王 真

(江蘇省南京江寧區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 南京 210000)

參一膠囊對非小細胞肺癌外周淋巴細胞表型的影響及其機制探討

王 真

(江蘇省南京江寧區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 南京 210000)

目的 觀察參一膠囊治療化療后非小細胞肺癌(脾氣虛證)的臨床療效。方法 將60例化療后非小細胞肺癌患者隨機分為治療組30例和對照組30例。對照組給予西醫(yī)常規(guī)治療，治療組在對照組的基礎(chǔ)上加用參一膠囊口服，療程為2個月，比較2組臨床療效，并記錄藥物不良反應(yīng)。結(jié)果 與對照組及健康對照組相比，參一膠囊可有效調(diào)節(jié)化療后非小細胞肺癌外周淋巴細胞群落，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 參一膠囊對化療后非小細胞肺癌患者具有一定的正向免疫干預(yù)作用。

非小細胞肺癌；參一膠囊；免疫調(diào)節(jié)；外周淋巴細胞表型

免疫受損是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的核心。化療是目前抗腫瘤的治療的重要手段，但化療在殺傷腫瘤細胞的同時，會不可避免的造成免疫負應(yīng)答或免疫耐受。“養(yǎng)正積自除”古老的中醫(yī)理論與現(xiàn)代免疫不謀而合。隨著現(xiàn)代科學(xué)的進展，探索性的從分子、基因、細胞傳導(dǎo)等多層面認識中醫(yī)藥，更多體外實驗認為中藥、中藥活性成分、乃至復(fù)方成分具有一定免疫調(diào)節(jié)的作用，可改善免疫微環(huán)境，恢復(fù)機體免疫監(jiān)視機能[1-3]。

淋巴細胞表型(CD抗原)作為細胞表面標(biāo)記物，隨著病情的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸發(fā)生變化，是反映患者免疫功能的重要標(biāo)志。本研究入組化療后“脾氣虛”患者60例，口服參一膠囊，采用流式細胞儀技術(shù)分析化療后外周靜脈血中淋巴細胞亞群的百分率變化，以探討中藥對患者免疫機能的影響。

1 資料與方法

1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn) 所有患者經(jīng)組織學(xué)或細胞學(xué)診斷為非小細胞肺癌；化療后7 d，中醫(yī)辨證為脾氣虛之證(參照衛(wèi)生部藥政司頒布的《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》(2002版)制定，臨床表現(xiàn)為：腹部隱痛，納呆惡心，面色無華，神疲乏力，大便偏溏，舌質(zhì)淡，脈沉細)。4周期化療結(jié)束后，共入組60例患者。

1.2 一般資料 符合納入標(biāo)準(zhǔn)者60例，均為2012年3月—2014年3月在江蘇省人民醫(yī)院住院病人，出院后門診就診口服中藥治療。年齡范圍為42～75歲，中位年齡59歲。其中男37例，女23例。病理類型為腺癌49例、鱗癌11例。按隨機數(shù)字表法隨機分為對照組、治療組(中藥組)、每組30例。試驗結(jié)束時出去剔除病例和脫落病例，2組最終列入統(tǒng)計分析的病例分別為28例、28例，各組年齡、性別、臨床分期、病理類型等構(gòu)成均無統(tǒng)計學(xué)差異。此外，入組20例健康志愿者，男11例，女9例，平均年齡(54.05±7.83)歲，同對照組及實驗組其年齡及性別均無明顯差異。

2 治療方法

2.1 治療組 56例非小細胞肺癌患者隨機分為對照組及治療組，所有患者均為Ib-IIIA期，經(jīng)手術(shù)治療，病理及影像學(xué)證實無癌殘留；先行4周期術(shù)后輔助化療，培美曲塞聯(lián)合順鉑或卡鉑的方案化療。化療具體方案：培美曲塞500 mg/m2，第1 d靜脈滴注，化療前口服葉酸500 μg/d，至少5 d；化療前肌肉注射維生素B121000 μg，以后每3個療程1次，直至化療結(jié)束后3周；培美曲塞使用前1 d，用藥當(dāng)天，及第2 d連續(xù)口服地塞米松9 mg(分兩次)。順鉑25 mg/m2，第1、2、3 d靜脈滴注，卡鉑按曲線下面積(AUC=5)計算劑量，化療第1 d靜脈滴注。每21 d重復(fù)。最后1周期化療結(jié)束后，經(jīng)全身檢查(胸腹CT、腹部B超、骨掃描等)證實無癌復(fù)發(fā)或癌轉(zhuǎn)移。治療組在對照組治療的基礎(chǔ)上予口服參一膠囊(吉林長春亞泰制藥有限公司生產(chǎn)，批號：050623)，0.8 mg/kg，每日總量40-50 mg，分2次口服，持續(xù)服用2個月。

2.2 對照組 對照組化療后盡予西醫(yī)常規(guī)治療。

3 療效觀察

3.1 檢測方法 治療組及對照組于化療結(jié)束后7 d、化療結(jié)束后2月分別抽取患者外周靜脈血2mL。T細胞亞群檢測包括CD3+(T淋巴細胞)、CD4+(輔助/誘導(dǎo)T細胞)、CD8+(抑制/殺傷T細胞)、CD56+(NK細胞)和CD19+(B淋巴細胞)，檢測儀器為流式細胞儀(COUTER公司)。由直接免疫熒光標(biāo)記全血溶血法檢測：取不同熒光標(biāo)記的單克隆抗體各 20 μL，分別加入100 μL肝素抗凝的外周血，室溫下暗反應(yīng)15 min，加入細胞裂解液溶解紅細胞，將上述樣管逐個放在流式細胞儀上進行檢測。在直方圖中表示出淋巴細胞群，分別計算出6000個淋巴細胞中各陽性細胞的百分比。

