晏文強，謝明水，劉 楊

（湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬隨州醫(yī)院檢驗科，湖北隨州441300）

GP73、AFP－L3與GPC－3聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床價值

晏文強，謝明水，劉 楊＊

（湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬隨州醫(yī)院檢驗科，湖北隨州441300）

目的探討高爾基體蛋白73（GP73）、甲胎蛋白異質(zhì)體3（AFP－L3）和磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3（GPC－3）聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌（PHC）診斷中的臨床價值。方法 采用免疫組織化學(xué)法和酶聯(lián)免疫法檢測原發(fā)性肝癌（PHC組，n＝34例）、肝硬化（LC組，n＝25例）和病毒性肝炎（VH組，n＝27例）患者肝組織和血清GP73、AFP－L3和GPC－3的表達水平，同期選擇30例門診正常體檢者作為對照組。觀察各組肝組織和血清GP73、AFP－L3和GPC－3的表達水平，并比較GP73、AFP－L3和GPC－3單一和聯(lián)合檢測PHC的陽性率。結(jié)果 PHC組肝組織及血清AFP－L3、GP73和GPC－3表達水平均明顯高于其他各組（P＜0.05），3項標(biāo)志物（AFP－L3、GP73和GPC－3）單項檢測PHC的陽性率分別為70.6%、76.5%、79.4%，兩兩指標(biāo)聯(lián)合檢測PHC的陽性率可至82.3%、85.3%和88.2%，3項指標(biāo)聯(lián)合檢測PHC的陽性率可高達91.2%，明顯高于單項檢測率（P＜0.05）。結(jié)論 AFP－L3、GP73和GPC－3聯(lián)合檢測可提高PHC陽性率，對早期PHC診斷具有重要的臨床意義。

高爾基體蛋白73；甲胎蛋白異質(zhì)體3；磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3；原發(fā)性肝癌；病毒性肝炎；肝硬化

（Chin J Lab Diagn，2015，19：1651）

原發(fā)性肝癌（Primary hepatic carcinoma，PHC）是臨床較為常見的腫瘤性疾病，此疾病發(fā)展迅速，易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，多數(shù)患者醫(yī)院就診時已發(fā)展至疾病晚期階段，喪失治療的最佳時機。目前臨床多選擇實驗室檢測血清甲胎蛋白（Alpha fetoprotein，AFP）表達水平，以及聯(lián)合超聲探查肝臟病理改變等方法早期篩查PHC，但上述方法仍無法準確區(qū)別肝硬化結(jié)節(jié)與小肝癌，容易導(dǎo)致PHC誤診和漏診等情況發(fā)生［1］。目前有研究認為［2］，部分PHC患者由于肝癌細胞分化程度極差血清AFP表達水平呈較低水平，而部分慢性肝病患者由于肝細胞呈代償性增殖使得血清AFP明顯升高，上述情況均導(dǎo)致AFP檢測假陽性和假陰性等情況的發(fā)生，故單一采用AFP診斷PHC的靈敏性較差。因此本研究擬探討高爾基體蛋白73（GP73）、甲胎蛋白異質(zhì)體3（AFP－L3）和磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3（GPC－3）聯(lián)合檢測在PHC診斷中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬隨州醫(yī)院消化科、感染科及腫瘤科2010年7月至2013年7月期間住院治療的86例肝臟疾病患者作為研究對象，其中男50例，女36例，年齡范圍為34－60歲，平均年齡為（45.9±12.6）歲，根據(jù)肝臟疾病的類型不同將上述患者共分為3組，PHC組（原發(fā)性肝癌，n＝34例）、LC組（肝硬化，n＝25例）和VH組（病毒性肝炎，n＝27例），同期選擇30例在體檢中心檢查者作為研究對照組，其中男17例，女13例，年齡范圍為36－61歲，平均年齡為（47.5±11.2）歲。四組在各方面比較均無顯著性差異（P＞0.05）。

1.2 肝臟病理組織來源

病毒性肝炎組的肝組織源自部分擬行抗病毒治療的患者，肝硬化組的肝組織源自部分為確診代償期肝硬化患者，兩組標(biāo)本均為肝組織穿刺病理檢查而獲得，肝癌組織為手術(shù)切除腫瘤組織所獲得，患者均簽署知情同意書，本研究已通過院倫理委員會批準。

1.3 實驗試劑及儀器

AFP－L3親和吸附離心管購自北京熱景生物技術(shù)有限公司，GP73蛋白檢測試劑盒購自上海信裕生物科技有限公司，ELX800酶標(biāo)儀購自上海天呈醫(yī)流科技股份有限公司，全自動免疫分析儀購自廣州華粵行儀器有限公司，GPC3蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒購自美國BioMosaics公司，AFP－L3、GP73及GPC3抗體及配套試劑盒均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。

