)率為80.6%（25/31），在A型和AB型胸腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為42.9%（6/14），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示c-myc表達(dá)與胸腺瘤的惡性程度有關(guān)，檢測(cè)c-myc將有助于胸腺瘤良惡性及侵襲性的判斷。

PTEN基因位于染色體10q23.3（10號(hào)染色體長(zhǎng)臂的2區(qū)3帶3亞帶），包括9個(gè)外顯子，8個(gè)內(nèi)含子，全長(zhǎng)200 kb，含1209個(gè)核苷酸。PTEN基因是迄今發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因，它對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路的調(diào)控起關(guān)鍵作用，PTEN蛋白具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞周期進(jìn)展，抑制細(xì)胞遷移、鋪展和局部粘附等多種生理功能。大量實(shí)驗(yàn)資料證明PTEN與細(xì)胞增殖呈負(fù)相關(guān)，PTEN基因突變或缺失可導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖，導(dǎo)致組織的惡變。國(guó)外已有研究表明，PTEN的缺失和突變與人類的許多腫瘤有關(guān)[11-13]。李冰[14]研究發(fā)現(xiàn)PTEN基因與肝癌的發(fā)生和發(fā)展以及進(jìn)展有密切的聯(lián)系，且組織的分化程度越高，PTEN的表達(dá)率也就越高，提示肝癌的發(fā)生可能與PTEN基因失活有關(guān)；管建云等[15]在研究PTEN與膀胱尿路腫瘤關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)：PTEN在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織和正常膀胱黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別是46.77%和100%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；且膀胱癌細(xì)胞分化程度越差，臨床分期越高，PTEN陽(yáng)性表達(dá)率就越低，比較差異有顯著性（P<0.05）。提示膀胱尿路上皮細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展與PTEN的表達(dá)缺失有關(guān)。本研究顯示，PTEN在對(duì)照組（非瘤胸腺組織）中陽(yáng)性表達(dá)率為93.8%（15/16），在胸腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為53.3%（24/45），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。說明PTEN的突變或缺失參與了胸腺瘤的發(fā)生。PTEN在惡性胸腺瘤中陽(yáng)性表達(dá)率為41.9%，在良性胸腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為78.6%，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示PTEN表達(dá)與胸腺瘤的惡性程度有關(guān)。在具有侵襲性的Ⅱ~Ⅳ期胸腺瘤中PTEN陽(yáng)性表達(dá)率為35.7%，而PTEN在非侵襲性胸腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為82.4%，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示PTEN表達(dá)與胸腺瘤的侵襲性有關(guān)。與國(guó)內(nèi)相關(guān)研究結(jié)果一致[16-17]。Lilja等[18]研究發(fā)現(xiàn)，PTEN基因在鼠胚胎的成纖維細(xì)胞中能通過調(diào)節(jié)ras和c-myc基因從而抑制腫瘤的惡性行為。相關(guān)性分析顯示，c-myc與PTEN在胸腺瘤中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P<0.01），Pearson列聯(lián)系數(shù)為P=-0.436，提示癌基因c-myc及抑癌基因PTEN可能共同參與胸腺瘤的發(fā)生、發(fā)展，二者存在協(xié)同作用。

綜上所述，人類腫瘤的發(fā)生是多種癌基因、抑癌基因協(xié)同作用的結(jié)果，包括癌基因的激活和抑癌基因的失活或突變等；本組資料顯示，在胸腺瘤組織中存在c-myc基因過表達(dá)及PTEN基因失活，且c-myc基因與PTEN基因在胸腺瘤組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。提示c-myc和PTEN基因在胸腺上皮細(xì)胞惡變過程中起協(xié)同作用，可能共同影響著胸腺瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。二者的聯(lián)合檢測(cè)將有助于胸腺瘤良惡性及侵襲性的判斷，并將為開發(fā)新的抗瘤藥物和尋找新的基因治療的靶基因提供線索和思路。

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