4 治療結(jié)果

2組治療結(jié)果見表1。

表1 參一膠囊對60例非小細胞肺癌化療后患者外周

注：與健康對照組相比，*P<0.05；與治療組化療后7 d及對照組化療后67 d相比，#P<0.05

5 討 論

有研究表明免疫系統(tǒng)中不同細胞或因子可吞噬或直接殺滅腫瘤細胞，進而促使機體自身對抗腫瘤生長或擴散[4、5]。本研究證實通過2個月參一膠囊的治療，外周CD4、CD4/CD8、CD16及CD19細胞顯著升高，CD8降低，證實口服參一膠囊可提高淋巴細胞的免疫功能。在宿主對抗自身腫瘤細胞中，T淋巴細胞在免疫系統(tǒng)發(fā)揮重要作用。腫瘤的發(fā)生發(fā)展同細胞免疫功能密切相關(guān)，細胞免疫功能主要通過T淋巴細胞得以實現(xiàn)。CD3是總淋巴細胞的標(biāo)記，占外周淋巴細胞的60%～80%。CD3陽性的T細胞，又包含有兩種淋巴細胞包括CD4標(biāo)記及CD8標(biāo)記。本研究證實，CD4陽性標(biāo)記的T細胞升高，CD8陽性標(biāo)記的T細胞降低，也就是CD3標(biāo)記的總T淋巴細胞不會有顯著數(shù)目變化。

惡性腫瘤的生成及進展就是免疫抑制、免疫逃逸的過程，伴隨此過程，CD8淋巴細胞(又名抑制或殺傷T細胞)形成并逐漸成熟，同時也抑制CD4淋巴細胞的形成及成熟。CD8淋巴細胞分泌的活性因子可抑制免疫活性細胞的腫瘤殺傷功能，進而促進腫瘤細胞的生長及轉(zhuǎn)移。與此相反，CD4淋巴細胞可促進淋巴細胞的免疫活性，起到抗腫瘤的作用。CD8淋巴細胞同樣對CD4淋巴細胞起到常規(guī)抑制作用，故，CD4與CD8的比值可作為反映機體免疫功能的標(biāo)準(zhǔn)。CD16是自然殺傷細胞(NK細胞)的免疫標(biāo)記。NK細胞可在最初即殺傷腫瘤細胞，可控制腫瘤細胞的早起轉(zhuǎn)移[6]。NK細胞還是重要的免疫調(diào)節(jié)細胞，通過釋放淋巴細胞因子及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，進而調(diào)節(jié)機體免疫應(yīng)答，增強其他細胞及細胞因子的抗腫瘤功效。CD19幾乎標(biāo)記在所有常規(guī)B淋巴細胞的表面，構(gòu)成機體體液免疫功能。在本研究中通過參一膠囊的治療，CD19細胞顯著升高，說明參一膠囊不僅可增強T淋巴細胞，同樣通過調(diào)節(jié)B淋巴細胞，增強體液免疫的功效。

CD25同以白介素-2(IL-2)為媒介激活的淋巴細胞相關(guān)。本研究中，CD25淋巴細胞未見明顯變化。

綜上，可見患者在服用參一膠囊后，其免疫微環(huán)境得到有效改善，其機制可能為以下原因：促進T淋巴細胞的“非對稱增生”，調(diào)整T細胞亞群的分布，例如在CD4+細胞增殖的同時，CD8+細胞被抑制，至使CD4+/CD8+比例改變；可提高一些細胞因子水平，如IL-2、IL4、TNF-α等，促其發(fā)揮激活免疫細胞的功能，增強抗腫瘤免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)、效應(yīng)及維持作用；抑制Fas/FasL介導(dǎo)的機體T淋巴細胞凋亡；調(diào)節(jié)荷瘤機體局部微環(huán)境的免疫反應(yīng)，抑制調(diào)節(jié)性T細胞(Treg，CD4+CD25+)的免疫抑制作用；同時還可對髓系統(tǒng)的免疫抑制細胞(Myeloid-Drived Suppressor Cell，MDSC)起到一定的調(diào)節(jié)作用。

作為現(xiàn)代腫瘤免疫理論的新支撐，“免疫編輯”理論認為，免疫清除、免疫均衡、免疫重塑構(gòu)成腫瘤免疫的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，而中醫(yī)辨證強調(diào)整體觀念，從基因或分子的角度，某疾病或證候的出現(xiàn)，其實是基因(分子)群或基因(分子)網(wǎng)絡(luò)的失衡，各基因(分子)群或基因網(wǎng)絡(luò)以對立又依存的關(guān)系存在，這與中醫(yī)“陰陽平衡”不謀而合?！罢龤獯鎯?nèi)，邪不可干?！薄捌楹筇熘?，……主衛(wèi)?！边\化水谷精微，則正氣得以生成并輸布全身，肌肉腠理閉合，則外邪無以而入。脾是中醫(yī)免疫功能的重要臟器。有研究認為，在肺癌的中醫(yī)辨證中，與痰濕、血瘀等證相比，脾虛證的免疫功能更為薄弱[7]。脾虛證可能是腫瘤免疫抑制微環(huán)境的關(guān)鍵因素。健脾中藥為調(diào)節(jié)腫瘤宿主免疫微環(huán)境，干預(yù)腫瘤免疫編輯提供新思路。

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1007-2349(2015)07-0034-02

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