1.4 血清檢測方法及陽性標(biāo)準

根據(jù)實驗試劑盒操作說明書首先洗脫AFPL3，然后檢測血清AFP－L3和AFP表達水平，計算AFP－L3／AFP的比值，AFP－L3（%）＞15%視為陽性結(jié)果；采用ELISA法檢測血清GP73、GPC3表達水平，GP73＞100μg／ml、GPC3＞400ng／L均視為陽性結(jié)果。

1.5 免疫組化檢測

采用免疫組化法半定量檢測AFP－L3、GP73和GPC3蛋白的表達水平，細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒視為陽性細胞。采用相應(yīng)圖像分析軟件對每張組織切片進行分析，隨機選取5個視野，然后取其平均數(shù)值作為最終檢查結(jié)果。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

本研究數(shù)據(jù)資料均選擇SPSS13.0統(tǒng)計軟件予以分析，計量比較采取t檢驗，以P＜0.05表示有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 各組肝組織AFP－L3、GP73和GPC3表達水平比較

PHC組肝組織中AFP－L3、GP73和GPC3表達水平明顯高于其他組（P＜0.05），見圖A－C及表1。

表1 各組肝組織AFP－L3、GP73和GPC3表達水平比較

2.2 各組血清AFP－L3、GP73和GPC3表達水平比較

PHC組血清AFP－L3、GP73和GPC3表達水平明顯高于其他三組（P＜0.05），見表2。

表2 各組血清AFP－L3、GP73和GPC3表達水平比較

2.3 AFP－L3、GP73和GPC－3單一和聯(lián)合檢測PHC陽性率比較

3項標(biāo)志物（AFP－L3、GP73和GPC－3）單項檢測PHC的陽性率分別為70.6%、76.5%、79.4%，AFPL3、GP73和GPC－3單項檢測PHC的特異性分別為90.0%，86.7%，83.3%，兩兩指標(biāo)聯(lián)合檢測PHC的陽性率可提高至82.3%、85.3%和88.2%，兩兩指標(biāo)聯(lián)合檢測的特異性分別為80.0%，76.7%，73.3%，3項指標(biāo)聯(lián)合檢測PHC的陽性率可高達91.2%，明顯高于單項檢測率（P＜0.05），見表3。

3 討論

作為臨床預(yù)測PHC疾病發(fā)生的重要實驗室指標(biāo)，AFP－L3已得到美國FDA的認可逐漸應(yīng)用于肝癌疾病的早期篩查方面［3－6］。有較多臨床研究也證實，AFP－L3在早期診斷PHC和良惡性肝硬化結(jié)節(jié)鑒別診斷方面發(fā)揮著重要的作用［7，8］，且相關(guān)研究還發(fā)現(xiàn)，肝臟出現(xiàn)異常病理改變之前，AFP－L3%即出現(xiàn)明顯升高表現(xiàn)［9］。還有部分研究結(jié)果實，AFPL3在早期診斷PHC和良惡性肝硬化結(jié)節(jié)鑒別診斷方面發(fā)揮著重要的作用［7，8］，且相關(guān)研究還發(fā)現(xiàn)，肝臟出現(xiàn)異常病理改變之前，AFP－L3%即出現(xiàn)明顯升高表現(xiàn)［9］。還有部分研究結(jié)果顯示，PHC患者的血清AFP－L3表達陽性率可高達60%，而非PHC的慢性肝臟疾病患者其血清AFP－L3表達陽性率小于5%［10］。部分肝癌細胞分化程度不佳的PHC患者AFP－L3%顯著性升高，而在慢性肝臟疾病患者中則無明顯改變［3］，故認為AFP－L3可用于鑒別診斷血清AFP水平過高的慢性肝臟疾病以及PHC。有研究人員發(fā)現(xiàn)［5，6］，經(jīng)積極抗腫瘤治療且AFP－L3%明顯降低的PHC患者，其3年生存率和治療后復(fù)發(fā)率均明顯高于AFP－L3%未出現(xiàn)明顯降低的PHC患者，故AFP－L3也可作為評估抗腫瘤治療效果和預(yù)測患者預(yù)后情況的有效實驗室指標(biāo)。Yoshida等研究人員將AFP－L3（%）＞15%視為陽性結(jié)果［7］，發(fā)現(xiàn)AFP－L3與PHC病情分期及肝癌直徑等有著密切的相關(guān)性，故本研究也將其作為陽性診斷標(biāo)準。

