陳冉靜,曹 磊,林 彬,鄢 碩,郭曉強(qiáng),茍小軍,*

(1.西華大學(xué)生物工程學(xué)院,四川成都 610039;2.成都大學(xué)藥食同源植物資源開(kāi)發(fā)四川省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川成都 610106;3.成都大學(xué)生物產(chǎn)業(yè)學(xué)院,四川成都 610106;4.成都大學(xué)醫(yī)護(hù)學(xué)院,四川成都 610106)

油橄欖果汁對(duì)小鼠焦慮和抑郁行為的影響

陳冉靜1,2,曹 磊2,4,林 彬2,4,鄢 碩2,4,郭曉強(qiáng)2,3,茍小軍2,3,*

(1.西華大學(xué)生物工程學(xué)院,四川成都 610039;2.成都大學(xué)藥食同源植物資源開(kāi)發(fā)四川省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川成都 610106;3.成都大學(xué)生物產(chǎn)業(yè)學(xué)院,四川成都 610106;4.成都大學(xué)醫(yī)護(hù)學(xué)院,四川成都 610106)

目的:評(píng)價(jià)油橄欖果汁對(duì)小鼠焦慮和抑郁行為的影響。方法:以油橄欖果汁濃縮物作為實(shí)驗(yàn)材料。選用雄性KM小鼠隨機(jī)平均分成陰性、陽(yáng)性、高、中和低劑量組,連續(xù)7d灌胃給藥,觀測(cè)對(duì)小鼠高架十字迷宮行為實(shí)驗(yàn)、小鼠開(kāi)場(chǎng)行為實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的影響。結(jié)果:果汁濃縮物在10.0g/kg劑量的亞急性條件下有穩(wěn)定而顯著的抗焦慮效果(p<0.05),在5.0g/kg劑量下,對(duì)小鼠的焦慮行為也有顯著干預(yù)(p<0.05)。果汁能夠降低小鼠在強(qiáng)迫游泳環(huán)境下的不動(dòng)行為,但這種抗抑郁效應(yīng)水平還不顯著(p>0.05)。 結(jié)論:在亞急性給藥條件下,油橄欖果汁能夠誘導(dǎo)小鼠的抗焦慮行為,同時(shí)也有潛力可以改善小鼠的抑郁狀態(tài)。

油橄欖果汁,焦慮,抑郁

據(jù)世界衛(wèi)生組織公布,全球約四億人患有抑郁等情感障礙,我國(guó)情感障礙癥患者占總?cè)丝诘?%至8%,由此每年造成直接、間接經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)600億元人民幣[1-3]。目前主流的學(xué)界觀點(diǎn)認(rèn)為,情感障礙是一種綜合癥,其發(fā)病機(jī)制涉及多個(gè)生理系統(tǒng),特別是神經(jīng)遞質(zhì)和氧化應(yīng)激傷害等[3-5]。而目前臨床上使用的抗抑郁藥物,都是針對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)發(fā)揮作用的,不僅起效緩慢,而且伴隨著嚴(yán)重的藥物-癥狀不同步效應(yīng),個(gè)體間藥效反應(yīng)差異大[4-7]。利用具有抗氧化性作用的成分來(lái)干預(yù)情感障礙過(guò)程中的氧化應(yīng)激狀態(tài),是一種篩選治療情感障礙藥物的思路[7]。

抗焦慮和抗抑郁藥物的動(dòng)物篩選手段主要依賴于多種經(jīng)典的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)廣泛應(yīng)用于檢測(cè)動(dòng)物的焦慮行為特征和評(píng)價(jià)藥物的抗焦慮藥效[8-10],以小鼠在開(kāi)臂中的滯留時(shí)間和開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)比例反映其在迷宮中的焦慮狀態(tài)的強(qiáng)弱。開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)也是評(píng)價(jià)焦慮行為的一種方法,當(dāng)動(dòng)物處于陌生環(huán)境中的時(shí)候,其行為策略可以分解為驅(qū)向于四角的安全區(qū)域運(yùn)動(dòng)和向中心的開(kāi)放區(qū)域運(yùn)動(dòng),而中心區(qū)域的運(yùn)動(dòng)時(shí)間與焦慮狀態(tài)負(fù)相關(guān)[11]。強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)是經(jīng)典抗抑郁藥物篩選手段,以一動(dòng)不動(dòng)時(shí)間反應(yīng)是絕望抑郁行為[12-13]。