表3 AFP－L3、GP73和GPC－3單一和聯(lián)合檢測PHC陽性率比較

有研究認為GP73與PHC有著極為密切的相關(guān)性，在動物實驗中還發(fā)現(xiàn)，肝癌模型動物的血清GP73表達水平明顯高于其他動物［8］。GP73臨床診斷慢性肝臟疾病的特異性和靈敏性可高達74%和95%，其診斷價值明顯優(yōu)于AFP等其他臨床常用指標(biāo)［9］。還有臨床研究也證實，PHC患者血清GP73表達水平明顯高于其他各組肝臟患者及正常對照組，其診斷特異性和敏感性可達到69%和75%［11］。

GPC3則是近些年發(fā)現(xiàn)的肝癌特異性標(biāo)志［12，13］。國外相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)［14］，HCC患者血清中可檢測出可溶性GPC3的表達，其表達水平明顯高于肝硬化患者和正常對照組，檢測的敏感度也明顯高于AFP。GPC3診斷直徑＜3cm肝癌患者可高達76%的陽性率，而在肝硬化結(jié)節(jié)中表達水平極低，此指標(biāo)有助于鑒別良惡性腫瘤病變［15，16］。GPC－3在HCC患者中表達水平較高的原因可能是肝細胞惡性病變使得胚胎表達GPC－3的現(xiàn)象重復(fù)出現(xiàn)；或參與HCC中上調(diào)生長因子及其受體間的相互作用，最終導(dǎo)致肝細胞發(fā)生惡性病變［17，18］，GPC－3作為特異性的HCC標(biāo)志物已得到研究人員的廣泛認同。

本研究結(jié)果顯示，AFP－L3、GP73和GPC－3在PHC組患者肝組織及血清中的表達水平均明顯高于其他各組（P＜0.05），3項標(biāo)志物（AFP－L3、GP73和GPC－3）單項檢測PHC的陽性率分別為70.6%、76.5%、79.4%，兩兩指標(biāo)聯(lián)合檢測PHC的陽性率可提高至82.3%、85.3%和88.2%，3項指標(biāo)聯(lián)合檢測PHC的陽性率可高達91.2%，明顯高于單項檢測率（P＜0.05）。綜上所述，AFP－L3、GP73和GPC－3聯(lián)合檢測可明顯提高PHC的診斷陽性率，對早期診斷PHC具有十分重要的臨床價值。

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The clinical value of GP73，AFP－L3 combined GPC－3 detection with in the diagnosis of primary hepatic carcinoma

YAN Wen－qiang，XIE Ming－shui，LIU Yang.
（Department of Laboratory，the Central Hospital of Suizhou Affiliated to Medical College of Hubei，Suizhou441300，China）

ObjectiveTo investigate the clinical value of Golgi protein 73（GP73），alpha fetoprotein heterogeneity 3（AFP－L3）combined Glypican－3（GPC－3）detection with in the diagnosis of primary hepatic carcinoma.Methods The expression levels of GP73，AFP－L3and GPC－3in liver tissue and serum of primary hepatic carcinoma（group PHC，n＝34），liver cirrhosis（group LC，n＝25）and viral hepatitis（group VH，n＝27）patients were detected by immunohistochemical and enzyme immunoassay.At the same period，30cases of normal examination were selected as control group.The expression levels of GP73，AFP－L3and GPC－3in liver tissue and serum of all groups were observed，and compared the positive rate of GP73，AFP－L3，GPC－3single detection and combined detection to primary hepatic carcinoma.Results The expression levels of GP73，AFP－L3and GPC－3in the liver tissue and serum of PHC group were significantly higher than that of other groups（P＜0.05）.The single test positive rate of AFP－L3，GP73and GPC－3were 70.6%，76.5%，79.4%to PHC，two indicators combined detection of PHC were 82.3%，85.3%and 88.2%，3indicators combined detection of PHC was 91.2%.The rate of 3indicators combined detection was higher than that of single indicator（P＜0.05）.Conclusion The combined detection of AFP－L3，GP73and GPC－3could improve the positive rate of PHC.It had an important clinical significance for early diagnosis of PHC.

Golgi protein 73；Alpha fetoprotein heterogeneity 3；Glypican－3；Primary hepatic carcinoma；Hepatitis B virus；Liver cirrhosis

R735.7

A

2014－08－23）

1007－4287（2015）10－1651－04

吳階平醫(yī)學(xué)基金會（LDWMF－SY－2011C011）

＊通訊作者