油橄欖屬木犀科、木犀欖、常綠喬木,是世界著名木本油料兼果用樹(shù)種[14-17]。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),其中含有大量的多酚類物質(zhì),尤其是齊墩果甙和羥基酪醇在動(dòng)物水平和體外水平研究中表現(xiàn)出抗氧化活性[18-21]。

為了評(píng)估含有抗氧化活性物質(zhì)的油橄欖果汁是否具有改善情感障礙的功效。本文以小鼠作為研究對(duì)象,通過(guò)經(jīng)典的抗焦慮和抑郁行為實(shí)驗(yàn),評(píng)估油橄欖果汁作為改善情感障礙功能性成分的潛力。為利用油橄欖果汁用于改善情緒障礙疾病提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

油橄欖果汁提取物 本實(shí)驗(yàn)室制備;甲醇、磷酸和氯化鈉均為分析純 成都市科龍化工試劑廠;丙咪嗪(Imipramine)、地西泮(Diazepam)(純度均為98%) Sigma Co;羥基酪醇標(biāo)準(zhǔn)品 中國(guó)科學(xué)院植物研究所;雄性KM小鼠(25±2)g 四川省動(dòng)物研究所,動(dòng)物飼喂的環(huán)境處于12h白-晝循環(huán)(08:00am開(kāi)燈),(23±2)℃溫度和55%±10%濕度控制下,動(dòng)物可以自由攝取食物。

JE25C21型美的傳統(tǒng)榨汁機(jī) 廣東美的生活電器制造有限公司;GL-21M型高速冷凍離心機(jī) 長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司;RE-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵 浙江黃巖黎明實(shí)業(yè)有限公司;FD-IC-55型冷凍干燥機(jī) 北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;2XZ-4型旋片真空泵 溫嶺市速力電機(jī)廠;L-2000高效液相色譜儀 日立;UPT優(yōu)普特實(shí)驗(yàn)室超純水器 成都超純科技有限公司;TM-Vision行為分析系統(tǒng) 成都泰盟公司。

1.2 藥品準(zhǔn)備及動(dòng)物分組

丙咪嗪、地西泮給藥劑量分別為20mg/kg和2.5mg/kg,分別于實(shí)驗(yàn)前30min經(jīng)口灌胃給小鼠,給藥體積為10mL/kg。油橄欖果汁濃縮物分為2.5、5.0g/kg和10.0g/kg三個(gè)劑量組,經(jīng)口灌胃,給藥體積為10mL/kg,小鼠接受連續(xù)7天的灌胃給藥。對(duì)照組一律采用生理鹽水作為陰性對(duì)照成分。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 油橄欖果汁的制備 油橄欖果經(jīng)榨汁機(jī)榨汁后,于3000r/min,10min冷凍離心除去殘?jiān)?經(jīng)低溫濃縮,最后真空冷凍干燥得油橄欖果汁提取物干粉。

1.3.2 羥基酪醇含量測(cè)定 HPLC檢測(cè)方法,采用外標(biāo)法,以羥基酪醇作為活性成分參照,流動(dòng)相為甲醇∶0.2%磷酸溶液=12∶88,C18柱,檢測(cè)波長(zhǎng)230nm(DAD檢測(cè)器)。

1.3.3 油橄欖果汁對(duì)小鼠高架十字迷宮行為實(shí)驗(yàn)的影響 設(shè)高(10.0g/kg)、中(5.0g/kg)、低(2.5g/kg)三個(gè)劑量組,以生理鹽水組作為陰性對(duì)照組和地西泮(2.5mg/kg)組作為陽(yáng)性對(duì)照組,每組7只雄性KM小鼠。連續(xù)7天經(jīng)口灌胃給藥,于最后一次給藥24h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其中地西泮組動(dòng)物只在實(shí)驗(yàn)前30min一次性給藥。將動(dòng)物放置于高架十字迷宮的中心區(qū)域,使動(dòng)物的頭朝向開(kāi)臂處,使用TM-Vision行為分析系統(tǒng)分析5min動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡,統(tǒng)計(jì)其在開(kāi)臂中的時(shí)間比例和進(jìn)入的次數(shù)[8]。

1.3.4 油橄欖果汁對(duì)小鼠開(kāi)場(chǎng)行為實(shí)驗(yàn)的影響 給藥方式同1.3.3,最后一次給藥24h后,將KM小鼠放置于開(kāi)場(chǎng)活動(dòng)的中心區(qū)域,利用TM-Vision行為學(xué)分析系統(tǒng)記錄10min其在中心的運(yùn)動(dòng)時(shí)間和總運(yùn)動(dòng)距離,由此來(lái)判斷果汁濃縮物是否對(duì)由中樞神經(jīng)系統(tǒng)控制的KM小鼠自發(fā)活動(dòng)有影響。

1.3.5 油橄欖果汁對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的影響 給藥方式同1.3.3,陽(yáng)性對(duì)照組采用丙咪嗪(20mg/kg),最后一次給藥24h后,將小鼠放置于強(qiáng)迫游泳測(cè)試缸中,利用TM-Vision行為分析系統(tǒng)分析其在6min的最后4min里面的一動(dòng)不動(dòng)的時(shí)間[12]。

1.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析 所有數(shù)據(jù)都采用Mean±SEM形式表示。均值的組間差異采用one-way AN-OVA分析,post hoc采用LSD檢驗(yàn)。p<0.05被規(guī)定為有顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 果汁中羥基酪醇的含量

經(jīng)HPLC外標(biāo)法測(cè)定,制備的油橄欖果果汁提取物的羥基酪醇含量純度為5mg/g。

2.2 油橄欖果汁對(duì)小鼠高架十字迷宮行為實(shí)驗(yàn)的影響結(jié)果

高架十字迷宮的結(jié)果如表1所示,小鼠在開(kāi)臂的滯留時(shí)間和開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)的比例可以反映小鼠焦慮行為的強(qiáng)弱。5.0g/kg劑量組小鼠在開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)上與對(duì)照組有顯著增加(p<0.05),而10.0g/kg組和地西泮陽(yáng)性對(duì)照組小鼠在開(kāi)臂滯留時(shí)間(p<0.05)和開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)比例(p<0.05),結(jié)果均顯著高于生理鹽水的陰性對(duì)照組。

小鼠在開(kāi)臂中的滯留時(shí)間和開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)比例反映了其在迷宮中的焦慮狀態(tài)的強(qiáng)弱,而經(jīng)典的抗焦慮藥物地西泮相對(duì)于陰性對(duì)照組能夠顯著(p<0.05)增加小鼠在開(kāi)臂的滯留時(shí)間和開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)的比例[11]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,10.0g/kg劑量橄欖果汁在高架十字迷宮測(cè)試中與陰性對(duì)照組相比,能夠穩(wěn)定而顯著地(p<0.05)減少小鼠的焦慮行為。在5.0g/kg劑量下,果汁雖然均增加了小鼠開(kāi)臂滯留時(shí)間和進(jìn)入次數(shù)比例,但是只有開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)比例的結(jié)果相對(duì)于陰性對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。這可能是因?yàn)楣目菇箲]作用存在劑量依賴性,其誘導(dǎo)出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的抗焦慮劑量很可能比5.0g/kg稍高。

表3 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=7,mean±SEM)

表1 小鼠高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=7,mean±SEM)

注:*表示與陰性對(duì)照組比較,p<0.05，表2、表3同。

2.3 油橄欖果汁對(duì)小鼠開(kāi)場(chǎng)行為的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果

開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果如表2所示,在開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中三個(gè)劑量的果汁相對(duì)于陰性對(duì)照組均增加了小鼠在中心區(qū)域滯留時(shí)間,但是并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)我們可以看到陽(yáng)性藥物地西泮卻能顯著的增加中心區(qū)域的滯留時(shí)間(p<0.05)。

開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中,中心滯留時(shí)間反映小鼠的焦慮狀態(tài),而總運(yùn)動(dòng)距離反映小鼠的運(yùn)動(dòng)功能[9-11]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,果汁在三個(gè)劑量下均增加了小鼠在中心區(qū)域滯留時(shí)間,但是這種效應(yīng)同陰性對(duì)照組相比較并未達(dá)到具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異水平,同時(shí)果汁不會(huì)顯著增加小鼠的自發(fā)活動(dòng)距離。說(shuō)明果汁對(duì)小鼠開(kāi)場(chǎng)中的焦慮行為的作用效果較弱,并且也沒(méi)有顯著的中樞興奮作用。

表2 小鼠開(kāi)場(chǎng)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=7,mean±SEM)

2.4 油橄欖果汁對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的影響結(jié)果

強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示,果汁在三個(gè)劑量下均降低了小鼠的一動(dòng)不動(dòng)時(shí)間,但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)其原理基于,小鼠處于一個(gè)不可逃避的狹窄容器之中游泳,其游泳行為會(huì)從起初的激烈掙扎逐漸轉(zhuǎn)換到浮在水面不動(dòng),或者只保持頭部露出水面的輕微滑動(dòng)。這種不動(dòng)的狀態(tài)是一種絕望行為,是小鼠通過(guò)游泳獲知其不可能逃避此種環(huán)境而放棄這種努力的行為,而抗抑郁藥能夠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中顯著的減少這種一動(dòng)不動(dòng)的狀態(tài)[12-13]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明在當(dāng)前劑量下,果汁不能像丙咪嗪一樣顯著降低小鼠的不動(dòng)行為,表現(xiàn)出抗抑郁效應(yīng)。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在亞急性給藥條件下,油橄欖果汁能夠誘導(dǎo)小鼠的抗焦慮行為,同時(shí)也有潛力可以改善小鼠的抑郁狀態(tài)。同時(shí)個(gè)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異尚未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義水平,可能是由于果汁在最大給藥量(10g/kg)情況下其多酚物質(zhì)諸如羥基酪醇的含量仍然較低而亞急性給藥的周期又不夠長(zhǎng)所致[2,6,21]。例如臨床所用的抗抑郁和抗焦慮藥物往往起效時(shí)間都在一個(gè)月以上[1,5-6]。

綜上所述本文證明油橄欖果汁在亞急性條件下能夠誘導(dǎo)小鼠的抗焦慮行為,同時(shí)也有潛力可以改善小鼠的抑郁狀態(tài)。為油橄欖果汁用于緩解情感障礙等心理問(wèn)題提供了參考依據(jù)。

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Effect of the olive juice on the anxiety and depression behavior in mice

CHEN Ran-jing1,2,CAO Lei2,4,LIN Bin2,4,YAN Shuo2,4,GUO Xiao-qiang2,3,GOU Xiao-jun2,3,*

(1.College of Bioengineering,Xihua University,Chengdu 610039,China;2.Key Laboratory of Medicinal and Edible Plants Resources Development of Sichuan Education Commission,Chengdu University,Chengdu 610106,China;3.School of Biotechnology Industry,Chengdu University,Chengdu 610106,China;4.School of Medicine and Nursing,Chengdu University,Chengdu 610106,China)

Objective:To investigate the effect of the olive juice on the anxiety and depression behavior in mice. Methods:Concentrated olive juice was selected as experimental materials. Male KM mice were randomly divided into negative,positive,high,medium and low-dose group for 7d administration. The behavioral tests including elevated plus maze test,open field test and forced swimming test were done after administration of drugs. Results:Concentrated olive Juice indicated anxiolytic effect at 10.0g/kg and 5.0g/kg dose group significantly(p<0.05). Juice reduced immbolity in the forced swim test in mice,but the antidepressant effect level had no significance(p>0.05). Conclusions:After sub-acute administration,olive juice could induce anxiolytic-like effect behavior in mice,but also had the potential to ameliorate depression in mice.

olive juice;anxiety;depression

2014-07-10

陳冉靜(1988- )，女，碩士，主要從事功能性食品的研究與開(kāi)發(fā)。

*通訊作者:茍小軍(1974-)，男，博士，教授，研究方向：功能性食品的研究與開(kāi)發(fā)。

藥食同源植物資源開(kāi)發(fā)四川省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金項(xiàng)目(10Y201405)。

TS201.4

A

1002-0306(2015)07-0351-04

10.13386/j.issn1002-0306.2015.07.065